一种治疗痛风的中药复方的制作方法

本发明涉及一种中药复方治疗特殊疾病，特别是对于治疗痛风的良好疗效，属于中医中药技术领域。

背景技术：

痛风是一种单钠尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。痛风是长期嘌呤代谢障碍及(或)尿酸排泄减少,血尿酸增高引起组织损伤的一组临床综合征,高尿酸血症是痛风最重要的生化基础。痛风包括急性痛风性关节炎和慢性痛风石疾病，可并发肾脏病变，重者可出现关节破坏、肾功能损害，常伴有高血脂病、高血压病、糖尿病、动脉硬化及冠心病等，发病率呈逐年增高趋势。痛风和高尿酸血症现已成为中老年男性的常见病。近年来,其发病率呈逐年上升趋势,发病年龄呈现低龄化,给社会带来巨大的负担,并且与高血压、高脂血症、糖尿病等疾病的发生密切相关,已成为识别代谢综合征的早期标志。目前,对于痛风与高尿酸血症的常规治疗仍以西药为主,通常选用秋水仙碱、非甾体类抗炎药、苯溴马隆、丙磺舒、别嘌呤醇等,这些药物以不同的作用环节达到缓解或治疗痛风与高尿酸血症的目的,但越来越多的临床观察发现它们都具有一定的毒副作用，常引起恶心、呕吐、腹泻、痉挛性腹痛等不良反应。如秋水仙碱，曾被列为治疗痛风性关节炎急性发作的首选药物，由于其治疗剂量与中毒剂量十分相近，容易发生中毒，且不良反应多，有恶心、呕吐、腹泻、骨髓抑制、肝细胞坏死及神经系统毒性、精子减少、脱发及伸舌样白痴等引起胃肠道症状，肌肉、周围神经病变，骨髓抑制；别嘌呤醇能够引起肝功能障碍，再生障碍性贫血过敏性脉管炎等不良反应；丙磺舒能够引起溶血性贫血，过敏性休克，肾病综合征等；苯嗅马隆(痛风利仙、苯香豆素)引起严重肝功能障碍。因此,其药物治疗和新药研发已越来越引起人们的重视，寻找更有效而毒副作用更低的药物已成为当前亟待解决的任务。近年来,国内外针对痛风的发病机制、临床症状及其并发症等方面的治疗药物进行了大量的研究,包括对中药、中成药的研究,目前，中医药防治高尿酸血症具有副作用少、易被接受和整体疗效理想等优势。动物实验结果表明，单味中药或中药复方可较好的降低高尿酸血症模型动物尿酸水平[1]。但中药治疗痛风仍存在许多不足之处：中药的作用是多靶点的，因此中药对痛风性关节炎多层次、多方面影响因素的综合调控尚需进一步研究；目前研究多采用外源性尿酸钠结晶(MSU)所致的局部关节症状模拟的模型，有别于人类因代谢障碍而形成的痛风性关节炎，因此对抗痛风药物的效果和作用机制的评价尚不准确[2]；有确切疗效的中药有效成分难以进入到中药临床试验阶段，大多数仅停留于对药效的探索和动物实验阶段，而这些基础研究成果如何真正的转化到临床应用阶段存在诸多问题，且初发现的有效成分，在基础研究方面缺乏系统性[3]。目前，张娴娴等人对复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症的临床观察中发现复方土茯苓颗粒能有效的降低高尿酸血症患者血尿酸水平，且远期疗效及安全性好[4]。胡旭光等人发现薏苡降浊汤可抑制尿酸盐引起的急性大鼠足肿胀、降低血清尿酸和前列腺素E2(PGE2)水平、改善大鼠足踝关节滑膜组织炎症[5]。现代研究发现：薏苡仁浸出物具有显著地镇痛抗炎作用，能显著抑制多种关节炎及毛细血管通透性，亦可明显降低炎性组织中的PGE2的量，临床报道含有薏苡仁的方剂用于亚急性和慢性风湿性关节炎，疗效确切[6]。郭淑云等给予土茯苓水提物干预后发现，土茯苓可降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸(UA)水平和血清黄嘌呤氧化酶(XOD)活性，推测土茯苓可能通过抑制XOD的活性、增强机体抗氧化能力来降低血UA，起到对肾脏的保护作用[7]。这对今后开发更多的靶向治疗药物,防治痛风与高尿酸血症将具有重要意义。

