一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂，其特征在于：所述的催产剂按照以下方式配制而成：首先取5肽酰胺NGFFFamid粉末，将其用ddH20溶解成ImM的母液，该母液可在-80°C的条件下长期保存，然后用过滤消毒海水将母液稀释到10pM，即获得催产剂。它是一种安全、高效，对海胆无任何毒性作用，且催产效率可达100%的新型海胆内源性催产剂。
【专利说明】-种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种催产剂，特别是一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂。
【背景技术】
[0002] 海胆海参的人工育苗技术早在上世纪80年代已经成熟，其中的催产技术采用的 是阴干、流水或者置于紫外线处理海水中的做法。这些传统方法基本可以满足生产上的需 求。但是这种单纯的物理刺激催产的方法也存在着明显的缺陷，如催产效率低，不稳定等。 近年来水产动物育种工作蓬勃发展。BLUP，MAS等选育策略极大提高了水产动物的选育效 率。但是科学高效的选育策略首先要求保证高效的家系构建技术和种质保存技术，尤其是 独立家系的构建和种质的保存技术。而传统催产方法在单个个体催产时存在上述缺陷，几 乎无法有效用于选育工作。为克服物理刺激低效率的缺点，国内外一般会采用KCL作为催 产剂的办法对海胆进行催产，这种方法相对具有较高的催产效率和可操作性，提高了家系 构建的效率。但也具有其致命的缺点，因为KCL会造成海胆体内渗透压紊乱，对海胆有很大 的毒害性，会造成很高的死亡率，从而对种胆的保存带来困难，也为回交、测交等家系构建 带来极大障碍。而单纯的通过降低KCL浓度和注射量的办法又无法保证催产效率。
【发明内容】
[0003] 本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种安全、高效，对海胆无任 何毒性作用，且催产效率可达100%的新型海胆内源性催产剂。
[0004] 本发明的技术解决方案是：一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂，其特 征在于：所述的催产剂按照以下方式配制而成： 首先取5肽酰胺NGFFFamid粉末，将其用ddH20溶解成ImM的母液，该母液可在-80°C 的条件下长期保存，将海水经过450-500目筛絹过滤，120°C高压灭菌锅灭菌20min后获得 过滤消毒海水，用过滤消毒海水将母液稀释到10pM，即获得催产剂。
[0005] 本发明同现有技术相比，具有如下优点： 本发明所公开的海胆催产剂，相比于传统的物理刺激催产法和利用KCL进行催产的方 法，具有明显的优势。它对海胆无任何毒性作用，可以实现安全、高效的海胆催产操作，从根 本上保证了海胆选育工作的效率和可靠性，对于海胆的育种工作具有重要的实际意义和应 用价值。
【具体实施方式】
[0006] 下面将说明本发明的【具体实施方式】。一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产 齐U，按照以下方式配制而成： 首先取 5 肽酰胺 NGFFFamid (Asn-Gly-Phe-Phe-Phe-amid)粉末，将其用 ddH20 溶解 成ImM的母液，该母液可在-80°C的条件下长期保存，然后用过滤消毒海水将母液稀释到 10pM，即获得催产剂。
[0007] 在实验室养殖的虾夷马粪海胆家系中，挑选经解剖验证已经性腺发育成熟的一个 家系，从中随机挑选个体大小相近，约为60克的虾夷马粪海胆个体65个，随机分为3组。第 一组5个作为空白对照组；第二组个体15个个体作为传统催产剂对照组，注射；第三组个 体45个作为实验组。其中第三组又分为3个水平处理组，每组15个个体。
[0008] 实验处理过程如下： 空白组注射2ml过滤海水；传统催产剂对照组注射2ml 0. 5M KCL ;实验组三个处理水 平分别注射2ml的催产剂，其浓度分别为10pM，100pM和InM。
[0009] 试验结果 空白组注射1小时后，所有5个海胆没有任何反应，无海胆个体出现排精卵现象。96小 时后全部海胆存活。
[0010] KCL对照组在注射后立即出现剧烈不适反应，表现出棘刺明显摆动等行为，5分钟 内出现排精卵现象，其中雌性个体为8个，卵子排放量平均约为30万枚/个体；48小时后 有10个个体死亡；96小时后有11个个体死亡；死亡率为73. 3%。
[0011] 实验组三个水平在注射催产剂后无明显不适反应。五分钟后的排放精\卵个体的 比例分别为100% (10ρΜ)，100% (ΙΟΟρΜ)和86.7% (InM)。统计实验组全部20个雌性海胆 的平均卵子排放量为110万/个体。96小时后所有3个水平没有出现死亡个体。
【权利要求】
1. 一种安全高效无毒害的新型海胆内源性催产剂，其特征在于：所述的催产剂按照以 下方式配制而成： 首先取5肽酰胺NGFFFamid粉末，将其用ddH20溶解成ImM的母液，该母液可在-80°c 的条件下长期保存，将海水经过450-500目筛絹过滤，120°C高压灭菌锅灭菌20min后获得 过滤消毒海水，用过滤消毒海水将母液稀释到10pM，即获得催产剂。
【文档编号】A61P15/04GK104208655SQ201410456792
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】常亚青, 庞震国, 张伟杰, 宋坚, 赵帅 申请人:大连海洋大学