专利名称：一种抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，具体涉及一种抗卵巢功能衰退中药多糖提取物、制备方法及用途。
背景技术：
卵巢功能衰退可引发不孕不育、生殖系统、心血管系统、骨质疏松等系列疾病，卵巢过早衰退(Premature ovarian failure,P0F,即卵巢早衰)致使患者生活质量下降。此夕卜，随着社会经济的发展，越来越多的职业女性选择延迟生育时间，但女性的最佳生殖时间窗同样受到卵巢功能的严重限制。因此探讨卵巢功能衰退衰老机制、预测卵巢功能衰退的指标以及防治卵巢功能过早衰退的措施是当今生殖健康领域的研究热点和难点。
流行病学研究显示卵巢早衰的发生率为1%，然而这1%的妇女如何最终达到卵巢衰竭的状态，POF初始阶段的状态如何，目前仍有很多未知。有研究发现，随年龄增加，卵泡密度逐渐下降，35岁以上妇女卵泡密度明显降低，是35岁以下者卵泡密度的1/4，40岁以上妇女卵泡密度急剧降低，部分妇女卵泡密度降至O。Nikolaou估计在一般人群中至少有10%的妇女经历着过早的卵巢衰退，那根据POF的1%发生率，至少有9%的妇女处于卵巢衰退的早期状态，有专家对此状态命名为卵巢早老化(premature ovarian aging,POA),并对两者病因学进行比较研究，结果支持了 POA是POF—种早期阶段表现的观点。有研究提示治疗高促性腺激素闭经的效果与病程以及促卵泡生成素(FSH)水平有关。激素替代治疗(Hormone replacement therapy,HRT)是目前现代医学治疗卵巢衰老相关症状和疾病的重要方法，但现有研究明显表明其具有多种副作用和远期致癌性，使其临床应用受到明显的限制。
发明内容
本发明针对现有技术不足，根据中国遵循传统中医理论，采用中药方剂治疗，通过“补肾益阴、疏肝养血”而达到延缓卵巢衰老的目的。本发明提供了一种枸杞、桑椹和生地黄组方形成的抗卵巢功能衰退有效中药复方，从有效部位层面，通过适当的提取纯化方法和技术，尽可能多地提取和保留其中的多糖成分，以保证中药复方的药效，提高疗效，减少服用量，活性明确，毒副作用小。本发明目的是通过下面的技术方案实现的
一种抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物，采用如下方法制备而成
O按以下重量份取原料药枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黄30-120份，混合均匀，取6-10倍于原料药重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按质量比为盐聚合物=0. 5-3:1加入盐充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物；
2)将步骤I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，真空干燥，得多糖部位。上述聚合物优选聚乙二醇、聚维酮、葡聚糖、壬苯环氧乙烯或右旋糖酐硫酸钠一种或几种的混合物，更优选聚维酮6000，上述的盐优选KH2P04、K2HP04、(NH4) 2S04、柠檬酸铵、氯化钾或硝酸钠。上述10-50%聚合物水溶液为重量体积百分比。上述中药多糖提取物，可以单独或与一种或一种以上的药学上可接受的载体组合制成制剂以供给药，如针剂、输液、滴丸、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等。本发明所述中药多糖提取物各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如0.059Γ90%重量的活性成分，更常见约15°/Γ60%之间重量的活性成分。本发明还提供了一种上述中药多糖提取物的制备方法，包括如下步骤
1)按以下重量份取原料药枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黄30-120份，混 合均匀，取6-10倍于原料药重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按质量比为盐聚合物=0. 5-3:1加入盐充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物；
2)将步骤I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，真空干燥，得多糖部位。上述聚合物优选聚乙二醇、聚维酮、葡聚糖、壬苯环氧乙烯或右旋糖酐硫酸钠一种或几种的混合物，更优选聚维酮6000，上述的盐优选KH2P04、K2HP04、(NH4)2SO4、柠檬酸铵、氯化钾或硝酸钠。上述中药多糖提取物经药理实验证实其具抗卵巢功能衰退功能,所述的卵巢衰退症状优选多囊卵巢综合征、功能性月经不调、卵巢早衰或绝经期综合征。本发明提供了一种上述中药多糖提取物在制备抗卵巢功能衰退药物中的应用。本发明所述中药多糖提取物采用的中药复方由枸杞、桑椹和地黄组成，其中，枸杞味甘，性平。能补肝肾，益精血，明目，主治肝肾阴亏，腰膝酸软，头晕，目眩，目昏多泪，虚劳咳嗽，消渴，遗精。现代医学研究证明枸杞有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、降血脂、降血糖、降血压、补肾、保肝、明目、养颜、健脑、排毒、保护生殖系统、抗辐射损伤等十六项功能，其活性部位为枸杞多糖。桑椹味甘酸，性寒，有补肝益肾、养血生津、滋液熄风、润肠通便的作用，主治肝肾阴虚、耳鸣、津液不足、老年便秘、消渴、瘰疬、关节不利、神经衰弱等证，活性部位为多糖及其微量元素。