一种稳定的蜂毒凝胶剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种凝胶制剂及其制备方法，特别涉及一种蜂毒凝胶制剂及其制备方 法，属于药物技术领域。
【背景技术】
[0002] 目前，非留体类药物配合留体类药物是治疗风湿性和类风湿性关节炎的主要措 施，这些药物可以短期抑制炎症发展和减轻症状，但不能收到长期效果。而且，长期应用这 些药物会引起胃肠溃疡、肾脏受损等一系列副作用。
[0003] 中医蜂针疗法历史悠久，特别是对于治疗风湿、类风湿性关节炎、肩周炎等疾病具 有较好的治疗效果，有起效快，疗效可靠，耐受性好等特点。蜂毒是工蜂毒腺和副腺分泌出 的具有芳香气味的淡黄色透明毒液，是有多种药理学和生物学活性的复杂混合物，主要具 有抗炎、降压、镇痛、抗病毒作用。蜂毒治疗风湿性关节炎和类风湿性关节炎，展现出了显著 的优势。
[0004] 蜂毒中的单体多肽是抗炎的主要成分，其中，蜂毒肽是迄今为止人类所知的抗炎 活性最强的物质之一，具有类激素样的作用，但无激素的不良反应。蜂毒镇痛作用特别显 著，尤其是对慢性疼痛更为有效。蜂毒肽对前列腺素合成酶的抑制作用是吲哚美辛的70 倍，故有较好的镇痛抗炎作用，镇痛强度为吗啡的40 %，是安替比林的68倍，镇痛作用的持 续时间亦较长，但无水杨酸类对消化道的刺激和留体类的免疫抑制作用。蜂毒肽还能抑制 白细胞转移，降低毛细血管的通透性，抑制前列腺素E2的合成，并能兴奋肾上腺皮质功能， 从而抑制了局部的炎症反应。多肽及蛋白质类大分子药物稳定性差、易于被酶降解、故生物 半衰期短；而扩散差、分配系数小，又使其难以通过生物屏障皮肤。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于公开一种蜂毒凝胶制剂，本发明另一目的在于公开蜂毒凝胶 的制备方法。
[0006] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：
[0007] 本发明所述凝胶由以下重量配比的原料制成：
[0008]
[0010] 本发明所述凝胶优选以下重量配比的原料制成：
[0011]
[0014] 所述的水凝胶基质材料选自：羧甲基纤维素钠。
[0015] 所述的表面活性剂选自：十二烷基硫酸钠（SDS)。
[0016] 所述的保湿剂选自：丙二醇。
[0017]所述的防腐剂选自：尼泊金类。
[0018] 所述的溶剂选自：水。
[0019] 所述的蜂毒凝胶剂制备方法，包括以下步骤：将蜂毒溶于表面活性剂和水相中，制 得蜂毒凝胶的水相；再将防腐剂溶于保湿剂中，制得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶 的水相缓慢加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀，放入凝胶基质材料即得蜂毒凝胶。
[0020] 本发明凝胶可以抑制蜂毒肽的降解，稳定性好，具有抗炎镇痛，抗菌抗病毒功能， 可以显著抑制炎症反应，尤其适于风湿、类风湿性关节炎等炎症疾病。本发明蜂毒凝胶制剂 相对于现有技术具有如下有益效果：
[0021] (1)蜂毒主要活性成分为多肽类物质，多肽在凝胶中不稳定性，12h以后降解较 快，本发明制备出了一种稳定的蜂毒凝胶剂，蜂毒肽在凝胶中不易降解，保证了药效。
[0022] (2)微针与蜂毒凝胶剂联合作用，对大鼠痛风性关节炎炎症模型有疗效。
[0023] (3)本发明所制备的稳定的蜂毒凝胶剂制备方法简单易行，有利于工业化生产。
【附图说明】
[0024] 图1蜂毒凝胶中蜂毒肽6个月加速稳定性。
[0025] 图2大鼠踝关节及其周围组织的病理改变，A-正常组，B-模型组，C-阳性组，D-蜂 毒组。
[0026] 图3微针-蜂毒凝胶对大鼠踝关节肿胀度的影响。
[0027] 图4微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠血清NO的影响。
[0028] 图5微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠肝脏、脾脏、滑膜中NO的影响。
[0029] 图6微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠TNF-a的影响。
[0030] 图7微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠IL-I 0的影响。
[0031] 图8微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠C0X-2的影响。
【具体实施方式】
[0032] 下列实验例（试验用药均按照实施例1方法制备）和实施例用于进一步说明但不 限于本发明。
[0033] 实验例1
[0034] 将蜂毒凝胶置于恒温恒湿箱（30°C ±2°C、65% ±5%)中，考察0、1、2、3、6月蜂毒 肽的含量，平行5份，并观察蜂毒凝胶的外观、形状、含量等是否稳定。蜂毒凝胶中的蜂毒肽 三个月内稳定，RSD均小于3%。蜂毒凝胶外观为半透明的无色半固体物质，均匀，在放置过 程中均未出现变色、相分离，异臭，酸败现象等。（图1)
[0035] 实验例2
[0036] 大鼠痛风性关节炎模型的建立：SD大鼠，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，仰卧固定， 将5 %尿酸钠溶液（0. 2g尿酸钠，充分研细，加入4mL无菌生理盐水，配成5 %尿酸钠混悬 液，无菌操作）〇.2mL注入大鼠右后足内踝的关节腔内（大鼠右后踝关节屈曲，用手触摸可 扪及两骨突部，碘伏消毒后，用5号注射针在右后侧踝关节背侧插入胫骨肌腿内侧，将混悬 液注入到踝关节腔，伸曲、旋转运动2min)，即可。每个动物仅注射1次。观察大鼠活动明显 减少，行走表现为明显的三足步态，即造模成功。
[0037] 动物分组：将大鼠分为4组，每组8只，随机分成正常组（等容量生理盐水）、模型 组（等容量生理盐水）、阳性组（地塞米松I. 8mg/kg，750 ym微针以约ION的力作用3min)、 蜂毒组（蜂毒I. 5mg/kg，750 y m微针以约ION的力作用3min)。
[0038] 给药方法：各组大鼠提前12h剃去背部皮肤，形成无毛区域，除正常组外，其余三 组按照相应微针条件作用于大鼠背部皮肤，微针作用后分别均匀涂抹生理盐水、醋酸地塞 米松乳膏及蜂毒凝胶至给药浓度，给药〇. 5h后，分别于24h、30h换药治疗。模型组只造模， 不治疗，空白对照组用无菌生理盐水代替。
[0039] 造模后0,5,24,30,48h用缚线法测取右后足内踝关节同一部位周径，计算肿胀 率：
[0040] 肿胀率（％)=(致炎后踝关节周径-致炎前踝关节周径）/致炎前踝关节周 径 X 100% 〇
[0041] 造模后48h用体积分数10%水合氯醛腹腔注射麻醉后腹主动脉取血，室温下放置 Ih后，3 500r/min离心20min，取上清-80°C冰箱冻存待测。
[0042] 肝、脾匀浆制备，取出肝脏、脾脏称重，按1:9比例加生理盐水稀释，匀浆，4°C条件 下12000r/min离心30min，取上清液，分装于印管中，于-80°C冰箱保存待测。
[0043] 肿胀组织炎症因子的测定：以右后肢踝关节为中心上下0. 5cm处剪断，剪去脚爪， 在盛有5mL生理盐水的小烧杯中剥去皮肤，剪开关节周围组织，将液体和组织一同移至试 管，振荡l〇min，浸泡lh，4°C条件下12000r/min离心30min，取上清液，分装于ep管中， 于-80°C冰箱保存待测。
[0044] 采用ELISA法和比色法测定IL-I 0、TNF_ a、C0X_2及NO水平，严格按照试剂盒说 明书进行。
[0045] 取受试关节及周围软组织，经10%福尔马林固定，脱钙液脱钙，梯度酒精脱水，常 规石蜡包埋，5 ym纵向切片，HE染色，光镜观察踝关节及其周围软组织、滑膜上皮、炎症细 胞浸润等情况。（见图2-图8)微针-蜂毒凝胶对大鼠踝关节肿胀度的影响，结论：与模型 组比较，#P〈〇. 01。微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠血清NO的影响，
[0046] **P〈0. 01，与模型组比较。微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠肝脏、脾脏、滑膜中 NO的影响，结论：与模型组比较，**P〈0. 01。微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠TNF-a的 影响，结论：与模型组比较，**P〈〇. 01。微针蜂毒凝胶对痛风性关节炎大鼠IL-I 0的影响， 结论：与模型组比较，#P〈〇. 01。
[0047] 实施例1
