本发明属于兽用药技术领域，具体涉及一种蒲地蓝消炎颗粒及其制备方法和产品质量控制方法。
背景技术：
鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是由冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）的传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus，IBV)引起的一种高度接触性传染病，是集约化养鸡场的重要疫病之一。IBV对环境的抵抗力强，能持久地存在于周围的环境中，一旦感染，很难根除。其特征是病鸡咳嗽、喷嚏和气管发生哆音；雏鸡还可以出现流涕，产蛋鸡产蛋减少和质量变劣。该病具有高度的传染性，因病原具有多血清型，而使免疫接种复杂化。感染鸡生长受阻，耗料增加、产蛋和蛋质下降、死淘率增加，给养鸡业造成大经济损失。
IB一年四季均可发生，在寒冷、高热季节发病率更高。炎热、寒冷、拥挤、通风不良及维生素、矿物质、微量元素的缺乏都可促使本病的发生。IBV主要是经空气飞沫和呼吸道传给易感鸡，传播速度快，往往整栋鸡舍同时发病。此外，IBV还可通过泄殖腔和被污染的饲料、饮水、用具等经消化道使易感鸡感染发病。病鸡康复后仍能排毒长达140天之久。
疫苗预防是减少IB发病的主要方法，但IB并未得到有效控制。具体原因有：①国内流行的血清型传染性支气管炎病毒不同于其它国家或地区；②外来血清型的传染性支气管炎病毒不断传入我国，使得我国该病毒血清型众多，难于防治；③国内鸡群同时有不同型和变异的禽传染性支气管炎病毒共同存在和流行。
目前尚无治疗IB的特效药，当前对IB采取的防制措施主要有以下四方面：①强化饲养管理，减少人流、物流等因素导致外来病源入侵，如禁止从疫区或不安全的鸡场引种，种蛋用甲醛薰蒸2次才能孵化等；②规范环境消毒，交替使用醛类、酚类、酸类、碱类、表面活性剂类、氧化剂类等消毒剂，快速消除养殖环境中有害病源；③严格执行疫苗接种程序，保护鸡群不受IBV的侵害；④发现IBV病情，及时采取应对措施；如呼吸型给予化痰平喘药，肾型给予利尿药物或补充电解质，减少对肾脏的损伤等；⑤经验中药组方应对。
技术实现要素：
为克服现有技术中存在的不足之处，本发明的目的旨在提供一种蒲地蓝消炎颗粒及其制备方法和产品质量控制方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种蒲地蓝消炎颗粒，由下述重量百分比的原料药制成：蒲公英20-40%、黄芩15-30%、黄连10-20%、苦地丁10-20%、板蓝根10-20%、连翘5-10%、石膏5-10%、甘草5-10%。
本发明处方机理：方中蒲公英清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效，故为君药；黄芩、黄连、板蓝根性味苦寒，清热解毒，凉血利咽，用以为臣药，以加强君药清热解毒，利咽消肿之功；连翘疏散风热，清热解毒，散痈消肿；石膏与之配伍，借石膏清气分热，阻睾透气机作用，可使里热及半表半里之热尽透发而解；用甘草补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和百药。诸药合用，共奏清热解毒，抗炎消肿，从而扭转病机，截断病势，切断向营血的传变。本产品可从抗病毒、免疫调节、抗炎、解热镇痛、抗应激等多方位调节和治疗，从而使热清、邪散、肿消等诸病得以缓解。
根据中兽药理论进行组方后，本发明处方在于治疗鸡传染性支气管炎之外，具有更强的清热解毒，抗炎消肿能力，临床使用更有效。本发明蒲地蓝消炎颗粒呈棕黄色至棕褐色的颗粒；味微苦，主要用于治疗和预防鸡传染性支气管炎，颗粒剂使用方便，利于吸收。用法用量：混饮，每1L水加蒲地蓝消炎颗粒2-8g，连用3-5天。
制备方法，步骤如下：
按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加6-8重量倍的60-70%乙醇提取数次，每次1-2h，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.30-1.32的稠膏，备用；将板蓝根粗粉加6-8重量倍的水和占其重量百分比2-4%的复合酶，搅匀，加热至50-70℃温浸数次，每次1-2h，滤过，合并滤液，滤液经膜分离后得澄清液即板蓝根水浸液，备用；剩余其它原料药粗粉加6-8重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取0.5-1.5h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，加入板蓝根水浸液，浓缩成60℃相对密度1.30-1.32的稠膏；与黄芩稠膏混匀，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得蒲地蓝消炎颗粒。
所述连续逆流式提取为药材与溶剂在浸出容器中沿相反方向运动，连续而充分地进行接触提取的一种方法。正向进料、反向进溶剂，物料与溶剂的流动为逆向连续动态流动，使药材和溶媒能保持相对运动，使料液浓度扩散更新持续作用，进而保证了料液浸出速度快。
较好地，所述复合酶的重量百分比组成为：纤维素酶20-40%、胰蛋白酶20-40%、淀粉酶10-30%。
