用于治疗疾病的新颖的方法和组合物的制作方法
【专利摘要】本发明的实施例的一个方面涉及提供新颖的治疗组合物，其包含植物物种西洋接骨木(Sambucus nigra)、紫松果菊(Echinacea purpurea)和积雪草(Centella asiatica)的草本提取物。所述组合物显示相对于先前鉴别的组合物，增加的治疗各种发炎性疾病、尤其粘膜或皮肤的发炎性疾病的治疗活性。另外，所述组合物显示相对于先前鉴别的组合物增加的溶解性。在本发明的一个实施例中，西洋接骨木:紫松果菊:积雪草的比率是7:1:2。本发明的一个实施例提供了制备包含前述植物物种的提取物的含水的治疗组合物的方法，其使用至少两次提取。
【专利说明】用于治疗疾病的新颖的方法和组合物
[0001] 相关申请
[0002] 本申请依35U. S. C. 119(e)要求2012年3月14日提交的美国临时申请61/610, 480 的权益，所述申请的公开内容以引用的方式并入本文中。
【技术领域】
[0003] 本发明的实施例涉及草本提取物的新颖组合物、其制备方法和使用所述提取物治 疗疾病的方法。
【背景技术】
[0004]包含植物物种西洋接骨木（Sambucus nigra)、紫松果菊（Echinacea purpurea)和 积雪草$61^61]^381&1:;^3)的草本提取物的治疗组合物已经在美国专利号7,563,466中 予以描述。
【发明内容】
[0005] 本发明的实施例的一个方面涉及提供新颖的治疗组合物，其包含植物物种西洋接 骨木、紫松果菊和积雪草的草本提取物。所述组合物显示相对于先前鉴别的组合物，增加的 治疗各种发炎性疾病、尤其粘膜或皮肤的发炎性疾病的治疗活性。另外，所述组合物显示相 对于先前鉴别的组合物增加的溶解性。
[0006] 本发明的一个实施例提供了一种包含植物物种西洋接骨木、紫松果菊和积雪草的 提取物的组合物，所述组合物具有超过或等于0.055%的柚皮素（naringenin)浓度。在本 发明的一个实施例中，治疗组合物可溶于丙二醇中，浓度为20 %。在本发明的一个实施例 中，西洋接骨木：紫松果菊：积雪草的比率是7:1:2。
[0007] 本发明的一个实施例提供了制备包含前述植物物种的提取物的含水的治疗组合 物的方法，其使用至少两次提取。
[0008] 本发明的一个实施例提供了治疗疾病、尤其是粘膜或皮肤疾病、发炎性疾病或可 以通过组织修复来改善的疾病、病状或创伤的方法，其包含投与包含所述植物物种的提取 物的组合物。
[0009] 在论述中，除非另有说明，否则应了解例如"实质上"和"约"等修饰本发明的一个 实施例的特征的条件或关系特性的形容词意指所述条件或特性界定在其意图用于的应用 的实施例操作可接受的容限内。除非另外指明，否则说明书和权利要求书中的字"或"被认 为是包括性"或"而不是排它性或，并指示其所连结的对象中的至少一个或任何组合。
[0010] 提供本
【发明内容】
是为了以简化形式引入下文在【具体实施方式】中进一步描述的概 念选择。本
【发明内容】
并非意图鉴别所要求的主题的关键特征或基本特征，也并非意图用于 限制所要求的主题的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0011] 图la和图lb展示描绘用于制造包含根据本发明的实施例的来自植物物种紫松果 菊、西洋接骨木和积雪草的提取物的组合物的合成方案的流程图；
[0012] 图2a展示比较各种浓度下根据本发明的实施例的草本提取物与常规提取物对介 白素-10-转化酶（ICE)活性（发炎的一种指示物）的抑制的作用的图；
[0013] 图2b展示比较各种浓度下根据本发明的实施例的草本提取物与常规提取物对胶 原蛋白从细胞的释放（伤口愈合的一种指示物）的作用的图；
[0014] 图2c展示比较各种浓度下根据本发明的实施例的草本提取物与常规提取物对核 因子-K B (NFkB)(发炎的一种指示物）的抑制的作用的图；
[0015] 图2d展示比较各种浓度下根据本发明的实施例的草本提取物与常规提取物对细 胞中氧化氮（N0)活性（发炎的一种指示物）的抑制的作用的图；
[0016] 图3展示描绘在仓鼠中在放射诱发的口腔粘膜炎的模型中根据本发明的实施例 的提取物的调配物对降低粘膜炎评分的有益作用的图；以及
[0017] 图4展示描绘在六名人类患者中根据本发明的实施例的组合物对口腔粘膜炎评 分的作用的图。
【具体实施方式】
