一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下：①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎混匀成浆；②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，得到含水量为1-6%的猪脾颗粒；③将猪脾颗粒置入工作温度为3-6℃的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；④将猪脾微粉与注射用水按1：4-8的比例混成浆液；⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机分离，取上清液备用；⑥将上清液用截留分子量为5000-6000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；⑦对滤液除菌灌装封口，制成产品。本发明采用纯物理方法提取猪脾中的多肽及核糖，以解决现有技术的不足。
【专利说明】一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及猪脾活性物质提取方法，是一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法。
【背景技术】
[0002]将猪脾中的多肽、氨基酸及核苷酸等活性物质提取后制成的转移因子注射液或口服液逐渐被广泛应用于临床。 申请人:是我国最早以猪脾为原料，提取多肽及核糖后做成转移因子口服液获得国药准字号的公司，国药准字号为H20013138。该口服液用于某些抗生素难于控制的病毒性或霉菌性细胞内感染的辅助治疗，也应用于恶性肿瘤的辅助治疗，同时，也可用于治疗血小板减少、多次感染治疗、慢性皮肤黏膜真菌病等免疫缺陷疾病。 申请人:在多年的生产中坚持采用纯物理方法提取猪脾中的多肽及核糖，以保证临床应用的安全性。但是，生产中发现，做为工业化、规模化生产的工艺仍存在不足:提取收率相对较低，做为临床应用的规格选择范围较窄，较难满足临床的多种不同需要。近几年公开的猪脾转移因子提取方法中的多肽及核糖均有所提高，但是，均采用反复冻融的方法提高收率，然而，国外研究资料表明动物肉类及内脏在冷冻-解冻-再冷冻循环中易产生对人体有害的物质，这种有害物质随着冻融的次数增加而增加，使临床应用的安全性较难保证。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是，提供一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，用纯物理方法提取猪脾中的多肽及核糖，以解决现有技术的不足。
[0004]本发明为实现上述目的通过以下技术方案实现:一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3-4的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成8-12毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为72-80小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为IX 10-4毫巴一 I X 10-2毫巴，温度为-8 — _2°C，保持13-16小时，然后在40-90分钟内升温至2-8°C，保持2-9小时，得到含水量为1-6%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为3-6°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1:4-8的比例混成浆液，注射用水的温度为2-4°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在2-4°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离7-12分钟，取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5000-6000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除囷灌装封口，制成广品。
[0005]所述的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3.5的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成10毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为76小时；②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为1X10-3毫巴，温度为_5°C，保持15小时，然后在60分钟内升温至4°C，保持5小时，得到含水量为3%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为4°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1:6的比例混成浆液，注射用水的温度为3°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在3°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离9分钟,取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5500道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除囷灌装封口，制成广品。
[0006]本发明用纯物理方法制备猪脾多肽及核糖口服液，整体工艺在低温下完成，低温制备过程无任何添加剂，在使猪脾细胞充分破壁的同时，不破坏活性成份，使收率提高，多肽含量及核糖含量达到较高值，工业化生产中的各工序及参数易于控制，生产周期短。用本发明方法制备的猪脾多肽核糖口服液中无有害物质，无药物残留，临床应用的安全性高。整体制备方法中无污染。
【具体实施方式】
[0007]本发明的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3-4的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成8-12毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为72-80小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为I X 10-4毫巴一 I X 10-2毫巴，温度为-8 — -2 V，保持13-16小时，然后在40-90分钟内升温至2-8°C，保持2-9小时，得到含水量为1-6%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为3-6°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1:4-8的比例混成浆液，注射用水的温度为2-4°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在2-4°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离7-12分钟，取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5000-6000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除囷灌装封口，制成广品。
[0008]本发明制备方法中使猪脾在低温下干燥，并将干燥的猪脾颗粒制备成微粉，从而增加细胞脆性并使细胞充分破壁，使多肽等活性成份充分溶出，以达到提高口服液多肽及核糖含量的目的。
[0009]本发明的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法可以有以下多种选择。