较好地，两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯或聚砜，截留分子量为6万-10万。
较好地，所述辅料的重量百分比组成为：蔗糖60-70%、糊精30-40%。
产品质量控制方法：采用TLC法对所得蒲地蓝消炎颗粒中的蒲公英、黄芩、黄连、苦地丁、板蓝根和连翘进行鉴别；水分、粒度、溶化性、装量和微生物限度检查均符合《中华人民共和国兽药典》2010年版二部附录颗粒剂项下；采用HPLC法测定黄芩苷的含量和黄酮苷类化合物总含量。
有益效果：本发明方法中，将原料药破碎成粗粉，有利于有效成分的溶出，比饮片提取缩短提取时间；复合酶提取温度低，提取收率高；连续逆流式提取有诸多优点：提取速度快、有效成分提取充分、提取收得率高、溶剂耗量少、药液浓度高、减少了蒸发浓缩等后续处理艺、滚筒内药材粗粉移动速度可调节，从而可根据药材特点调节提取时间的长短、药材在温和的动态环境下进行提取，加热温度较低、有效成分破坏较少，使药液中杂质含量少，属于连续式生产，处理能力大。总体上，蒲地蓝消炎颗粒，符合国家发布的新兽药范畴；通过技术改造，去除了不必要的杂质，增加了有效成分含量，利于禽的吸收，从而提高治疗疗效。此外，本发明颗粒剂组方合理、吸收率高，可以通过饮水添加，使用方便，通过饮水添加，大大降低了劳动强度，有利于集约化、规模化养殖。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种蒲地蓝消炎颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：蒲公英30%、黄芩20%、黄连10%、苦地丁10%、板蓝根10%、连翘10%、石膏5%、甘草5%。
制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加7重量倍的60v%的乙醇先提取2h，滤过，药渣再加7重量倍的60v%的乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.31的稠膏，备用；将板蓝根粗粉加7重量倍的水和占其重量百分比3%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，药渣再加7重量倍的水和占其重量百分比3%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，合并两次温浸滤液，滤液经膜分离后得澄清液即板蓝根水浸液，备用；剩余其它原料药粗粉加7重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取1h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，加入板蓝根水浸液，浓缩成60℃相对密度1.31的稠膏；与黄芩稠膏混匀，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得蒲地蓝消炎颗粒；其中，所述复合酶的重量百分比组成为：纤维素酶35%、胰蛋白酶35%、淀粉酶30%，纤维素酶的酶活为20000U/g、胰蛋白酶的酶活为4000U/g、淀粉酶的酶活为30000U/g；所述辅料的重量百分比组成为：蔗糖65%、糊精35%；两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为8万。
实施例2
一种蒲地蓝消炎颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：蒲公英40%、黄芩15%、黄连10%、苦地丁10%、板蓝根10%、连翘5%、石膏5%、甘草5%。
制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加6重量倍的65v%的乙醇先提取2h，滤过，药渣再加6重量倍的65v%的乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.30的稠膏，备用；将板蓝根粗粉加6重量倍的水和占其重量百分比2%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，药渣再加6重量倍的水和占其重量百分比2%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，合并两次温浸滤液，滤液经膜分离后得澄清液即板蓝根水浸液，备用；剩余其它原料药粗粉加6重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取1h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，加入板蓝根水浸液，浓缩成60℃相对密度1.30的稠膏；与黄芩稠膏混匀，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得蒲地蓝消炎颗粒；其中，所述复合酶的重量百分比组成为：纤维素酶30%、胰蛋白酶40%、淀粉酶30%，纤维素酶的酶活为20000U/g、胰蛋白酶的酶活为4000U/g、淀粉酶的酶活为30000U/g；所述辅料的重量百分比组成为：蔗糖60%、糊精40%；两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为6万。