[0018] 在以下【具体实施方式】中，将描述新的制造包含草本提取物的组合物的方法。此外， 描述展示新草本组合物的增强的质量的化学和生物学表征。描述一种展示根据本发明的实 施例的组合物增加的消炎作用的动物模型。描述一种展示根据本发明的实施例的组合物在 人类治疗中的作用的临床试验。提供了使用新的草本组合物的治疗方法。
[0019] 实例la :根据本发明的实施例的组合物的合成
[0020]图la展示描绘用于合成包含来自植物物种西洋接骨木、紫松果菊和积雪草的提 取物的各种组合物的合成方案1〇〇的流程图。合成方案1〇〇包含框10、20和30,所述框10、 20和30包含分别将西洋接骨木、紫松果菊和积雪草与水醇溶液（包含水和醇的溶液）混 合。框12、22和32包含去除不溶的植物物质和溶剂以分别形成西洋接骨木、紫松果菊和积 雪草的干燥提取物。框40包含将框12、22和32的干燥草本提取物组合。
[0021] 在本发明的一个实施例中，框10、20和/或30的水醇溶液包含25%与75%之间 的醇。在一个实施例中，框10、20和/或30的水醇溶液包含70%醇。在一个实施例中，水 醇溶液中的醇包含乙醇。在一个实施例中，框10、20和/或30中的溶剂与植物的比率是在 约6到约10重量份的溶剂与一重量份植物材料之间。在一个实施例中，框10、20和/或 30中的溶剂与植物的比率在按重量计约8:1之间。在一个实施例中，水醇溶液混合约8小 时。在一个实施例中，提取工艺是多阶段的。在一个实施例中，水醇溶液在约30-40°C (摄 氏度）的温度下混合。在一个实施例中，赋形剂在去除溶剂和植物物质前添加到水醇溶液 中。在一个实施例中，赋形剂是载剂，例如麦芽糊精。在一个实施例中，赋形剂是无水胶状 二氧化硅。在一个实施例中，草本提取物与赋形剂的比率是约7:3。
[0022] 在本发明的一个实施例中，在框12、22和/或32中溶剂通过喷雾干燥来去除。
[0023] 在本发明的一个实施例中，在框40中，西洋接骨木：紫松果菊：积雪草的草本提 取物分别以2-15:0. 5-3:0. 5-3的重量比组合。在另一个实施例中，西洋接骨木：紫松果 菊：积雪草的草本提取物分别以70:10:20的重量比组合。
[0024] 合成方案100进一步包含框42,其包含将水与框40的组合的草本提取物组合。在 一个实施例中，水以每公斤（kg)草本提取物3到14升（L)水的比率组合。在一个实施例 中，水以每公斤草本提取物9L水的比率组合。在一个实施例中，水与草本提取物的混合物 混合约6到约24小时。在一个实施例中，水与草本提取物的混合物混合约12小时。
[0025] 合成方案100进一步包含框44,其包含将醇与框42中形成的混合物组合。在本发 明的一个实施例中，醇包含乙醇。在一个实施例中，96 %或100 %乙醇用于形成具有约50 % 到约90%乙醇的浓度的醇混合物。在一个实施例中，添加乙醇以达到70%乙醇的浓度。
[0026] 在本发明的一个实施例中，框44的醇混合物搅拌约6到约24小时、优选地约12 小时。
[0027] 合成方案100进一步包含框46,其包含从框44中形成的醇混合物去除不溶的物 质。在本发明的一个实施例中，使用离心、过滤、沉降或任何这些方法的组合从醇混合物去 除不溶的物质。
[0028] 合成方案100进一步包含框48,其包含去除醇以形成草本水溶液。在本发明的一 个实施例中，醇可以通过蒸馏或通过蒸发使用旋转式蒸发器去除。在本发明的一个实施例 中，醇是乙醇并在低于30°C的温度下使用旋转式蒸发器去除。
[0029] 合成方案100进一步包含框50,其包含从框48的水溶液去除水以形成干草本粉 末。根据本发明的实施例，可以使用冻干（冷冻干燥）或喷雾干燥实现水的去除。
[0030] 图lb展示描绘用于合成包含来自植物物种西洋接骨木、紫松果菊和积雪草的提 取物的各种组合物的合成方案200的流程图。合成方案200包含框40,其包含如所描述，组 合合成方案100中框12、22和32的干燥的草本提取物。
[0031] 在本发明的一个实施例中，在框40中，西洋接骨木：紫松果菊：积雪草的草本提 取物分别以2-15:0. 5-3:0. 5-3的重量比组合。在另一个实施例中，西洋接骨木：紫松果 菊：积雪草的草本提取物分别以70:10:20的重量比组合。
[0032] 合成方案200进一步包含框62,其包含将醇与框40的组合的草本提取物组合。在 一个实施例中，醇以每公斤草本提取物约3到约14L醇、优选地约9L醇的比率使用。在一 个实施例中，醇与草本提取物的混合物混合约12小时。在本发明的一个实施例中，醇包含 乙醇。在一个实施例中，乙醇是96 %-100 %乙醇。