参考文献：

1.Wang HQ.Traditional Chinese and Western medicine research overview of hyperuricemia[J].J NEW CHIN Med(新中医),2012,44(4):120-122.

2.李荣华，聂慧，刘友章.中药治疗痛风性关节炎的作用机理研究进展[J].辽宁中医杂志,2010,37(7):1398-1400.

3.Wang HQ,Zhan J,Wang XB.et al.中药有效成分治疗高尿酸血症基础研究进展[J].Chin J Pharmacol Toxicol,2015,29(3):471-476.

4张娴娴，孙维峰，侯燕，等.复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症40例随机对照临床观察[J].2016,1(57):41-45.

5.胡旭光，温亚，戴王强，等.薏苡降浊汤对大鼠急性痛风性关节炎模型的影响[J].中成药,2014,36(8):1742-1744.

6.高岚，张仲一，张莉，等.薏苡仁汤镇痛消炎作用的实验研究[J].天津中医学院学报,2004,23(2):62-64.

7.郭淑云,张薇,张琰等.土茯苓水提物对高尿酸血症模型小鼠血清尿酸和甘油三酯、胆固醇的影响[J].中国药房,2011,22(47):4439-4440.

技术实现要素：

为了在特效治疗高尿酸血症和急性痛风性关节炎的情况下，减少服用药物带来的副作用，降低治疗高尿酸血症和急性痛风性关节炎的成本。本发明提供了一种治疗痛风的中药复方药物，该药物有效地解决上现有技术存在的上述问题。该发明专利复方具有的效果好，价格低廉，副作用小等优点，满足了患者对于理想化治疗痛风药物的最朴实的三点基本要求，即该专利发明复方所具有的明显缓解患者病痛的作用，减轻患者因服药而带来的副作用，同时减轻患者服药的经济负担。

本发明所述的治疗痛风的中药复方，其组分及重量配为：土茯苓1份、鬼箭羽1份、生苡仁1份、徐长卿1份。

具体地，作为单副的中药复方的组方配比为土茯苓30g、鬼箭羽30g、生苡仁30g、徐长卿30g。

本发明的中药复方的汤剂的制备方法为：

煎煮生药量为土茯苓30g，鬼箭羽30g，生苡仁30g，徐长卿30g，放入1.5L煎药罐中，加入1L水，浸泡1-2h，于电磁炉上2000W档大火煮开，水开后调到500W继续微微煮沸约1h，期间用长筷翻药3-5次。煮好以后，用多层纱布过滤出汤液，冷却备用。

该中药复方，从临床大方中精简而来。经多年临床经验总结和动物实验，证明确实有效的一组最佳药味，最佳配比的精简复方。临床使用经验显示该方能显著缓解患者临床症状。另外，通过大鼠体内实验我们发现，该复方的水煎剂能明显缓解大鼠的关节肿胀情况。并且通过仪器检测，该方可以明显降低患病大鼠的血尿酸水平，并呈一定的浓度依赖性。不仅如此，相比于中药大方，服用该复方的水煎剂副作用更少，相比西药的治疗，该复方的水煎剂的副作用几乎可以忽略不计。综上所述，该发明复方具备以下优点:

1.该发明中药复方能明显降低大鼠的血尿酸水平，中高浓度复方组中药效果比较明显，明显好于秋水仙碱组。

2该发明中药复方对于痛风性模型鼠的患关节起到明显的消肿作用，其中中高浓度剂量组消肿效果相近，并且十分接近于秋水仙碱组。证明该复方可以明显改善患者的临床症状。

3.该发明中药复方对痛风性关节炎相关的炎症因子有明显的抑制作用，尤其是中剂量组中药复方，对于多种炎症因子有明显的抑制作用。

4.该发明中药复方经长期服用实验后，未发现明显的肝肾毒副作用。

5.相比治疗痛风的常用西药，该复方的成本低廉。

附图说明

图1.该发明专利复方与大复方和其他同药味不同配伍比例复方效果比较。

图2.该发明专利复方对高尿酸血证动物模型大鼠的降血尿酸的作用(图2A)；该发明专利复方对急性痛风性关节炎动物模型大鼠的降血尿酸作用(图2B)。

图3.与模型组相比，该专利发明中药复方对急性痛风性关节炎模型大鼠的关节肿胀程度有明显的降低作用，可以有效抑制炎症反应，减轻关节的肿胀情况(图3A,B)。

图4.QAR-INF-1的上样地图和QAR-INF-1每组的荧光信号图。

图5.通过荧光分析软件计算得出，该发明专利复方对痛风相关的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α等炎症因子具有明显的抑制作用。

图6.通过Raybiotech技术荧光热成像，直接检测该发明专利复方对痛风相关的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α、IL-1α、IL-10、IL-6、MCP-1等的影响。图7.该发明复方对于肾功能相关指标的检测结果，包括肌酐和尿素氮的指标。

图8.该发明复方对于肝脏，心脏，脾脏，肾脏，胸腺，生殖器的毒性检测，HE染色显示，无明显的毒副作用。

具体实施方式

1.需要的药品

秋水仙碱(阳性对照药)(规格：0.5mg，厂家：西双版纳版纳药业有限责任公司，生产批号：150208)

生理盐水(NS)(规格：250ml，厂家：四川科伦药业股份有限公司)

尿酸纳晶体(MSU)(规格：15mg，厂家：sigma，货号：U2875)

腺嘌呤(Adenine)(规格：25g，厂家：sigma，货号：A8626)

氧嗪酸钾盐(Oxonic acid potassium salt)(规格：25g，厂家：sigma，货号：156124)

羧甲基纤维素钠(Sodium carboxymethyl cellulose)(规格：100g，厂家：sigma，货号：419273)

定制高酵母饲料(规格：2kg，厂家：江苏省协同医药生物工程有限公司，质量分数0.1)中药：

土茯苓(规格：1kg，厂家：安徽惠隆中药饮片有限责任公司，生产批号：20140326，产地：广西)

鬼箭羽(规格：1kg，厂家：安徽惠隆中药饮片有限责任公司，生产批号：20150321，产地：浙江)

生苡仁(规格：1kg，厂家：苏州市天灵中药饮片有限责任公司，生产批号：150319010，产地：江苏)

徐长卿(规格：1kg，厂家：安徽惠隆中药饮片有限责任公司，生产批号：20141224，产地：山东)

2.中药复方汤剂的制备和浓缩

(1)制备：

复方A：煎煮生药量为土茯苓30g，鬼箭羽30g，生苡仁30g，徐长卿30g，放入1.5L煎药罐中，加入1L水，浸泡1-2h，于电磁炉上2000W档大火煮开，水开后调到500W继续微微煮沸月1h，期间用长筷翻药3-5次。煮好以后，用多层纱布过滤出汤液，冷却备用。(患者服用，最终汤液分两次，早晚温服)

(2)过滤后的中药汤液用螺旋蒸发仪进行浓缩，最终药液含生药量浓度为1g/ml，放入冰箱待用。(动物实验需要此步骤)

(3)按上述方法制备大复方B：薏苡仁30g，徐长卿30g，鬼箭羽30g，土茯苓30g，牛膝10g，威灵仙15g，黄柏10g，苍术10g，炙甘草3g，杜仲10g，桑寄生10g，川芎10g。