实施例3
一种蒲地蓝消炎颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：蒲公英20%、黄芩20%、黄连15%、苦地丁10%、板蓝根10%、连翘10%、石膏10%、甘草5%。
制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加8重量倍的70v%的乙醇先提取2h，滤过，药渣再加8重量倍的70v%的乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.32的稠膏，备用；将板蓝根粗粉加8重量倍的水和占其重量百分比4%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，药渣再加8重量倍的水和占其重量百分比4%的复合酶，搅匀，加热至60℃温浸2h，滤过，合并两次温浸滤液，滤液经膜分离后得澄清液即板蓝根水浸液，备用；剩余其它原料药粗粉加8重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取1h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，加入板蓝根水浸液，浓缩成60℃相对密度1.32的稠膏；与黄芩稠膏混匀，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得蒲地蓝消炎颗粒；其中，所述复合酶的重量百分比组成为：纤维素酶40%、胰蛋白酶40%、淀粉酶20%，纤维素酶的酶活为20000U/g、胰蛋白酶的酶活为4000U/g、淀粉酶的酶活为30000U/g；所述辅料的重量百分比组成为：蔗糖70%、糊精30%；两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为10万。
对照例1
该对照例与实施例1的不同之处在于：仅由蒲公英、黄芩、苦地丁、板蓝根四味药材制成，并且这四味药材之间的重量比例同实施例1，即蒲公英∶黄芩∶苦地丁∶板蓝根=3∶2∶1∶1。
制备方法：同实施例1。
产品质量控制例1
性状 本品为棕黄色至棕褐色的颗粒；味微苦。
鉴别
（1）为方中蒲公英的薄层色谱鉴别：
供试品溶液的制备：取本品5.0g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取3次，每次15ml，弃去三氯甲烷液，水层用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺蒲公英药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。
固定相：硅胶G薄层板。
展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5，体积比）。
点样量：5-10μl。
展开距离：8-10cm。
检视：展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，缺蒲公英阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。
（2）为方中黄芩的薄层色谱鉴别：
供试品溶液的制备：取本品5.0g，研细，加甲醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，放冷，用稀盐酸调节pH值至1～2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺黄芩药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。
固定相：硅胶G薄层板
展开剂：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1，体积比）。
点样量：5-10μl。
展开距离：8-10cm。
检视：展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，置日光下检视。
结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄芩阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。
（3）为方中黄连的薄层色谱鉴别：
供试品溶液的制备：取本品5.0g，加硅藻土2 g，研细，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
缺黄连阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺连翘的阴性对照样品，取缺黄连的阴性样品5.0g，按供试品溶液制备方法，制得缺连翘阴性溶液。
