本发明属于生物医药领域，涉及阿昔洛韦和阿昔莫司的老药新用，具体涉及阿昔洛韦和阿昔莫司的药物组合物在医药方面的新用途。
背景技术：
：慢性肾炎是由多种原因引起的原发于肾小球的一组免疫炎症性疾病。近年来，由于免疫荧光技术及电子显微镜的应用，现代医学对慢性肾炎的免疫发病机理、病理形态及功能改变都进行了系统而深入的研究，但在治疗方面，尚缺乏特效药物。阿昔洛韦为一种合成的嘌呤核苷类似物。主要用于单纯疱疹病毒所致的各种感染，可用于初发或复发性皮肤、粘膜，外生殖器感染及免疫缺陷者发生的HSV感染。为治疗HSV脑炎的首选药物，减少发病率及降低死亡率均优于阿糖腺苷。还可用于带状疱疹，EB病毒，及免疫缺陷者并发水痘等感染。局部仅用于皮肤，阿昔洛韦的皮肤吸收较少。阿昔莫司用于各种原发性和继发性高脂血症，可降低血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白含量，提高高密度脂蛋白含量，作用持久稳定。本品既可作为首选降脂药物，治疗轻度高脂血症，又可作为基础降脂药物，与其他降脂药物合用以提高疗效。本品尚可作为降糖药物，在治疗糖尿病中发挥辅助作用。迄今为止，尚未见阿昔洛韦和阿昔莫司的药物组合物与慢性肾炎的相关性报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种阿昔洛韦和阿昔莫司的药物组合物以及该药物组合物在治疗慢性肾炎方面的新用途，属于老药新用。本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种药物组合物，包含阿昔洛韦和阿昔莫司，且该组合物中阿昔洛韦和阿昔莫司的重量份之比为7:3～9:1。进一步地，所述的药物组合物包含阿昔洛韦和阿昔莫司，且该组合物中阿昔洛韦和阿昔莫司的重量份之比为8:2。进一步地，所述的药物组合物包含阿昔洛韦和阿昔莫司，且该组合物中阿昔洛韦和阿昔莫司的重量份之比为7:3。进一步地，所述的药物组合物包含阿昔洛韦和阿昔莫司，且该组合物中阿昔洛韦和阿昔莫司的重量份之比为9:1。上述的药物组合物在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。一种用于治疗慢性肾炎的药物制剂，包括上述的药物组合物，还包括药学上可以接受的药用辅料或载体。进一步地，所述制剂为片剂、口服液、注射液、无菌粉针、胶囊剂或颗粒剂。本发明的优点：本发明提供的阿昔洛韦和阿昔莫司的药物组合物含有两种临床常用的化学药物阿昔洛韦和阿昔莫司，本发明研究表明：阿昔洛韦和阿昔莫司联合作用且满足一定的重量份之比时，对慢性肾炎的治疗效果非常显著，与阳性药无显著性差异，可以开发成治疗慢性肾炎的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。实施例1：对大鼠慢性肾炎模型的治疗作用实验采用的是的方法改良的阳离子化牛血清白蛋白(诱发的慢性肾小球肾炎模型，该模型是目前研究治疗药物时首选的动物模型之一。阳性对照药物选取的是雷公藤多苷片。检测实验大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮等生化指标的变化，肾脏组织制作染色病理切片，在光镜下观察其病理变化。一、实验材料(一)、实验动物SD大鼠90只(健康清洁级)，雌雄各半，体重标准：200±15g。购自黑龙江中医药大学实验动物中心，实验动物合格证号：SCXK黑2014-004。实验室具备排气通风设施，自然光照明暗周期，笼具天消毒一次，垫料与饲料均购自佳木斯大学动物实验中心。(二)、实验仪器与试剂1、实验仪器大鼠金属代谢笼(黑龙江中医药大学动物实验中心)，TGL-16G-C型高速台式冷冻离心机(上海安婷科学仪器厂)，电子天平(长沙市八方科学仪器厂)，ALC-201.4型分析天平(德国赛多利斯集团)，XH-C型旋祸混合器(金坛市医疗仪器厂)，MODULYOD型真空冷冻干燥仪，电热恒温水浴箱(天津市泰斯特仪器有限公司)，KQ5200型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，NS-500A型半自动生化分析仪(四川美生科技有限公司)，透析袋(美国公司)，大鼠灌胃针(北京金泉水科技有限公司)，TSJ-1A型自动组织脱水机(天津天利航空机电有限公司)，KD-2508型轮转切片机(浙江金华市科迪仪器设备有限公司)，KPJ-1A型烤片机(天津天利航空机电有限公司)，BMJ-1型生物组织包埋机(天津航空机电公司)，CX31RTSF型OLYMPUS倒置显微镜(日本OLYMPUS株式会社)。2、实验试剂无水乙二胺(上海阿拉丁试剂有限公司)，牛血清白蛋白(上海阿拉丁试剂有限公司)，醋酸钠(天津市凯通化学试剂有限公司)，弗氏不完全佐剂(上海阿拉丁试剂有限公司)，盐酸(上海阿拉丁试剂有限公司)，醋酸(天津市北联精细化学品开发有限公司)，甘油三醋干粉试剂盒(北京市北北康泰临床试剂有限公司)，血清肌酐试剂盒(南京建成生物工程研究所)，血清尿素氮脲酶法试剂盒(南京建成生物工程研究所)，总胆固醇试剂盒(北京市北北康泰临床试剂有限公司)，低密度脂蛋白胆固醇试剂盒(北京康泰临床试剂有限公司)。