[0033] 合成方案200进一步包含框64,其包含将水与框62中形成的混合物组合。在一个 实施例中，使用水形成具有约50%到约90%乙醇的浓度的醇混合物。在一个实施例中，使 用水达到70%乙醇的浓度。
[0034] 在本发明的一个实施例中，搅拌框64的醇混合物。在一个实施例中，混合物搅拌 约6小时到约24小时，优选地约12小时。
[0035] 合成方案200进一步包含框66,其包含从框64中形成的醇混合物去除不溶的物 质。在本发明的一个实施例中，使用离心、过滤、沉降或任何这些方法的任何组合从醇混合 物去除不溶的物质。
[0036] 合成方案200进一步包含框68,其包含去除醇以形成草本水溶液。在本发明的一 个实施例中，醇可以使用蒸馏或蒸发，例如使用旋转式蒸发器去除。在本发明的一个实施例 中，醇是乙醇并在低于30°C的温度下使用旋转式蒸发器去除。
[0037] 合成方案200进一步包含框70,其包含从框68的水溶液去除水以形成干草本粉 末。根据本发明的实施例，可以使用冻干（冷冻干燥）或喷雾干燥实现水的去除。
[0038] 实例lb :提取物N的合成
[0039] 根据本发明的一个实施例，遵循在实例la中描述的合成方案100,细节如下。
[0040] 根据框10,将西洋接骨木（花梢）与70%乙醇（8:1溶剂与植物比率）混合。根 据框12去除不溶的植物物质和干燥溶剂后，形成3. 29kg干燥的西洋接骨木提取物。
[0041] 根据框20将紫松果菊（根茎和根）与70%乙醇（8:1溶剂与植物比率）混合。根 据框22去除不溶的植物物质和干燥溶剂后，形成470g(克）干燥的紫松果菊提取物。
[0042] 根据框30将积雪草（地上部分）与70 %乙醇（8:1溶剂与植物比率）接触。根据 框32去除不溶的植物物质和干燥溶剂后，形成940g干燥的积雪草提取物。
[0043] 根据框40将来自三种草本植物的三种干燥提取物（按重量计70:10:20的比率） 组合。根据框42,添加47L水并搅拌混合物12小时。根据框44,将113. 9L96%乙醇添加到 混合物中以形成160. 9L70%乙醇的醇混合物。根据框46过滤混合物并去除不溶的物质。 根据框48蒸发乙醇并根据框50将溶液喷雾干燥以形成3. 2kg干草本粉末，称为提取物N。 此工艺的产率（相对于根据框40添加的干燥提取物的重量百分比）是68. 7%。
[0044] 实例lc :提取物P的合成
[0045] 根据方案100中的框40将来自三种草本植物的三种干燥提取物（按重量计 70:10:20的比率）组合。随后遵循方案200,产生提取物P。根据框62,乙醇（100% )以每 lg干燥提取物9g乙醇的比率添加。搅拌混合物12小时。随后根据框64,缓慢添加水，直 到实现最终70%乙醇的浓度。根据框66将混合物离心并去除不溶的物质。根据框68在真 空下使用旋转式蒸发器蒸发乙醇，并根据框70冻干溶液，以形成干草本粉末，称为提取物 P。提取物P的产率（相对于根据框40添加的干燥提取物的重量百分比）是75%。
[0046] 实例Id :提取物D的合成
[0047] 根据方案100中的框40将来自三种草本植物的三种干燥提取物（按重量计 70:10:20的比率）组合。根据如实例lb中所描述的框42,形成含水的混合物，并混合混合 物约17-20小时。通过将水溶液离心并用0.2微米过滤器过滤来去除不溶的物质。通过冻 干过夜，将水从滤液去除。干燥的草本混合物称为提取物D。
[0048] 实例le :提取物B的合成
[0049] 根据实例la直到框40,制备草本提取物。组合的草本提取物称为提取物B。
[0050] 实例If :提取物M的合成：
[0051] 根据实例la(直到框40)，制备草本提取物。将100%乙醇添加到组合的草本提取 物中并搅拌12小时。将水添加到乙醇混合物，直到乙醇浓度是30%。随后使用旋转式蒸发 器去除乙醇并随后通过冻干去除水。所得提取物称为提取物M。
[0052] 实例2 :根据本发明的实施例的组合物的化学分析
[0053] 根据本发明的实施例的提取物包含多种生物活性、包括消炎的化合物。进行 HPLC (高效液相色谱法）定量分析以鉴别提取物D与提取物N之间的化学差异。
[0054] 使用菲罗门（Phenomenex) Synergi4 u m Hydro_RP80A 柱，使用含 0? 01 摩尔浓度憐 酸的水和乙腈作为流动相溶剂，进行HPLC分析。使用二极管阵列检测器进行检测。
[0055] 在根据本发明的实施例的提取物中鉴别的消炎化合物之一是柚皮素，其来源于草 本植物西洋接骨木。使用柚皮素（从西格马（Sigma)获得）制备标记物以定量草本提取物 的样品中柚皮素的量。