[0048]
[0049] 将蜂毒溶于表面活性剂十二烷基硫酸钠，水溶剂中，制得蜂毒凝胶的水相；再将防 腐剂尼泊金类溶于保湿剂丙二醇中，制得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶的水相缓慢 加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀；放入凝胶基质材料羧甲基纤维素钠，即得蜂毒凝胶 1000 g0
[0050] 实施例2
[0051]
[0053] 将蜂毒溶于表面活性剂十二烷基硫酸钠，水溶剂中，制得蜂毒凝胶的水相；再将防 腐剂尼泊金类溶于保湿剂丙二醇中，制得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶的水相缓慢 加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀；放入凝胶基质材料羧甲基纤维素钠，即得蜂毒凝 胶。
[0054] 实施例3
[0055]
[0056] 将蜂毒溶于表面活性剂十二烷基硫酸钠，水溶剂中，制得蜂毒凝胶的水相；再将防 腐剂尼泊金类溶于保湿剂丙二醇中，制得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶的水相缓慢 加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀；放入凝胶基质材料羧甲基纤维素钠，即得蜂毒凝 胶。
【主权项】
1. 一种蜂毒凝胶，其特征在于，该凝胶由以下重量配比的原料制成： 蜂毒 1重量份 水凝胶基质材料 10-20重量份 表面活性剂 1-2重量份 保湿剂 70-120重量份 防腐剂 0.1-0.3重量份 溶剂 600-900重量份； 所述的水凝胶基质材料选自：羧甲基纤维素钠； 所述的表面活性剂选自：十二烷基硫酸钠； 所述的保湿剂选自：丙二醇； 所述的防腐剂选自：尼泊金类； 所述的溶剂选自：水。2. 如权利要求1所述的蜂毒凝胶，其特征在于，该凝胶由以下重量配比的原料制成： 蜂毒 1重量份 水凝胶基质材料 15重量份 表面活性剂 1重量份 保湿剂 100重量份 防腐剂 0.1重量份 溶剂 880重量份。3. 如权利要求1所述的蜂毒凝胶，其特征在于，该凝胶由以下重量配比的原料制成： 蜂毒 1重量份 水凝胶基质材料 12重量份 表面活性剂 1.5重量份 保湿剂 80重量份 防腐剂 0.2重量份 溶剂 800重量份。4. 如权利要求1所述的蜂毒凝胶，其特征在于，该凝胶由以下重量配比的原料制成： 蜂毒 1重量份 水凝胶基质材料 18重量份 表面活性剂 1重量份 保湿剂 110重量份 防腐剂 0.1重量份 溶剂 900重量份。5. 如权利要求1-4任一所述的蜂毒凝胶，其特征在于，该凝胶由如下方法制成： 将蜂毒溶于表面活性剂和水相中，制得蜂毒凝胶的水相；再将防腐剂溶于保湿剂中，制 得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶的水相缓慢加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀， 放入凝胶基质材料即得。6. 如权利要求1-4任一所述的蜂毒凝胶的制备方法，其特征在于该方法为： 将蜂毒溶于表面活性剂和水相中，制得蜂毒凝胶的水相；再将防腐剂溶于保湿剂中，制 得蜂毒凝胶的有机相；然后将蜂毒凝胶的水相缓慢加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀， 放入凝胶基质材料即得蜂毒凝胶。
【专利摘要】本发明公开一种稳定的蜂毒凝胶剂及其制备方法。该凝胶剂制备工艺包括以下步骤：将蜂毒溶于水相材料与表面活性剂的混合物中，制得蜂毒凝胶的水相。再将防腐剂溶于保湿剂中，制得蜂毒凝胶的有机相。然后将蜂毒凝胶的水相缓慢加入到蜂毒凝胶的有机相中，混合均匀，放入凝胶基质材料，即得蜂毒凝胶。本发明制备的蜂毒在凝胶中稳定，不易降解且药效确切。
【IPC分类】A61P19/02, A61P29/00, A61K9/06, A61K35/64
【公开号】CN104971076
【申请号】CN201510268068
【发明人】陆洋, 杜守颖
【申请人】北京中医药大学
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年5月25日