叶酸修饰的普朗尼克p85共聚物的制备及其在5-氟尿嘧啶纳米药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物医药【技术领域】，首先提供了一类叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物，还涉及5-氟尿喃啶的抗癌纳米药物的制备。实验发现，采用叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物制备的5-氟尿嘧啶纳米药物，可以显著抑制肿瘤细胞生长；而且在小鼠结肠癌肝转移模型中，能显著减少结肠癌肝转移瘤形成，并能显著延长小鼠生存期，表明其具有良好的抗结肠癌肝转移的作用。因此有望成为有临床应用前景的抗肿瘤药。
【专利说明】叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物的制备及其在5-氟尿嘧啶 纳米药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物应用【技术领域】，具体地说，是关于叶酸修饰的普朗尼克P85共聚 物（P85-FA)的制备，本发明还涉及5-氟尿嘧啶抗癌纳米药物的制备，特别是在抗结直肠癌 肝转移中的用途。
【背景技术】
[0002] 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，可发生在结直肠的任何部位，其发病率在全球 范围内呈逐年上升趋势，已成为导致患者死亡的三大癌症之一。结直肠癌转移多发生在肝 脏，据报道30-40%的患者在疾病的早期就伴有肝转移；而在疾病晚期，95%的患者都出现肝 转移，并且结直肠癌患者的死亡原因多为肝部转移灶的发展。目前虽有以手术治疗为主的 多种治疗方案，可提高结直肠癌的治愈率，但对结直肠癌肝转移的患者并没有更有效的治 疗方法。
[0003] 普朗尼克（Pluronic)是由聚氧乙烯一聚氧丙稀一聚氧乙烯（ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0)形成 的两性分子纳米共聚物。具有合适组成比和相对分子质量的普朗尼克在水溶液中能自发形 成胶束，其直径通常为10-100纳米。普朗尼克可以与抗肿瘤药物形成共聚物胶束，其胶束 中心由疏水的ΡΡ0组成，可结合药物、DNA或蛋白等分子；亲水的ΡΕ0链组成胶束外壳， 从而提高药物的靶向性和稳定性。近年来研究发现，药物-普朗尼克共聚物胶束本身具有 很强的稳定性，可以显著增加肿瘤对药物的敏感性，减小药物的毒副反应，如普朗尼克P85 PE026-PP040-PE026)可以与化疗药物阿霉素形成共聚物胶束P85-D0X，与单独使用阿霉素 药物组相比，可以显著抑制人白血病细胞株P388细胞中耐药蛋白Pgp的表达，诱导ATP 衰竭，增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。单独使用有效剂量的普朗尼克P85对细胞没有 毒副作用，具有较高的生物安全性。普朗尼克L61、F127、P123及F88对增强化疗药物敏 感性方面的作用显著低于P85。
[0004] 5-氟尿啼陡（5-;1^111〇1'〇11四(^1，5-?11)是结直肠癌首选的化疗药物，然而5-?11严重 的骨髓抑制及胃肠道毒副反应，很大程度上限制了其在临床的广泛应用。近年，学者们开展 了许多对5-Fu新剂型的研究工作，但均未解决增强靶向性及减轻毒副作用的问题。目前与 5-FU联合用药的化疗方案仍然是结肠癌的一线治疗方案。临床使用时，需要提前给予叶酸 (folic acid，FA)类制剂，以增强5-FU的作用，降低5-FU的毒副反应，临床使用较为不便。 叶酸是人体必需的小分子维生素，其对于细胞所必须的核苷酸的生物合成以及维持一碳单 位的正常代谢通路起重要作用。叶酸对叶酸受体（folate receptor,FR)表现出极高的亲 和力。FR表达水平与上皮源性肿瘤组织的恶性程度及转移侵袭力存在正相关关系。叶酸修 饰的聚合胶束对叶酸受体过表达的结肠癌细胞具有强亲和力，能有效地将所载药物导入肿 瘤细胞。
[0005] 因此，本发明人将叶酸与纳米载体通过化学连接方式连接，方法简单，不易引起免 疫反应，能显著增加5-FU的抗肿瘤作用，降低其毒副反应，临床操作更为简便，具有非常好 的抗肿瘤药物开发前景。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有治疗措施中的不足，提供一种叶酸修饰的普朗尼克P85 的共聚物及其在5-氟尿嘧啶抗肿瘤纳米药物的制备方法，特别是结直肠癌肝转移中的应 用。
[0007] 本发明首先提供了一类叶酸修饰的普朗尼克P85的共聚物，结构为
【权利要求】
1. 一种叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物，其结构如下式：
式中，n=l-8。
2. 根据权利要求1所述的共聚物，其特征在于，n=2-4。
3. 根据权利要求1所述的共聚物，其特征在于，n=2。
4. 根据权利要求1所述的共聚物的制备方法，包括以下步骤：
(1) 氮气保护下，普朗尼克P85在乙腈中与⑶I室温搅拌，反应得到P85-⑶I ; (2) P85-CDI溶于乙腈中，慢慢滴加到H2N(CH2)nNH2中，室温搅拌反应得到P85-NH 2 ; (3) P85-NH2与叶酸、缩合剂溶解于DMSO中，溶液中加入三乙胺，在氮气保护下室温搅 拌反应，合成含有末端叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物。
5. 根据权利要求4所述的共聚物的制备方法，其特征在于，所述的缩合剂为N-羟基丁 二酰亚胺（NHS)和Ν，Ν' -二环己基碳二亚胺。
6. -种抗肿瘤组合物，包含权利要求1所述的叶酸修饰的普朗尼克Ρ85共聚物、安全有 效量的临床上常用的抗肿瘤化合物和药学上接受的载体。
7. 如权利要求6所述的一种抗肿瘤组合物，其特征在于，所述的临床上常用的抗肿瘤 化合物为5-氟尿嘧啶。
8. 如权利要求6所述的抗肿瘤组合物在用于制备抗结直肠癌药物中的应用。
9. 如权利要求6所述的抗肿瘤组合物在用于制备抗结直肠癌肝转移药物中的应用。
10. -种荷载5-氟尿嘧啶的纳米药物的制备方法，其特征在于，取叶酸修饰的普朗 尼克Ρ85共聚物和5-氟尿嘧啶于圆底烧瓶中，用适量乙腈溶解后，除去有机溶剂，得干燥 药膜，水浴加热，溶解固体骨架，加入等温度纯化水搅拌，用0.22 μ m滤膜过滤，得到荷载 5_氟尿嘧啶的纳米药物的胶束溶液。
【文档编号】A61P35/04GK104208707SQ201410441009
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月2日 优先权日:2014年9月2日
【发明者】张黎, 侯静, 范婷婷, 朱鹏熹, 盛丹丹, 马建丽, 赵娜萍, 宋云龙, 张姗姗, 韩志鹏, 卫立辛, 芮耀诚, 辛海量, 刘厚佳 申请人:中国人民解放军第二军医大学