3、实验药物雷公藤多苷片(10mg/片)购自黄石飞云制药有限公司。阿昔洛韦和阿昔莫司购自上海极威生物科技有限公司。二、实验方法(一)、制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)按照Border的方法改良，将67ml无水乙二胺液溶解于500ml双蒸水，继续缓慢添加350ml盐酸(6mol/l)，调整上述溶液pH至4.75。搅拌均匀，待其冷却至25℃后，加入25ml天然牛血清白蛋白(N-BSA)0.2g/ml水溶液，搅拌后再加1.8g炭化二亚胺盐酸盐，维持25℃，持续搅拌2h，保持pH值4.75，最后加入4mol/l的醋酸缓冲液30ml，终止反应，即得等电点提高的C-BSA溶液。将C-BSA溶液置于透析袋中，用4℃双蒸水透析72h，4h换水1次。将所得溶液冷冻干燥48h，即可获得BSA干粉，将其保存于-30℃冰箱中备用。(二)、制备不完全弗氏佐剂(FIA)将羊毛脂10g和液体石蜡40ml置于研钵中，在108℃下消毒15分钟，然后在紫外灯下照射2h。随后在超净工作台上把羊毛脂和液体石錯按质量体积比1：3的比例混合，均匀研磨，即可完成不完全弗氏佐剂的制备。将成品储存于4℃冰箱中备用。(三)、实验动物分组及模型复制1、动物的适应性飼养及初次分组SD大鼠90只(健康清洁级)，雌雄各半，体重200土15g。适应性喂养1周后，将其置于代谢笼中收集尿液，两次测定尿蛋白均为阴性。在其体表使用苦味酸法进行编号标记后进行随机分组，随机选取16只大鼠作为正常组，剩余大鼠则用于下一步造模。2、模型复制(1)预免疫实验第1周，将C-BSA与FIA按1：1混合，混匀成乳白色悬液。使用2.0mg上述悬液对造模大鼠颈部、背部、腹股沟及腋下进行皮下注射。正常组则注射等量生理盐水。(2)免疫在实验第2周至第4周，将C-BSA与FIA按1：1混合，混匀成乳白色悬液。使用2.0mg上述悬液对造模大鼠颈部、背部、腹股沟及腋下进行皮下注射。然后将混匀乳白色的悬液对造模大鼠进行尾静脉注射。首次对大鼠进行尾静脉注射量为0.5mg/只，每隔1日进行尾静脉注射1次。每隔次注射时给药剂量逐渐递增0.5mg，3周内将尾静脉注射量增加至2.5mg，正常组注射等量生理盐水。3、动物二次分组尾静脉注射C-BSA结束后(即实验第4周后)，检测实验大鼠24小时尿蛋白，结果显示造模大鼠的尿蛋白大量增加，与正常组相比较有显著性差异(P＜0.05)，确认造模成功。造模结束后，正常组大鼠存活15只，造模大鼠存活70只。将70只复制C-BSA模型成功且存活的大鼠随机分为7组，即阿昔洛韦和阿昔莫司重量份8:2治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司重量份7:3治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司重量份9:1治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司重量份6.5:3.5治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司重量份9.5:0.5治疗组、慢性肾炎模型对照组(模型组)、雷公藤多苷治疗组(阳性对照组)，每组10只，经统计学分析P＞0.05，即说明这组在尿蛋白的轻重程度上，无显著性差异，有可比性，具备统计学意义。阿昔洛韦和阿昔莫司的组合物先用少量DMSO超声溶解，再用蒸馏水溶解稀释灌胃。(四)给药方案设定正常组：蒸馏水2ml，每日1次晚间8点灌胃。模型组：蒸馏水2ml，每日1次晚间8点灌胃。阳性对照组：药液2ml(相当于10g/kg/d)，每日1次晚间8点灌胃。阿昔洛韦和阿昔莫司重量份8:2治疗组：药液2ml(相当于4g/kg/d阿昔洛韦+1g/kg/d阿昔莫司)，每日1次晚间8点灌胃。阿昔洛韦和阿昔莫司重量份7:3治疗组：药液2ml(相当于3.5g/kg/d阿昔洛韦+1.5g/kg/d阿昔莫司)，每日1次晚间8点灌胃。阿昔洛韦和阿昔莫司重量份9:1治疗组：药液2ml(相当于4.5g/kg/d阿昔洛韦+0.5g/kg/d阿昔莫司)，每日1次晚间8点灌胃。阿昔洛韦和阿昔莫司重量份6.5:3.5治疗组：药液2ml(相当于3.25g/kg/d阿昔洛韦+1.75g/kg/d阿昔莫司)，每日1次晚间8点灌胃。阿昔洛韦和阿昔莫司重量份9.5:0.5治疗组：药液2ml(相当于4.75g/kg/d阿昔洛韦+0.25g/kg/d阿昔莫司)，每日1次晚间8点灌胃。以上各组均连续给药4周，每周测试1次24h尿蛋白，测量之前各组均禁食不禁水1次，持续时间为12h，其余时间自由取食、饮水。