专利名称：葛藤多糖提取物的制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种葛藤多糖提取物及其制备方法和用途，特指具有抗氧化作用的葛
藤多糖提取物，属于保健食品技术领域。
背景技术：
野葛为豆科多年生落叶藤本植物，兼具药食两用价值。中国药典收载的葛根系野 葛的干燥根，在我国分布很广，除西藏和新疆外，其余各省区均有分布，其药用最早记载于 《神农本草经》。葛根含有多种活性成分，其中以葛根素、大豆苷和大豆苷元等异黄酮类成分
为主，葛根素可用于治疗心血管疾病、心绞痛和心率失常等疾病，大豆苷和大豆苷元可用于 治疗和预防妇女疾病。目前我国野葛的研究和开发都集中在葛根与葛花部位，而对葛藤的 研究少，且对葛藤的研究主要针对异黄酮类成分，对多糖等其它活性成分及生物活性的研 究少。葛藤为葛藤茎和葛叶，为农业废弃物，目前还未得到开发利用。葛藤含有多种活性成 分，主要包括黄酮类、多糖、挥发油、维生素和矿物质等。关于葛藤异黄酮的研究已有专利报 道。中国专利CN1769278A于2006年5月10日公开了"从葛藤中提取分离异黄酮的方法"， 从葛藤中分离的总黄酮提取物为葛根素和大豆苷元。中国专利CN1723989A于2006年1月 25日公开了"葛藤提取物、制备方法及用途"，该提取物主要成分为葛藤总黄酮，用于治疗妇 女更年期综合症药物。中国专利CN1911923A于2007年8月23日公开了"一种从葛藤中 提取、分离大豆苷元的方法"。本发明人采用反相高效液相法同时测定江苏茅山地区野葛的 根、茎和叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量(RP-HPLC法同时测定野葛的根、茎和叶中 葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量，食品科学，2009， 30 (14) :248-252)，结果表明，葛藤中葛 根素、大豆苷和大豆苷元含量均远低于葛根中的含量，可见葛藤中异黄酮的开发利用价值 低。多糖是构成生命的四大基本物质之一，且有多种生物活性。但有关葛藤多糖及其制备 方法和用途至今未见国内外报道，也未见相应专利公开。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上背景技术的不足，提供一种葛藤多糖提取物及其制 备方法和用途。 用本发明制备的多糖提取物，多糖含量大于30%，收率在7. 0 10%之间。
制备本发明的多糖提取物包括下述步骤
A、葛藤粉碎；其中葛藤粉碎至60 150目。 B、多糖提取；以8 20倍量的水提取，在60 IO(TC的温度下回流提取2 4h， 提取2 4次。C、提取液离心；离心速度为3000 4000r/min。 D、离心后液取上清液浓縮至一定浓度，浓縮的倍数为8 20倍；加入乙醇沉淀，使
得多糖的浓縮液中乙醇浓度为60 85%，再离心或过滤法去除不溶物； E、上清液进行二次乙醇沉淀，条件同步骤D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷冻干燥法，干燥16 30h。 葛藤多糖含量以苯酚_硫酸法测定。 采用清除羟基自由基、超氧自由基试验考察葛藤多糖抗氧化活性。结果表明葛藤 多糖具有很好的抗氧化活性，因此本发明的多糖提取物可用于制备抗氧化的功能性食品。
本发明的优点本发明的葛藤多糖提取物制备方法简便，可制备成抗氧化的功能 性食品；同时该发明可变废为宝，提升葛根副产品的附加值，提高葛根资源的综合利用率。
具体实施例方式
为了更清楚地说明本发明内容，用具体实施例说明如下，具体实施例不限定本发 明内容范围。 葛藤多糖的制备
实施例1 取葛藤样品100g，葛藤粉碎至60目，以8倍量的水于6(TC回流提取2次，每次 2小时，以3000r/min离心，水提液浓縮至100mL，浓縮液用100mL60 %乙醇醇沉，静置过 夜，抽滤，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥16h得到葛藤多糖提取物7. 23g，其多糖含量为 30. 29%，收率为7. 23%。
实施例2 取葛藤样品100g，葛藤粉碎至100目，以15倍量的水于8(TC回流提取3次，每次 3小时，以3600r/min离心，水提液浓縮至100mL，浓縮液用100mL75%乙醇醇沉，静置过夜， 以3600r/min离心，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥24h得到葛藤多糖提取物8. 39g，其多糖 含量为30. 27%，质量收率为8. 39%。
实施例3 取葛藤样品100g，葛藤粉碎至150目，以20倍量的沸水回流提取4次，每次4小 时，4000r/min离心，水提液浓縮至100mL，浓縮液用100mL85 %乙醇醇沉，静置过夜，抽滤， 上清液进行二次醇沉，冷冻干燥30h得到葛滕多糖提取物9. 4/g，其多糖含量为30. 31 % ，收 率为9. 47%。 葛藤多糖抗氧活性试验 葛藤多糖提取物清除羟基自由基作用 通过清除羟基自由基试验考察受试样品的抗氧化活性。 1、实验材料 1. 1药品与试剂 葛藤多糖提取物批号081021，配制成生药浓度为0. 5mg/mL的水溶液备用； 邻二氮菲溶液配制成0. 75mmol/L的无水乙醇溶液； 磷酸盐缓冲溶液配制成0. 2mol/L pH7. 40的缓冲溶液； 硫酸亚铁溶液配制成0. 75mmol/L的无水乙醇溶液； 双氧水配制成0. 01%的双氧水。 1. 2仪器 UV2450紫外分光光度计日本岛津公司；
