毛木耳多糖提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及毛木耳多糖提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤产品中的应用。
【背景技术】
[0002] 肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，对来自体内和体外的许多非营养性物 质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用，通过新陈代谢将它们彻 底分解或以原形排出体外。进入体内的酒精90%在肝脏代谢，酒精对肝脏有直接损害作 用，其损伤机理是由酒精在肝细胞内代谢引起的。如果长期过度饮酒，可使肝细胞反复发 生脂肪变性、坏死，最终发展为酒精性肝炎和酒精性肝硬化，严重者危及生命安全。对于预 防和治疗酒精性肝损伤，除了戒酒之外，还应多食用一些富含高蛋白、维生素和抗氧化的食 物，增加对肝脏的保护。
[0003] 毛木耳，学名（Auricularia Polytricha)又称白背毛木耳，属于担子菌门、层菌 纲、木耳目、木耳科、木耳属中的毛木耳种。毛木耳富含蛋白质、多种矿物质元素和维生素， 干品中氨基酸的总量为4. 68%，有多种人体必需的氨基酸，占所含氨基酸总量的42. 31%。 毛木耳含有丰富的多糖，有文献报道，毛木耳多糖对心血管系统有一定的影响作用，同时具 有增强机体免疫、抗氧化、抗衰老、保护机体细胞、改善心脏功能、抑制肿瘤、抗癌等广泛的 药理作用，在食疗保健方面日益为人们所重视。开发毛木耳的深加工产品可以改善毛木耳 在目前市场上低廉的地位，增加产品的附加值，将农业产品向保健食品方向发展。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何缓解酒精性肝损伤。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供了下述A或B的应用：
[0006] A、毛木耳多糖提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤广品中的应用；
[0007] B、毛木耳多糖提取物在制备缓解酒精性肝损伤产品中的应用；
[0008] 所述毛木耳多糖提取物由下述方法制备：用乙醇沉淀毛木耳子实体水提液，收集 沉淀，得到所述毛木耳多糖提取物；所述毛木耳子实体水提液是用水从毛木耳子实体中提 取出来的水溶性物质。
[0009] 上述应用中，所述乙醇可为无水乙醇。
[0010] 上述应用中，所述收集沉淀可采用离心的方法进行，所述离心的条件可为 6000g-15000g离心20-30分钟，如6000g离心20分钟。
[0011] 上述应用中，所述沉淀经干燥得到所述毛木耳多糖提取物。所述干燥可在60-70°C 进行，具体可为60°C。
[0012] 上述应用中，所述毛木耳子实体水提液按照包括如下步骤的方法制备：用水浸泡 粉碎后的毛木耳子实体8-12小时（如8小时），加热至90-100°C (如90°C，或使水沸腾） 保持3-4小时（如4小时），收集水溶性物质，该水溶性物质即为所述毛木耳子实体水提液。
[0013] 上述应用中，所述用水浸泡粉碎后的毛木耳子实体可采用4_25°C(如4°C)的水。
[0014] 上述应用中，所述水可为去离子水。
[0015] 上述应用中，所述毛木耳子实体可为新鲜的子实体也可为干燥的子实体。
[0016]上述应用中，所述毛木耳子实体和水的质量比可为I :(25-60)，如1 :25,所述毛木 耳子实体的质量为干重。
[0017] 上述应用中，粉碎后的毛木耳子实体的粒径可为100目-1cm，如100目。
[0018] 上述毛木耳子实体可为新鲜的子实体也可为干燥的子实体。
[0019] 上述干燥的子实体是将新鲜的毛木耳子实体在常温（如20-25°C)下干燥得到的。
[0020] 上述应用中，所述收集水溶性物质可采用离心的方法进行，所述离心采用的离心 力可为6000g-15000g (如6000g)，离心时间可为20-30分钟（如30分钟）。