生地黄味甘，苦，性寒，归心、肝、肺经，具有清热凉血、养阴、生津之功效，用于热病舌绛烦渴、阴虚内热、骨蒸劳热、内热消渴、吐血、衄血、发斑发疹等证，活性部位为多糖。现有文献《枸杞多糖对自然衰老雌性大鼠卵巢保护作用机制的探讨》(韦敏，郑生智，马红等，《中药材》，2011年12期)公开发现枸杞多糖对大鼠卵巢系统具有保护作用。《六味地黄丸治疗卵巢早衰的实验研究》(杨兰英，《山西中医学院学报》2002年第01期)研究了六味地黄丸对大鼠下丘脑一垂体一卵巢轴的调节作用，恢复、改善卵巢功能，提高体内雌激素水平，调整内分泌的作用。但是尚无针对由枸杞、桑椹和地黄组成中药复方的多糖有效部位治疗卵巢功能衰退的报道。目前，含有枸杞、桑椹和地黄等药材的中药复方多用于男性疾病治疗与保健，未用于女性卵巢疾病治疗与保健，如申请号为CN201110196777. 6，公开号为CN102258627A的中国专利文献“一种男士保健酒及其制备方法”公开了一种男士保健酒及其配制方法，炮制药材中含有鹿茸、不老草、肉苁蓉、锁阳、淫羊藿叶、海马、海狗肾、蛤蚧、生地黄、山萸肉、菟丝子、桑椹子、覆盆子、五味子、枸杞子、蛇床子、车前子、灵芝、吉林人参、云苓、冬虫夏草、红景天、雪莲、鹿鞭、牛鞭、狗鞭、雄蚕蛾、蜈蚣、当归、白芍、灸甘草、黑蚂蚁、红蚂蚁、炒枣仁、制首乌。申请号为CN200610067535. 6，授权公告号为CN1857520的中国专利文献“治疗不育症的药物”公开了一种治疗不育症的药物，它的原料组成为，紫河车10 -30份、淫羊藿10 - 30份、枸杞子10 - 20份、沙苑子5 — 15份、女贞子10 — 30份、覆盆子5 - 15份、五味子5 — 15份、桑椹子5 — 15份、菟丝子5 — 15份、何首乌10 — 30份、生地黄5 — 15份、当归10 — 30份和甘草梢5 — 15份。主要适应由于男性引起的少精子症，畸形精子症、无精子症的不育症患者。申请号为CN200610074229. 5，公开号为CN1861164的中国专利文献“一种治疗阴虚火旺型男子不育症的汤剂药物及制备方法”公开了一种治疗阴虚火旺型男子不育症的汤剂药物及制备方法，涉及治疗阴虚火旺型男子不育症的中草药配方，其药物是由下述重量份的原料制成的炒黄柏、知母各12 15克，生地黄、山萸肉、女贞子、桑椹、旱莲草、枸杞子、何首乌、牡丹皮、泽泻、炙龟板各9 12克。此外，本发明技术方案采用双水相萃取法提取中药多糖有效部位，有别于多糖常规的提取方法，多糖提取工艺常见于水提醇沉法、超声法、微波法或调整PH值来提取。 文献《微波法与传统工艺提取枸杞多糖的比较研究》(陈金娥，李成义，张海容.中成药，2006，28(4) : 573-576)、《枸杞多糖的提取分离及其组成研究》(苟春林，苟金萍，张艳等.宁夏农林科技，2012，53 (5) :89-90，92)、《枸杞多糖提取方法的研究进展》(张爽，王飞娟，王燕.中国科技信息，2012，7:148)、《枸杞多糖提取工艺优化方法的研究进展》(翁艳英，张贞发.科技信息，2012,11:19)、以及《黑果枸杞多糖的纯化工艺研究》(彭强，吕晓鹏，黄琳娟，等.西北农业学报，2012，21 (2) :121-126)等科技文献中多采用酶提法、水提法、超声法、微波法、碱提法、超临界萃取，纯化有脱盐、反渗透浓缩、冷冻升华干燥、超滤法、sevage除蛋白、过氧化氢除色素、透析法等进行枸杞多糖的提取和纯化。文献《桑椹多糖提取工艺的优化》(魏兆军，胡海梅，柏晓辉，等.食品科学，2007，28(11) :261-264)、《新疆黑桑椹多糖的提取和测定》(江岩，李斌，郭晓军.食品科学，2008，29(8) :224-226)、《新疆黑桑椹多糖超声提取工艺优选》(江岩.中国酿造.2009，3:138-140)等科技文献中公开了桑椹使用超声提取、水提醇沉，采用sevage除蛋白、透析法等手段纯化桑椹多糖。文献《超滤膜技术在多糖提取方面的应用》(胡亚芹，曹杨.生物技术通讯，2005，16(2) :228-230)、《超声技术在熟地黄多糖提取中的应用》(陈传福，张晓伟，张培正.食品科学，2008, 29 (02) : 184-187)、《地黄多糖的提取纯化工艺研究》(赵平鸽，刘晓·中国药房，2010，21 (23) :2146-2148)、《地黄多糖的研究概况》(王玉华，王伟.上海中医药杂志，2007，41 (5) :81- 83)、《地黄多糖提取分离技术的研究进展》(许春鹃，薛进华，范启兰.赣南医学院学报，2012，32(2) :315-316)等文献公开了使用酶提法、微波法、超声法、水提醇沉法、超滤法，采用sevage除蛋白、透析法、过氧化氢脱色、离子水逆流透析等工艺纯化多糖。上述文献中对枸杞、桑椹、地黄多糖的提取纯化工艺均为常规方法，工艺繁杂，且提取率不高。本发明使用双水相萃取法，利用两种化学结构不同的亲水性高聚物或者一种亲水性高聚物与无机盐在水中以适当的浓度形成的互不相溶的两个水相体系，利用体系中多糖、蛋白质和其它生物分子在两个水相间分配系数的差异，而使得各自溶解度不同，从而进行分离。本发明工艺条件温和、处理时间短、后处理简便，不会引起生物活性物的失活和变性，即保留复方中各药材成分的综合作用，有利于发挥中药的多效性，又去除了组织物质和部分无效成分，延长了储存期，提高了纯度，减少了服用量，质量控制的再现性提高，同时提供了一种活性多糖的新的工业化提取途径，该法省时，省力，提取物多糖含量高，提取率高。