电子天平北京赛多利斯仪器系统有限公司；
旋转蒸发仪RE-52C :巩义市予华仪器有限责任公司；
冷冻干燥机FD-1C-50 :北京博医康实验仪器有限公司。
2、实验方法 取lmL邻二氮菲溶液于试管中，依次加入2mL磷酸盐缓冲溶液和lmL蒸馏水，充分 混匀后，加入lmL硫酸亚铁溶液混匀，再加入lmL双氧水，于37。C水浴60min，在536nm测其 吸光值，所测得的数据为损伤管的吸光值(A(损))；以lmL样品液代替lmL蒸馏水则测得样 品的吸光值(A(样))；用lmL蒸馏水代替lmL双氧水测得的吸光值为A(未)。重复三次。 清除率按下式计算 清除率S(X) = (A(样)-A(损))/(A(未)-A(损))X100X
3、实验结果
图1为葛藤多糖提取物和Vc对羟基自由基的清除效果，可见，多糖提取物的清除 效果好，当浓度为lmg/mL时，清除率为74. 85%，其IC叨值为0. 7511mg/mL，葛藤多糖提取物 清除 OH的能力与Vc(IC5。为0. 3477mg/mL)相近。
4、结论 葛藤多糖提取物具有很好的清除羟基自由基作用，其清除效果与Vc相近。
实施例5、葛藤多糖提取物的清除超氧自由基作用
通过清除超氧自由基试验考察受试样品的抗氧化活性。
1、实验材料
1. 1药品与试剂 葛藤多糖提取物批号081021，配制成生药浓度为0. 5mg/mL的水溶液备用； 邻二氮菲溶液配制成0. 75mmol/L的无水乙醇溶液； 磷酸盐缓冲溶液配制成0. 01M pH8. 2的缓冲溶液； 邻苯三酚溶液配制成45mM的水溶液； 盐酸配制成10M的盐酸溶液。 1. 2仪器 UV2450紫外分光光度计日本岛津公司； 电子天平北京赛多利斯仪器系统有限公司； 旋转蒸发仪RE-52C :巩义市予华仪器有限责任公司； 冷冻干燥机FD-1C-50 :北京博医康实验仪器有限公司。 2、实验方法 取9mL磷酸盐缓冲液与lmL样品液混合，25。C恒温水浴15min。取3mL混合液于 比色皿中，加入0. lmL邻苯三酚，摇匀，在第4分钟加入盐酸1滴终止反应，于325nm处测定 样品吸光值(A》，同时分别测定不加邻苯三酚的样品液和磷酸盐混合液的吸光值(A2)和以 lmL溶剂代替样品液的磷酸盐和邻苯三酚混合液的吸光值(A》，重复三次。02—*清除率按 下式计算 清除率S(X) = [l-(A「A》/A3] X100%
3、实验结果 图2为葛藤多糖提取物和Vc对超氧自由基的清除效果，可见，多糖提取物在lmg/ mL时其清除率达63. 95%，其IC50值为0. 9229mg/mL(Vc的IC50为0. 2299mg/mL)。可见多糖提取物清除超氧自由基活性好。
4、结论 葛藤多糖提取物清除超氧自由基活性好。
权利要求
葛藤多糖提取物的制备方法，其特征在于包括下述步骤A、葛藤粉碎将葛藤粉碎至60～150目；B、多糖提取以重量计8～20倍量的水提取，在60～100℃的温度下回流提取2～4h，提取2～4次；C、提取液离心其中离心速度为3000～4000r/min；D、离心后液取上清液浓缩至一定浓度，浓缩的倍数为8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的浓缩液中乙醇浓度为60～85％，再离心或过滤法去除不溶物；E、上清液进行二次乙醇沉淀，条件同步骤D，再采用冷冻干燥法干燥，干燥16～30h，得葛藤多糖提取物。
2. 根据权利要求1所述的方法制备的葛藤多糖提取物在制备抗氧化的功能性食品中 的应用。
全文摘要
本发明涉及一种葛藤多糖提取物及其制备方法和用途。包括下述步骤A、葛藤粉碎将葛藤粉碎至60～150目；B、多糖提取以重量计8～20倍量的水提取，在60～100℃的温度下回流提取2～4h，提取2～4次；C、提取液离心其中离心速度为3000～4000r/min；D、离心后液取上清液浓缩至一定浓度，浓缩的倍数为8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的浓缩液中乙醇浓度为60～85％，再离心或过滤法去除不溶物；E、上清液进行二次乙醇沉淀，条件同步骤D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷冻干燥法，干燥16～30h。本发明的葛藤多糖提取物制备方法简便，可制备成抗氧化的功能性食品；同时该发明可变废为宝，提升葛根副产品的附加值，提高葛根资源的综合利用率。
文档编号C08B37/00GK101704904SQ200910235078
公开日2010年5月12日 申请日期2009年11月13日 优先权日2009年11月13日
发明者仰榴青, 仰玲玲, 吴向阳, 张敏, 李芳 , 赵婷, 闫舒 申请人:江苏大学