Romidepsin在治疗帕金森病中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了Romidepsin在帕金森病治疗中的应用。本发明经体外和体内药理学实验证实，Romidepsin诱导多巴胺神经元细胞株和黑质脑组织氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2基因表达，降低帕金森病模型多巴胺神经元氧化应激，减少多巴胺神经元凋亡，减少帕金森病动物模型黑质多巴胺神经元损毁，起到治疗帕金森病的作用。
【专利说明】Rom i deps i η在治疗帕金森病中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及Romidepsin的应用，具体涉及Romidepsin在帕金森病治疗中的应用。【背景技术】
[0002]帕金森病(Parkinson’ s disease, PD)是第二大常见的神经退行性疾病,人群患病率0.3%, 65岁以上人群患病率1_3%。其病理特征是以Lewy小体形成，黑质致密区多巴胺神经元变性损毁为主要特征。
[0003]目前，PD的治疗主要是缓解运动症状，尚没有治愈的方法，临床用于治疗帕金森病的药物有复方左旋多巴制剂、抗胆碱能药物、金刚烷胺、多巴胺受体激动剂、单胺氧化酶B抑制剂、儿茶酚-氧位-甲基转移酶抑制剂，以及神经保护剂等。左旋多巴(Levodopa，L-dopa)作为多巴胺前体，是H)治疗的最主要药物，通过提高多巴胺水平，缓解运动障碍，然而左旋多巴治疗的“蜜月期”一般为3-5年，此后，患者常可出现运动波动或异动症等新的运动障碍。对于运动异常等并发症，目前认为主要由两方面原因引起，其一为左旋多巴半衰期短，在血液和脑组织内的浓度波动明显；其二为随病情进展，多巴胺能神经元不断变性、死亡导致其缓冲能力下降，造成对多巴胺受体的脉冲式刺激。然而，在持续多巴胺能刺激的治疗策略中，2007年，多巴胺受体激动剂培高利特在上市19年后由于被发现具有损害心脏瓣膜的作用而退出市场。
[0004]PD病情进行性进展的关键是多巴胺神经元进行性损毁。目前ro的临床治疗不能阻止或减缓ro多巴胺神经元损毁的进行性发展，患者随着患病时间的延长病情逐渐加重。目前亟待寻找新的有效治疗ro的方法。
[0005]Romidepsin是由美国Gloucester Pharmaceuticals公司开发的抗肿瘤药物，于2009年11月9日获得美国FDA批准上市，该药用于治疗皮肤和外周T细胞淋巴瘤。本发明人在研究中发现，Romidepsin·诱导氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2表达,减少F1D模型多巴胺神经元活性氧(reactive oxygen species, R0S)产生,减少F1D模型多巴胺神经元凋亡和损毁，起到治疗帕金森病的作用。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供Romid印sin在治疗帕金森病中的用途。
[0007]具体的说，本发明公开了 Romid印sin降低H)模型多巴胺神经元ROS产生，减少H)模型多巴胺神经元凋亡和损毁的应用。
[0008]本发明所述的药物Romidepsin通过市售得到。
[0009]本发明所述的ro模型为ro细胞模型和ro动物模型。
[0010]本发明所述的体外细胞ro模型为鱼藤酮ro细胞模型和mpp+(1-甲基-4-苯基吡啶离子)ro细胞模型。细胞为多巴胺神经元细胞株。
[0011]本发明所述的动物ro模型为单侧黑质立体定位注射鱼藤酮制备。
[0012]ro细胞模型中，Romid印sin的有效浓度范围为0.25-60 μ M,最佳浓度范围为2.5-15 μ M。H)动物模型中Romid印sin的有效剂量范围为0.2-4 mg/10 g，最佳剂量范围为 0.5-2 mg/10 g。
[0013]本发明通过real-time RT-PCR测定多巴胺神经元细胞株和黑质氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2表达。
[0014]本发明通过测定ro细胞模型多巴胺神经元活性氧ROS产生和细胞凋亡研究Romidepsin对体外F1D细胞模型的作用。
[0015]本发明通过酪氨酸轻化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)免疫染色研究Romidepsin对ro动物模型黑质多巴胺神经元的救援作用。
[0016]本发明中，Romidepsin治疗F1D的优势在于:①Romidepsin诱导多巴胺神经元细胞株和黑质脑组织氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2基因表达，②Romid印sin降低H)模型多巴胺神经元ROS产生，③减少H)模型多巴胺神经元凋亡，④增加H)动物模型TH阳性细胞数，减少ro模型多巴胺神经元损毁。
[0017]本发明提供了 Romidepsin的用途，即Romidepsin对F1D的治疗用途。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是Romid印sin减少鱼藤酮H)细胞模型多巴胺神经元凋亡。明亮的蓝色荧光染色表示凋亡细胞。
[0019]图2是Romid印sin减少MPP+ H)细胞模型多巴胺神经元凋亡。明亮的蓝色荧光染色表示凋亡细胞。
[0020]图3是Romid印sin减少鱼藤酮H)动物模型多巴胺神经元损毁。
【具体实施方式】
[0021]以下通过实施例进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围。
[0022]本发明实施例中所使用的Romid印sin购自TOKYO CHEMICAL INDUSTRY CO。
[0023]实施例中，体外实验研究对象为多巴胺神经元细胞株SH-SY5Y，整体实验，研究对象为昆明种小鼠。
[0024]计量资料以均数土标准差表示，应用SPSS16.0软件进行方差分析，p〈0.05为有
显著性差异。
[0025]氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2可以减轻氧化应激性损伤。实施例1和2考察Romidepsin对多巴胺神经元和黑质脑组织金属硫蛋白2基因表达。
[0026]实施例1:Romidepsin诱导多巴胺神经元细胞株金属硫蛋白2基因表达。
Dayl:将培养于25cm2培养瓶的SH-SY5Y细胞制成细胞悬液，铺于6孔板中，每孔细胞大约IXlO60
Day2:细胞融合约30_40%，给予Romid印sin，终浓度为2.5,5,15 μ M0培养48小时。弃培养基，提取细胞RNA，real-time RT-PCR测定人金属硫蛋白2表达，人金属硫蛋白2 mRNA引物购自Qiagen (cat.n0.QT00220199)。结果显示Romidepsin诱导多巴胺神经元细胞株金属硫蛋白2基因表达，并呈现剂量依赖性见表1。
表1 Romidepsin对多巴胺神经元细胞株金属硫蛋白2基因表达的影响(n=6)
【权利要求】
1.Romidepsin在治疗帕金森病中的应用。
2.权利要求1所述的Romidepsin在治疗帕金森病中的应用，其特征在于Romidepsin诱导多巴胺神经元细胞株和黑质脑组织氧化应激抵抗因子金属硫蛋白2基因表达，Romidepsin降低帕金森病模型多巴胺神经元活性氧产生。
3.权利要求1所述的Romidepsin在治疗帕金森病中的应用，其特征在于Romidepsin减少帕金森病模型多巴胺神经元凋亡，增加帕金森病动物模型黑质TH免疫染色，减少多巴胺神经元损毁 。
【文档编号】A61P25/16GK103861084SQ201410048808
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年2月12日 优先权日:2014年2月12日
【发明者】翟德胜, 桂立辉, 武俊芳, 刘巍, 袁会峰, 杜云红, 杨玉新, 崔泰震, 李晓鹏, 陈志国 申请人:新乡医学院