[0010]实施例1、一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3.5的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成10毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为76小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为1X10-3毫巴，温度为_5°C，保持15小时，然后在60分钟内升温至4°C，保持5小时，得到含水量为3%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为4°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；④将猪脾微粉与注射用水按1:6的比例混成浆液，注射用水的温度为3°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在3°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离9分钟,取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5500道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除菌灌装封口，制成口服液产品。
[0011]本发明上述方法中的各工序及参数的特定组合，使口服液中猪脾多肽含量达到
2.78-2.87mg/ml，核糖含量达到79_81ug/ml，用本发明的方法可做成多肽及核糖含量较高的多种规格，适用于临床的不同需要，使临床应用选择范围宽。用本发明方法制备的口服液质量高，其中不含任何化学物质及防腐剂，无毒、无菌，临床应用安全性高。
[0012]实施例2、一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成8毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为72小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为1X10-4毫巴，温度为-8，保持13小时，然后在40分钟内升温至2°C，保持2小时，得到含水量为1%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为3°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1:4的比例混成浆液，注射用水的温度为2V ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在2°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离7分钟，取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除菌灌装封口，制成口服液产品。
[0013]实施例3、一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1: 4的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成12毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为80小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为1X10-2毫巴，温度为_2°C，保持16小时，然后在90分钟内升温至8°C，保持9小时，得到含水量为6%的猪脾颗粒；
③将猪脾颗粒置入工作温度为6°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1: 8的比例混成浆液，注射用水的温度为4°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在4°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离12分钟，取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除菌灌装封口，制成口服液产品。
[0014]实施例4、一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，步骤如下:
①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:38的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成11毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为78小时；
②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为I X 10-3.5毫巴，温度为-3°C，保持14小时，然后在80分钟内升温至7 V，保持8小时，得到含水量为5%的猪脾颗粒；③将猪脾颗粒置入工作温度为5°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉；
④将猪脾微粉与注射用水按1:7的比例混成浆液，注射用水的温度为3.5°C ；
⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在3.5°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离11分钟，取上清液备用；
⑥将上清液用截留分子量为5800道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液；
⑦对滤液除菌灌装封口，制成口服液产品。
[0015]用本发明方法制备的猪脾多肽及核糖口服液产品的指标如下:
1、成品指标如下:
【权利要求】
1.一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，其特征在于:步骤如下: ①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3-4的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成8-12毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为72-80小时； ②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为I X 10-4毫巴一 I X 10-2毫巴，温度为-8 — -2 V，保持13-16小时，然后在40-90分钟内升温至2-8°C，保持2-9小时，得到含水量为1-6%的猪脾颗粒； ③将猪脾颗粒置入工作温度为3-6°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉； ④将猪脾微粉与注射用水按1:4-8的比例混成浆液，注射用水的温度为2-4°C ； ⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在2-4°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离7-12分钟，取上清液备用； ⑥将上清液用截留分子量为5000-6000道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液； ⑦对滤液除囷灌装封口，制成广品。
2.根据权利要求1所述的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法，其特征在于:步骤如下: ①取健康猪脾去除脂肪及筋膜，清洗后绞碎，将绞碎后的猪脾与水按重量比1:3.5的比例混匀成浆，在_20°C冷冻成10毫米厚的冰体猪脾，冷冻时间为76小时； ②将步骤①冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥，真空冷冻干燥机内的真空度为1X10-3毫巴，温度为_5°C，保持15小时，然后在60分钟内升温至4°C，保持5小时，得到含水量为3%的猪脾颗粒； ③将猪脾颗粒置入工作温度为4°C的超微粉碎机内粉碎，得到猪脾微粉； ④将猪脾微粉与注射用水按1:6的比例混成浆液，注射用水的温度为3°C ； ⑤将步骤④的浆液用离心沉降式冷冻分离机在3°C下分离，分离机的转速为8000转/分钟，分离9分钟,取上清液备用； ⑥将上清液用截留分子量为5500道尔顿的中空纤维超滤膜过滤，得到滤液； ⑦对滤液除囷灌装封口，制成广品。
【文档编号】A61K35/28GK103989709SQ201410252263
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2014年3月21日
【发明者】叶小珍, 郭秋云, 曹淑玲, 兰飞, 何利剑, 胡翔, 李静 申请人:江西赣南海欣药业股份有限公司