放NO以 保持血管恒定的舒张状态并具有抑制白细胞浸润和血小板的凝聚作用，防止血栓形成；NO 能抑制血管平滑肌增殖，减少胶原纤维和弹力纤维生成，维持血管正常结构和功能；NO是 维持冠状血管舒张的重要物质，能预防心肌肥厚和心肌间质纤维化的发生。瓜萎皮提取物 能保护血管内皮细胞，促进NO释放，因而保护血管防治心血管疾病发生。
[0107] 由表5和图3,可看出空白组血清中NO的含量最高；LDL组受损后血清中NO的含 量最低；EPT(X)组、EPT(Y)组和EPT(Z)组被LDL损伤，但都给予了相应的药物处理，因此血 清中NO含量均介于空白组与LDL损伤组间，其中EPT (Y)组保护效果最好。
[0108] 综上所述，瓜萎皮氯仿萃取物中用氯仿与甲醇1 : 1过柱后的部分对血管保护作 用最好，说明瓜萎皮对血管保护作用的有效部位在用氯仿与甲醇I : 1过柱后的组份中。 [0109] 实施例4
[0110] 1、四级中药瓜萎皮提取物的制备
[0111] 将实施例3中氯仿与甲醇按I : 1配比获取的三级中药瓜萎皮提取物过薄层色 谱板得到不同组份，测定不同组份的Rf值，得到Rf值为0. 4、0. 6、0. 8的三个部分（四级中 药瓜萎皮提取物），存放于冰箱待用
[0112] 2、动物实验部分
[0113] 将40只SD大鼠随机分为五组，每组8只大鼠：
[0114] ①Control组：空白对照组，用生理盐水（4ml/kg)每天灌胃1次，连续5天，于第 4天，尾部静脉注射生理盐水（4ml/kg)以作为对照组；
[0115] ②LDL组：LDL损伤组，生理盐水（4ml/kg)每天灌胃1次，连续5天，于第4天，尾 部静脉注射LDL (4mg/kg)以复制LDL损伤大鼠模型；
[0116] ③EPT (X)组：Rf值为0. 4的层析物+LDL组，以浓度为0.0 lg/ml的层析洗脱部分 (4ml/kg)每天灌胃1次，连续5天，提取物灌胃第四天尾部静脉注射LDL(4mg/kg);
[0117] ④EPT (Y)组：Rf值为0. 6的层析物+LDL组，处理过程同③；
[0118] ⑤EPT⑵组：Rf值为0.8的层析物+LDL组，处理过程同③。
[0119] 3、取血法
[0120] 将大鼠用25%乌来糖腹腔麻醉后，固定在鼠板上，切开大鼠颈部皮肤，用玻璃分针 分离一侧颈总动脉，用动脉夹夹住近心端，远心端用线结扎，用眼科剪剪一 V型切口，插入 动脉导管，用试管取血6ml，离心5分钟（3000r/min)，取上清液冷冻待检测。
[0121] 4、血清中NO的含量的检测
[0122] 机体中NO释放后很快转变成代谢产物NO3-和NO 2_，以镉粉将NO3-还原成NO 2_， N02_通过Griess重氮反应生成有色化合物，再用722分光光度计540nm处测定，然后根据 公式计算出NCT含量以此来反应血清中NO含量。
[0123] 5、实验数据处理
[0124] 实验数据以均数土标准差（I 土 S)表示，组间比较采用t检验，双侧P < 0. 05认 为有统计学意义。
[0125]6、实验结果如表6以及图4所示：
[0126] 表6瓜萎皮提取物（EPT)对SD大鼠血清中NO含量（ng/ml)的影响
[0127]
[0128] 7、讨论与结论
[0129] 瓜萎皮提取物能促进NO释放，因而保护血管防治心血管疾病发生。血管内皮细胞 持续不断地释放NO以保持血管恒定的舒张状态并具有抑制白细胞浸润和血小板的凝聚作 用，防止血栓形成；NO能抑制血管平滑肌增殖，减少胶原纤维和弹力纤维生成，维持血管正 常结构和功能；NO是维持冠状血管舒张的重要物质，能预防心肌肥厚和心肌间质纤维化的 发生。
[0130] 由表6以及图4,可看出空白组血清中NO的含量最高；LDL组受损后血清中NO的 含量最低；EPT (X)组、EPT (Y)组和EPT (Z)组被LDL损伤，但都给予了相应的药物处理，因此 血清中NO含量均介于空白组与LDL损伤组间，其中EPT (Y)组效果最好。
[0131] 结论，三级中药瓜萎皮提取物过薄层色谱板后得到Rf值为0. 6的提取物部分对血 管保护作用最好，说明瓜萎皮对血管保护作用的有效部位在此组份中。