[0056] 对来自各批料的提取物D和N进行HPLC分析。在进行分析前，将提取物D和N在 50%乙腈/50%水溶剂中稀释到1%溶液。结果概述于以下表1中，其中柚皮素含量根据提 取物的百分比表示。
[0057] 表 1
【权利要求】
1. 一种用于制备含水的治疗组合物的方法，其包含： 将西洋接骨木、紫松果菊和积雪草的水醇草本提取物与水组合，以形成含水的混合 物； 将所述含水的混合物与醇组合，以形成具有超过50%醇的浓度的醇混合物； 将不溶的物质和醇从醇混合物分离，以产生含水的治疗组合物。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述醇混合物包含约70%醇。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述含水的治疗组合物进一步干燥以形成干燥的 治疗组合物。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述醇是乙醇。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中使用离心、过滤或沉降将不溶的物质从所述醇混 合物分离。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中使用真空将醇从所述醇混合物分离。
7. 根据权利要求3所述的方法，其中通过喷雾干燥或冷冻干燥将所述含水的治疗组合 物干燥。
8. 根据权利要求3所述的方法，其进一步包含将所述干燥的治疗组合物与至少一种医 药学上可接受的赋形剂组合。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述赋形剂选自由以下组成的群组：丙二醇、聚乙 二醇、丙三醇和香精油。
10. 根据权利要求1所述的方法，其中西洋接骨木、紫松果菊和积雪草的水醇草本提取 物是通过将所述植物物质混合于包含约70 %醇的溶剂中来制备。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述植物物质混合约8小时。
12. 根据权利要求11所述的方法，其中植物物质与溶剂的比率是约1:8。
13. 根据权利要求10所述的方法，其进一步包含从植物物质与溶剂的所述混合物去除 溶剂以形成水醇草本提取物。
14. 一种草本提取物，其包含西洋接骨木、紫松果菊和积雪草中每一者的水醇草本提取 物，所述提取物包含超过或等于〇. 055%的柚皮素浓度。
15. 根据权利要求14所述的草本提取物，其具有于丙二醇中呈20%溶液的溶解性。
16. 根据权利要求14所述的草本提取物，其中西洋接骨木：紫松果菊：积雪草的比率 是约7:1:2。
17. -种医药组合物，其包含根据权利要求14所述的草本提取物。
18. 根据权利要求17所述的医药组合物，其进一步包含医药学上可接受的载剂。
19. 根据权利要求18所述的医药组合物，其中所述载剂包含丙二醇。
20. 根据权利要求17所述的医药组合物，其呈漱口水、贴片、软膏、糊剂、洗剂、乳膏、口 含片、糖果、口香糖、溶液、凝胶、泡沫或喷雾的形式。
21. -种用于治疗疾病的方法，其包含投与医药学上可接受的量的根据权利要求17所 述的医药组合物。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述疾病是粘膜疾病或皮肤疾病。
23. 根据权利要求21所述的方法，其中所述疾病是发炎性疾病。
24. 根据权利要求21所述的方法，其中所述疾病通过组织修复得到改善。
25. 根据权利要求21所述的方法，其中所述疾病选自由以下组成的群组：口腔粘膜炎、 发炎性肠病、放射诱发的直肠炎、萎缩性阴道炎、牙周疾病、齿龈炎、阿弗他溃疡（aphthous ulceration)、机械性创伤、热伤、扁平苔癣、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、疱疹样皮炎、口 角炎和复发性疱疹。
26. 根据权利要求21所述的方法，其中所述投与的草本提取物的量在每天lmg与1. 5g 之间。
【文档编号】A61K36/23GK104394875SQ201380014283
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年3月13日 优先权日:2012年3月14日
【发明者】A·D·罗森布鲁, G·J·努斯鲍姆, A·罗特曼 申请人:Izun制药公司