展开条件的选择：吸取上述三种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-浓氨试液-甲醇（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，体积比）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄连阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。
（4）为方中连翘的薄层色谱鉴别：
供试品溶液的制备：取本品5.0g，研细，加水20ml，超声20分钟，滤过，滤液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱（100-200目，6g，内径1cm）上，用70v%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
缺连翘阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺连翘的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法，制得缺连翘阴性溶液。
展开条件的选择：吸取上述三种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5∶1，体积比）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至班点显色清晰。
结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺连翘阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。
（5）为方中苦地丁的薄层色谱鉴别：
供试品溶液的制备：取本品5.0g，加浓氨试液湿润，加三氯甲烷30ml，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取紫堇灵对照品，加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺苦地丁药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。
固定相：0.4%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板。
展开剂：环己烷-三氯甲烷-甲醇（7∶2∶1，体积比）
点样量：5-10μl。
展开距离：8-10cm。
检视：展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，日光下检视。
结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺苦地丁阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。
（6）为方中板蓝根的薄层研究
供试品溶液的制备：取本品5.0g，研细，加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加稀乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取精氨酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺板蓝根药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。
固定相：硅胶G薄层板。
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5，体积比）
点样量：5-10μl。
展开距离：8-10cm。
检视：展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。
结果：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照样品在相应的位置上无干扰。
产品质量控制例2
按《中国兽药典》2010版二部附录颗粒剂要求及质量标准草案，对产品进行了性状、粒度、水分、溶化性、装量、微生物限度及装量检查。结果见下表1。
产品质量控制例3--测定黄芩苷的含量
测定方法定为：
【仪器与试药】高效液相色谱仪：Agilent Technologies 1260，安捷伦色谱数据工作站，紫外可变波长检测器（安捷伦科技有限公司）。
对照品：黄芩苷，批号：110715-201318，含量为93.3%，购自中国食品药品检定研究院。
蒲地蓝消炎颗粒：实施例1、实施例2、实施例3的产品。
甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂都采用分析纯。
【色谱条件与系统适用性试验】用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以0.6％（g/mL）磷酸溶液－甲醇（53∶47，体积比）为流动相；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2000。