[0132] 相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明通过将中药瓜 萎皮经过70%的乙醇提取，提取物再用氯仿萃取，萃取物再用氯仿与甲醇按（I : 1)过玻璃 层析柱，过柱物再过薄层色谱板得到Rf?值为0. 6的提取物部分对血管有明显的保护作用， 说明对血管有保护作用的有效成分可通过此方法提取优化。目前瓜萎皮的提取有很多方 法，也证明其化学成分主要包括油脂、有机酸类，留醇、三萜及其苷类，蛋白质、氨基酸类及 微量元素等，但很多成分不知有何作用和功效。通过此方法"提取-实验验证-提取-实验 验证"逐级筛选出药物有效成分一定具有保护血管，预防和治疗心脑血管相关疾病的作用。 有此方法可通过工厂程序化的提取瓜萎皮的有效部位研发并生产出作用好疗效高的新药， 减轻心脑血管疾病对人类的危害，造福社会。
[0133] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将中药瓜萎皮饮片20kg粉碎加入其两倍量的水，煎煮水减半后过滤去渣，所得溶 液用DlOl大孔树脂IOkg吸附，用质量百分浓度为70%的乙醇3000ml洗脱，抽滤掉大孔树 月旨，将溶液加热去除掉多余溶剂，加热浓缩至300ml得到一级中药瓜萎皮提取物。2. 如权利要求1所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，所述提取方法中， 在步骤（1)之后还包括步骤： (2) 将步骤（1)得到的一级瓜萎皮提取物用有机溶剂300ml萃取，在旋转蒸发仪中蒸发 掉有机溶剂，得到二级中药瓜萎皮提取物。3. 如权利要求2所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，在步骤（2)中，所 述有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯和正丁醇中的至少一种。4. 如权利要求3所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，在步骤（2)中，所 述有机溶剂为氯仿。5. 如权利要求4所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，所述提取方法中， 在步骤（2)之后还包括步骤： (3) 将步骤（2)中得到的二级中药瓜萎皮提取物用有机溶剂300ml过玻璃层析柱，得到 二级中药瓜娄皮提取物。6. 如权利要求5所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，在步骤（3)中，所 述有机溶剂为纯氯仿，按质量比1 : 1配比的氯仿与甲醇的混合液，或者按质量比1 : 10 配比的氯仿与甲醇的混合液。7. 如权利要求6所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，在步骤（3)中，所 述有机溶剂为按质量比I:1配比的氯仿与甲醇的混合液。8. 如权利要求7所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，所述提取方法中， 在步骤（3)之后还包括步骤： (4) 将步骤（3)中得到的三级中药瓜萎皮提取物过薄层色谱板，获取Rf = 0. 4层析物、 Rf = 0. 6层析物以及Rf = 0. 8层析物，得到四级中药瓜萎皮提取物。9. 如权利要求8所述的中药瓜萎皮提取物的提取方法，其特征在于，在步骤（4)中，所 述三级中药瓜萎皮提取物过薄层色谱板后，获取Rf = 0. 6层析物，得到中药瓜萎皮提取物 的终产物。10. 权利要求1~9任一项所述的中药瓜萎皮提取物在血管保护方面的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种中药瓜蒌皮提取物的提取方法及其应用，将粉碎中药瓜蒌皮饮片加入其两倍量的水，煎煮过滤去渣，所得溶液用大孔树脂吸附，再用质量百分浓度为70％的乙醇洗脱，抽滤掉大孔树脂，将溶液中多余溶剂去除掉，得到一级提取物；一级提取物用有机溶剂萃取，蒸发掉有机溶剂，得到二级提取物；二级提取物用有机溶剂过玻璃层析柱，得到三级提取物；最后，将三级提取物过薄层色谱板，获取Rf＝0.4层析物、Rf＝0.6层析物以及Rf＝0.8层析物，得到四级提取物。上述各级提取物对血管具有很好的保护作用，并且效果逐渐优化。
【IPC分类】A61K36/428, A61K131/00, A61P9/14
【公开号】CN104971085
【申请号】CN201510001161
【发明人】谭斌, 刘思妤, 彭忠禄, 谷彬
【申请人】谭斌
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年1月5日