(五)、生化指标检测及病理切片制作1、尿标本检测在造模前，实验第4、5、6、8周，将大鼠置于代谢笼中(釆样前禁食不禁水12h，收集大鼠的24小时尿液。使用双缩脲测量大鼠的尿蛋白含量，然后使用半自动生化分析仪，在波长540nm下，测定各管吸光度值，并换算成实际尿蛋白含量并记录。2、血清样本检测采集血样前禁食12h。实验第4周，对实验大鼠麻醉后进行眼内龇取血0.5ml，在37℃水浴中静置2h后，以3000rpm离心10分钟，弃去上清液，收集血清，使用试剂盒法测定各指标数值并记录；实验第8周末，将实验大鼠麻醉后，剖开腹腔，找到腹主动脉后取血8ml，釆取血样在37℃水浴中静置2h后，以3000rpm离心10分钟，弃去上清液，收集血清。使用试剂盒测定各指标数值并记录。3、肾组织病理切片制作(1)大鼠肾脏的初步处理实验大鼠麻醉后用断椎法处死，将其固定于鼠台上，于大鼠背部旁下1.5cm处作纵切口，暴露出肾脏，将双肾取出，分离血管，脂肪及表面包膜，用醋酸缓冲液(PBS)液冲洗，然后置于10％福尔马林固定24h。(2)组织脱水及包埋将肾脏标本从10％福尔马林液中取出，使用蒸懷水反复冲洗5min。然后使用自动脱水机脱水：在浓度为70％乙醇液中放置6h，转入浓度为80％的乙醇液中放置6h，转入浓度为95％的乙醇液中放置12h，转入浓度100％的乙醇液中放置4h，转入二甲苯溶液1中放置10min，然后转入二甲苯溶液2中放置10min，继续转入60℃石蜡1号中放置15min，转入60℃石蜡2号中放置15min。上述步骤完成后，立即取出脱水标本，放入组织包埋机的浸蜡盒中，对标本进行石蜡包埋，标号，然后按组别标记。(3)制作病理切片及HE染色使用切片机将已包錯标本制成厚度约为3μm的薄片，在55℃展片机中展片，将薄片均匀贴于载玻片上。然后将其放入烤箱中60℃下烤30min直至组织蜡完全融解，而后进行脱蜡处理，使用蒸傭水反复清洗，随后在二甲苯1、2液中各浸泡10min，经不同浓度的乙醇液中(从浓度为100％至70％)逐级脱水，而后在苏木素染液中放置1min，自来水冲洗，1％HCL酒精分化，于95％伊红酒精染液中放置1min，然后进行脱水、透明，使用中性树胶封片。在光学显微镜下观察肾组织病变程度、形态改变，并使用光学显微摄像系统照相。(4)数据处理统计方法全部实验数据采用SPSS18.0统计软件进行处理，计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验及方差分析，计数资料使用卡方检验，P＜0.05有统计学意义。三、试验结果1、24h尿蛋白量的变化与正常组比较，造模组尿蛋白明显升高，具有显著差异(P＜0.01)，提示造模成功。实验第5周至第8周，除正常组、阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组外，各治疗组24小时尿蛋白含量随时间呈现降低趋势，模型组的下降幅度很小；与模型组比较，阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组的尿蛋白呈现显著下降趋势(P＜0.01)；与模型组比较，阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组的尿蛋白呈现显著下降趋势(P＜0.05)。结果说明：阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组均能显著降低肾炎大鼠的尿蛋白含量，其中，阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组治疗效果最好，与阳性药接近；阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组无明显治疗作用。见下表(大鼠24h尿蛋白，mg/24h)。2、血清肌酐(Cr)的变化实验第4周至第8周，正常组与模型组的Cr无明显变化，阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组及阳性对照组的Cr均下降，统计学上有显著差异(P＜0.01)，但是，阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组对Cr的下降作用不如阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组及阳性对照组；阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组无明显治疗作用。结果见下表(对大鼠Cr水平的影响，μmol/l)。