[0021] 上述应用中，所述缓解酒精性肝细胞损伤为下述1)-5)中的至少一种：
[0022] 1)提高肝细胞的存活率；
[0023] 2)降低肝细胞内的甘油三酯含量；
[0024] 3)降低肝细胞内的活性氧含量；
[0025] 4)降低肝细胞对谷丙转氨酶的释放量；
[0026]5)降低肝细胞对谷草转氨酶的释放量；
[0027] 所述缓解酒精性肝损伤为下述1) -5)中的至少一种：
[0028] 1)提高肝细胞的存活率；
[0029] 2)降低肝细胞内的甘油三酯含量；
[0030] 3)降低肝细胞内的活性氧含量；
[0031] 4)降低肝细胞对谷丙转氨酶的释放量；
[0032]5)降低肝细胞对谷草转氨酶的释放量。
[0033] 上文中，所述酒精性肝细胞损伤具体可为人酒精性肝细胞损伤，所述酒精性肝损 伤具体可为人酒精性肝损伤。所述肝细胞具体可为L-02细胞。
[0034] 实验证明，采用本发明的方法制备的毛木耳多糖提取物中多糖浓度低于50 y g/mL 时对于L-02细胞无细胞毒性，能够提升酒精性损伤L-02细胞的存活率，具有保肝的作用， 可用于缓解酒精性肝细胞损伤。当培养液中毛木耳多糖提取物中多糖浓度为40 y g/mL时， 治疗组L-02细胞存活率最高，可以达到84. 79%，比损伤模型组（细胞存活率为47. 39% ) 的细胞存活率提高37. 4%。毛木耳多糖提取物可以有效地降低L-02细胞内TG和ROS的含 量，使治疗组与损伤模型组能够形成统计学上显著性差异（P〈〇. 05)。同时，毛木耳多糖提 取物还可以减少L-02细胞损伤，降低胞内酶ALT和AST的释放，保护L-02细胞的完整性， 具有保肝的作用。治疗组L-02细胞内的TG含量（617±52ymol/mg蛋白质）比损伤模型 组（2627±11 ymol/mg蛋白质）降低了 76. 51% ;治疗组L-02细胞内的ROS的平均荧光强 度（5258±582)比损伤模型组（10548±319)降低了 50. 15%;治疗组L-02细胞释放的ALT 含量（10628±437U/mg蛋白质）比损伤模型组（16544±468U/mg蛋白质）降低了 35. 76%; 治疗组L-02细胞释放的AST含量（6389±374U/mg蛋白质）比损伤模型组（15072±579U/ mg蛋白质）降低了 57. 61%。
【附图说明】
[0035] 图1为不同浓度乙醇对L-02细胞活性的影响。
[0036] 图2为毛木耳多糖提取物的细胞毒性检测。
[0037] 图3为毛木耳多糖提取物保护酒精性损伤L-02细胞的效果图。图中损伤组为损 伤模型组，10、20、30、40、50分别为1-5号含乙醇和毛木耳多糖提取物的培养液的治疗组。
[0038] 其中，图2中的多糖浓度为毛木耳多糖提取物中的多糖在培养液中的终浓度。
【具体实施方式】
[0039] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0040] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0041] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042]下述实施例中的毛木耳（Auricularia polytricha(Mont. ) Sacc. ) 3 号（赵爽 等.毛木耳菌丝体产多糖发酵条件的优化.食品科技.2012年第37卷第4期）公众可从 北京市农林科学院获得该菌种，以重复本申请实验。
[0043] 下述实施例中的L-02细胞株（人肝细胞）为中国医学科学院肿瘤细胞库的产品。
[0044] 下述实施例中的RPMI 1640培养液为Invitrogen公司产品，产品目录号为 11875-093。
[0045] 下述实施例中的BCA蛋白定量试剂盒为北京博迈德生物技术有限公司产品，产品 目录号为PP0103。
[0046] 下述实施例中的组织甘油三酯测定试剂盒为北京普利莱基因技术有限公司产品， 产品目录号为E1013。
[0047] 下述实施例中的组织内活性氧测定试剂盒为北京普利莱基因技术有限公司产品， 产品目录号为C1300。
[0048] 下述实施例中