此外本发明克服现有的胶囊服用剂量大、贮存不便、时间短的特点，通过对全方原料药材用适宜的溶剂提取分离并筛选出药效较高部位，保留药材有效成分，去除组织物质和部分无效成分，活性明显提高，减少服用量，增强药物顺医性，质量控制的再现性提高，方便贮藏和运输。本发明的方法工艺简单安全，所得有效部位药效强于原方药材，生产成本低，适于工业化生产，制备出的组合物为活性成分可制成各种药物剂型，如软胶囊、片剂、滴丸、缓控释剂等等。
图I为流式细胞仪检测药物作用后的凋亡指数图。
具体实施例方式以下将结合具体实施例对本发明做进一步阐述，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。本发明的实验动物，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心(生产许可证号SCXK (军)2007-004 )。·
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实施例I
称取一定量的聚维酮6000溶于去离子水中，按照表I配制溶液,备用。按照表I中的各组方比例称取原料药，混合均匀，用聚维酮6000水溶液充分溶解后，按表I中的比例加入柠檬酸铵充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物；所得沉淀部分用乙醇、丙酮和乙醚分别洗涤后，真空干燥，得多糖部位。表I提取工艺各组分及试剂比例
权利要求
1.一种抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物，其特征在于采用如下方法制备而成 1)按以下重量份取原料药枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黄30-120份，混合均匀，取6-10倍于原料药重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按质量比为盐聚合物=0. 5-3:1加入盐充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物； 2)将步骤I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，真空干燥，得多糖部位。
2.如权利要求I所述的抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物，其特征在于所述聚合物为聚乙二醇、聚维酮、葡聚糖、壬苯环氧乙烯或右旋糖酐硫酸钠一种或几种的混合物，所述的盐为KH2PO4、K2HP04、(NH4)2SO4、柠檬酸铵、氯化钾或硝酸钠。
3.如权利要求2所述的抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物，其特征在于所述聚合物为聚维酮6000。
4.如权利要求1-3所述的抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物,其特征在于加入药剂学上可接受的相应辅料，所述药剂是针剂、输液、滴丸、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液。
5.—种如权利要求I所述的抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤 O按以下重量份取原料药枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黄30-120份，混合均匀，取6-10倍于原料药重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按质量比为盐聚合物=0. 5-3:1加入盐充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物； 2)将步骤I)得到的沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，真空干燥，得多糖部位。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述聚合物为聚乙二醇、聚维酮、葡聚糖、壬苯环氧乙烯或右旋糖酐硫酸钠一种或几种的混合物，所述的盐为KH2P04、K2HPO4,(NH4)2SO4、柠檬酸铵、氯化钾或硝酸钠。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述聚合物为聚维酮6000。
8.如权利要求1-3所述的抗卵巢功能衰退的中药多糖提取物在制备抗卵巢功能衰退药物中的应用。
全文摘要
本发明属于中药领域，提供了一种抗卵巢功能衰退中药多糖提取物、制备方法及用途，具体为取枸杞子50-200份，桑椹40-160份和生地黄30-120份，混合均匀，取6-10倍于原料药重量的10-50%聚合物水溶液充分溶解后，按质量比为盐:聚合物=0.5-3:1加入盐充分振荡，静止分相，离心分离，去其上层清液得沉淀物。沉淀部分依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，真空干燥，得多糖部位。本发明从有效部位层面，通过适当的提取纯化方法和技术，尽可能多地提取和保留其中的多糖成分，以保证中药复方的药效，提高疗效，减少服用量，活性明确，毒副作用小。
文档编号C08B37/00GK102875690SQ20121038784
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月15日 优先权日2012年10月15日
发明者韦敏, 马红, 吕晔 申请人:南京美福天然药物科技有限公司