(4)同时制备对照

复方C:土茯苓30g，鬼箭羽15g，生苡仁30g，徐长卿15g；

复方D：土茯苓15g，鬼箭羽30g，生苡仁15g，徐长卿30g；

复方E：薏苡仁15g，徐长卿30g，鬼箭羽15g，土茯苓30g。

3.动物模型的建立

动物：Wistar大鼠(雄性)

3.1尿酸盐诱导急性痛风性关节炎模型

(1)尿酸钠晶体乳液的配制，称取10g尿酸钠晶体，量取100mL生理盐水待用，将称好的尿酸钠晶体缓缓融入100mL的生理盐水中，形成尿酸纳晶体(MSU)100g/L的悬浊液。

(2)适应性喂养后，造模时在大鼠右后踝关节腔注射0.2ml配制好的尿酸钠晶体悬浊液。(大鼠右侧关节背侧从45度方向插入胫骨肌腱内侧，将MSU悬浊液注射到踝关节腔)

(3)注射后1h和两小时后进行模型评估(关节肿胀，出现红肿等炎症反应)

3.2高尿酸血症大鼠模型

(1)高酵母饲料定制于生物公司

(2)羧甲基纤维素钠乳剂的制备，称量10g羧甲基纤维素粉末待用。用量筒量取1L生理盐水至于大烧杯中。在恒温磁力搅拌器上加热到60℃，边搅拌边慢慢撒入称量好的羧甲基纤维素钠。直至完全溶解呈10g/L的均匀的悬浊液待用。(注：以上步骤均在超净台中完成)

(3)氧嗪酸钾溶液的制备，称量20g氧嗪酸钾粉末待用。同上述步骤(1)，将20g氧嗪酸钾粉末缓缓融入750mL配好的羧甲基纤维素钠悬浊液中，配制成30g/L的悬浊液备用。(注：以上步骤均在超净台中完成)

(4)腺嘌呤溶液的制备，称量腺嘌呤粉末10g待用，量取1L生理超纯水，将粉末缓缓溶解到1L超纯水中，配制成10g/L的腺嘌呤溶液备用。

(6)造模组的大鼠喂食定制的高酵母饲料，同时给予腺嘌呤100mg/(kg.d)分早晚灌胃，同时给予氧嗪酸钾悬液150mg/(kg.d)皮下注射两次，每次间隔12h。

(7)每日定时尾静脉取血，全自动生化仪检测血尿酸水平，持续三天维持高水平视为造模成功。

4.大鼠灌胃给药量

(1)大鼠日用药量参照临床病人标准用药换算，单个复方中中药生药含量(土茯苓30g，鬼箭羽30g，生苡仁30g，徐长卿30g)总计120g。体重60kg的患者每日用药剂量是120g生药含量，最终为2g/kg。所以最终确定大鼠用药含生药量为低剂量组(5g/kg.d)，中剂量组(10g/kg.d)，高剂量组(20g/kg.d)，其他复方剂量均换算成同等生药含量剂量使用。

5.大鼠分组及相应处理

阴性对照组(对照，等剂量超纯水灌胃)

复方A组(复方A，中剂量)

复方B组(复方B，中剂量)

复方C组(复方C，中剂量)

复方D组(复方D，中剂量)

复方E组(复方E，中剂量)

6.大鼠分组及相应处理

阴性对照组(对照，等剂量超纯水灌胃)

模型组+0g/天给药量组(模型组，等剂量超纯水灌胃)

模型组+1g/天给药量组(低剂量组)

模型组+2g/天给药量组(中剂量组)

模型组+4g/天给药量组(高剂量组)

模型组+秋水仙碱0.06mg/天给药量组(西药对照组)