组别第4周第8周正常组71.4±5.3871.6±6.06模型组117.1±7.28118.7±7.68阳性对照组116.5±7.1571.5±5.06阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组116.8±7.4493.7±6.73阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组116.9±7.4992.9±6.45阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组114.8±7.4470.8±5.32阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组116.9±7.29116.4±7.63阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组117.2±7.18116.7±7.693、血清尿素氮(BUN)的变化实验第4周至第8周，正常组与模型组的BUN无明显变化，阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组、阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组及阳性对照组的BUN均下降，统计学上有显著差异(P＜0.01)，但是，阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组对BUN的下降作用不如阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组及阳性对照组；阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组和阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组无明显治疗作用。结果见下表(对大鼠BUN水平影响，mmol/l)。组别第4周第8周正常组7.4±0.387.3±.46模型组11.1±0.6811.2±0.68阳性对照组11.2±0.477.2±0.53阿昔洛韦和阿昔莫司7:3治疗组11.3±0.558.9±0.59阿昔洛韦和阿昔莫司9:1治疗组11.4±0.498.9±0.48阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组11.2±0.497.1±0.59阿昔洛韦和阿昔莫司6.5:3.5治疗组11.1±0.6510.8±0.72阿昔洛韦和阿昔莫司9.5:0.5治疗组11.1±0.6210.6±0.584、肾组织病理形态学的观察肉眼观察：正常组大鼠的肾脏外观呈深红色，表面光滑柔软，皮质、髓质界面清楚；模型组大鼠的肾脏呈淡红色，皮质增厚，肿胀明显，部分大鼠的皮质髓质边界不清；阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组治疗组大鼠的肾脏大多数呈红色，有轻度肿胀，皮质略增厚，皮质、髓质界面清楚；阳性对照组大鼠的肾脏大多数呈淡红色，少数呈红色；有轻度肿胀，皮质略增厚，皮质、髓质界面清楚。光镜下观察：正常组大鼠肾组织的肾小球细胞、肾小管结构及间质形态正常，结构清晰，未见间质炎细胞浸润、水肿及纤维化，系膜细胞及基质无增殖；模型组大鼠肾组织见肾小球肿胀，大多数肾小球毛细血管狭窄，体积增大明显，细胞数增多，系膜基质增生明显，大量肾小管管腔扩张，肾间质出现纤维化，且有炎细胞浸润；阿昔洛韦和阿昔莫司8:2治疗组的肾小球内壁光滑，间质增生明显减少，有少量炎细胞浸润。上述结果表明，阿昔洛韦和阿昔莫司联合作用且满足一定的重量份之比(7:3～9:1)时，对慢性肾炎的治疗效果非常显著，与阳性药无显著性差异，可以开发成治疗慢性肾炎的药物。实施例2：片剂的制备制备阿昔洛韦与阿昔莫司的组合物，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，常规比例加入赋形剂制粒压片。实施例3：口服液的制备制备阿昔洛韦与阿昔莫司的组合物，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。实施例4：注射液的制备制备阿昔洛韦与阿昔莫司的组合物，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。研究发现，pH范围在6.2～6.4时，加速试验及长期试验中，注射液始终保持澄清。pH低于6.2或高于6.4时，长期3月常温条件下出现沉淀，且振摇无法复溶。实施例5：无菌粉针的制备制备阿昔洛韦与阿昔莫司的组合物，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。实施例6：胶囊剂或颗粒剂的制备制备阿昔洛韦与阿昔莫司的组合物，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。当前第1页1 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