【对照品溶液的制备】 取黄芩苷对照品（批号：110715-201318，含量为93.3%，购自中国食品药品检定研究院）适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得。
【供试品溶液的制备】本品研细，取约3 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
【测定法】 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
产品含量测定结果如表2。
动物实验例
1 材料与方法
1.1 试验药物
试验第1组～试验第3组：实施例1蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量三个组。
试验第4组为药物对照组1：对照例1蒲地蓝消炎颗粒。
试验第5组为药物对照组2：麻杏石甘散，四川恒通动物制药有限公司，批号：20160305。
1.2 试验动物和病毒
1日龄广西富凤鸡，雄性，购于南宁市良凤农牧有限责任公司。饲养至15日龄供试验用。免疫程序为：1日龄时鸡马立克氏病疫苗肌肉注射，7日龄时鸡新城疫Ⅳ系疫苗滴鼻点眼，14日龄时鸡传染性法氏囊弱毒苗滴鼻点眼，各疫苗分别按照各自的产品说明书接种免疫即可。饲料为市售雏鸡全价饲料，不含抗病毒药物。
鸡传染性支气管炎病毒（IBV）：M41标准毒株，购自中国兽药监察所，批号：AV1511。实验室测定其EID50为10-6.68/0.2mL。
将M41标准毒株用生理盐水稀释浓度为100×EID50，稀释好的病毒液加青霉素和链霉素双抗至病毒液中青霉素的浓度为100U/mL、链霉素的浓度为0.1mg/mL，4℃冰箱过夜，经尿囊腔接种于7日龄SPF鸡胚，每个鸡胚接种0.2mL，于37℃恒温培养箱中孵育，弃去24h内死亡胚，孵至72h，用鸡胚尿囊液传至第3代，用无菌注射器采集鸡胚尿囊液于洁净灭菌平板中，备用。
1.3 试验方法
1.3.1 试验动物分组及处理
采用随机原则分组，将15日龄供试鸡210只分为7组，每组30只。其中第1～3组为高、中、低剂量三个组，第4组为药物对照组1，第5组为药物对照组2，第6组为感染对照组，第7组为空白对照组。
第1～6组每只鸡用100×EID50 IBV第3代鸡胚尿囊液滴鼻点眼染毒，0.2mL/只。第7组为空白对照组，不做任何处理。
攻毒后待试验鸡出现精神沉郁，食欲下降，羽毛松乱，怕冷，扎堆，张口呼吸，气喘，气管啰音，口腔流粘液，咳嗽，打喷嚏，饮水量增加等鸡传染性支气管炎临床症状后，按表3所列的用法用量给药。停药后对动物的临床表现进行跟踪观察，观察时间持续到停药后第7天。于感染前及观察结束后对试验鸡称体重。
1.3.2 临床疗效的观察
（1）观察时间：首次用药开始观察，停止给药后继续观察7天。
（2）临床症状及记录：试验期间，每天观察并记录鸡的临床表现，如精神、食欲、呼吸道症状、口腔是否流粘液，饮水量等。于试验结束时解剖试验鸡，观察记录肺脏、气管、支气管、鼻窦和鼻腔等处的病理变化。
1.3.3 疗效评价标准
治愈率：试验期间，经用药后临床症状消失，精神及采食情况恢复正常判为治愈。每组治愈鸡数占每组试验鸡数的百分率为治愈率。
有效率：试验期间，经用药后临床症状减轻，精神及采食情况改善判为有效。每组有效鸡数占每组试验鸡数的百分率为有效率。
病毒分离率：于试验结束时解剖试验鸡，随机抽取部分鸡的肺脏、气管及气管下端分叉部，按现有技术分离病毒，计算病毒分离率。病毒分离率=分离到病毒的样本数/样本总数。
1.3.4 疗效综合判定
依据临床疗效、病理解剖变化等的差异性分析，对该药物的疗效做出综合评定。
1.4 数据分析与处理
采用SPSS17.0统计软件进行数据分析与处理。计数资料采用X2检验；计量资料采用t检验或方差分析，P ＜0.05为差异显著；P ＜0.01为差异极显著。
1.5 结果与分析
1.5.1 临床症状
试验鸡于攻毒后48 h陆续发病，各攻毒组的发病率均为100%，迅速波及全群，但均无鸡只死亡，72 h后开始出现明显临床症状，病鸡主要表现为精神萎靡，不安，喜叫，食欲减退，饮欲增加，扎堆，甩头，抓鼻，流泪，流涕，部分鸡鼻窦肿胀，个别鸡出现拉稀现象。夜间能听到明显的咳嗽声和呼吸啰音。
通过给予不同剂量的本发明实施例1蒲地蓝消炎颗粒3天后与感染对照组比较，病情减轻，精神以及食欲好转，夜间观察咳嗽和啰音减少，其中以蒲地蓝消炎颗粒高剂量组最佳。用药结束后第一天，观察各用药组试验鸡的精神状态明显好转，临床症状明显减轻，夜间观察仅有零星咳嗽声，啰音已消失。给药后第6天观察，各用药组试验鸡的精神状态基本恢复正常，仅有少许的鸡出现不同频率的甩头现象。
于给药后第7天，每组随机抽取15只试验鸡，颈静脉放血处死，解剖观察各组试验鸡内脏器官的病变。结果：感染对照组鸡口腔和鼻窦中有大量的黏液，有的黏液呈胶冻样，气管都有明显的出血，充血现象；肺部有明显的充血，出血现象。各治疗组试验鸡的解剖病变较阳性对照组的轻。
1.5.2 治疗效果
给药5天后的疗效结果见表4：本发明实施例1各剂量蒲地蓝消炎颗粒的效果要明显优于对照例1的蒲地蓝消炎颗粒，其中本发明实施例1低剂量蒲地蓝消炎颗粒的疗效与麻杏石甘散基本相当，但本发明实施例1中、高剂量的蒲地蓝消炎颗粒的疗效明显优于麻杏石甘散。结果表明，本发明蒲地蓝消炎颗粒对人工感染鸡传染性支气管炎病治疗效果明显，可用于鸡传染性支气管炎病的治疗。