7.大鼠处理

6.1急性痛风性关节炎组大鼠处理

(1)造模成功后开始给药，连续给药5日后，各组大鼠麻醉，腹主动脉取血，分别装进1.5EP管中和黄头采血管中。

(2)剖杀大鼠，摘取大鼠的肝脏，肾脏，脾脏，胸腺，生殖器等放置于液氮中冷冻备用。

(3)剪下大鼠右后侧关节，用眼科手术剪，剪出滑膜组织，放置于液氮中备用。

6.2高尿酸血症组大鼠的处理

(1)确定造模成功后开始给药，连续给药10日后，各组大鼠麻醉，腹主动脉取血，分别装进1.5EP管中和黄头采血管中。

(2)剖杀大鼠，摘取大鼠的肝脏，肾脏，脾脏，胸腺，生殖器等放置于液氮中冷冻备用。8.后期样本处理

(1)1.5mL EP管中的全血，立即进行全血离心，3000rpm，15min提取上层血清冷冻备用。

(2)黄头采血管中的血用全自动生化仪进行分析，检测血尿酸水平，肌酐，尿素氮等指标。

(3)大鼠血清分离后作何处理(IL-1β，IL-1α，TNF-α，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-13，MCP-1，IFNg)ELISA

9.数据分析

用spss16.0进行数据分析。

10.实验结果

该发明专利复方Compound A与大复方Compound B和其他同药味不同配伍比例复方Compound C、Compound D和Compound E效果比较，结果显示，该发明专利复方效果与大复方效果相似，差异无统计学意义。从经济角度考虑优于大复方。该复方配伍比例与其他比例进行对比发现，该比例效果明显优于其他配伍比例，差异有统计学意义。因此最终确认，改发明专利复方的最佳配伍比例为1:1:1:1,结果如图1A和图1B所示。该发明专利复方对高尿酸血证动物模型大鼠具有明显的降血尿酸的作用(图2A)。该发明专利复方对急性痛风性关节炎动物模型大鼠同样具有明显的降血尿酸的作用(图2B)。与模型组相比，该专利发明中药复方对急性痛风性关节炎模型大鼠的关节肿胀程度有明显的降低作用，可以有效抑制炎症反应，减轻关节的肿胀情况(图3A,B)。采用Raybiotech技术荧光对实验大鼠进行样品处理，QAR-INF-1的上样地图和QAR-INF-1每组的荧光信号图如图4A所示，从图中可以看出该发明专利复方对部分痛风相关的炎症因子具有明显的抑制作用如图4B所示。通过荧光分析软件计算得出，该发明专利复方对痛风相关的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α等炎症因子具有明显的抑制作用，结果如图5所示。通过Raybiotech技术荧光热成像，直接检测该发明专利复方对痛风相关的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α、IL-1α、IL-10、IL-6、MCP-1等的影响。该发明专利复方对痛风相关的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α等炎症因子具有明显的抑制作用，结果如图6热图所示。该发明专利中药复方的最大优点就是有效，低毒副作用。该发明复方对于肾功能相关指标的检测结果显示，该复方对于肾功能没有明显的毒副作用，反而可以有效降低高尿酸血症和急性痛风性关节炎导致的轻微的肌酐和尿素氮的升高。结果如图7所示。对于毒副作用的检测，HE染色了实验大鼠的肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、心脏、生殖器等,结果未发现该发明专利复方有明显的脏器损害，结果如图8所示。

综上所述：(1)该发明专利中药复方能明显降低高尿酸血症和急性痛风性关节炎组大鼠的血尿酸水平，中高浓度复方组中药效果比较明显，好于秋水仙碱组。

(2)该发明专利中药复方对于痛风性模型鼠的关节起到明显的消肿作用，其中中高浓度剂量组消肿效果相近，并且十分接近于秋水仙碱组。

(3)该发明专利中药复方对痛风性关节炎相关的炎症因子有明显的抑制作用，尤其是中剂量组中药复方，对于多种炎症因子有明显的抑制作用。

(4)该发明专利中药复方短期服用，未出现明显的肝肾损害。