一种治疗膝骨性关节炎的药物组合物的制作方法

本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗膝骨性关节炎的药物组合物。

背景技术：

膝骨性关节炎是以关节软骨退行性改变为核心，累及骨质，包括滑膜、关节及关节其他结构的不同程度的反复发作的慢性炎症。炎症细胞因子如白细胞介素-1β(il-1β)、基质金属蛋白酶-2(mmp-2)及肿瘤坏死因子(tnf-α)是参与骨关节炎进程的重要介质。本发明根据这一方向研制出临床上治疗膝骨性关节炎的药物。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗膝骨性关节炎的药物组合物。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗膝骨性关节炎的药物组合物，所述药物组合物具有下式结构：

优选地，r1可以是被c1-c4烷氧基取代的c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、卤素、苯基。

优选地，r2可以是c1-c4烷氧基、oh取代的c1-c6烷基、苯基和-(c0-c4烷基)-5至6元杂环基。

更优选地，r1和r2各自独立地选自苯基。

本发明还提供化合物或其盐在制备治疗膝骨性关节炎的药物中的用途，所述化合物或其盐具有下列结构：

优选地，r1可以是被c1-c4烷氧基取代的c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、卤素、苯基。

优选地，r2可以是c1-c4烷氧基、oh取代的c1-c6烷基、苯基和-(c0-c4烷基)-5至6元杂环基。

更优选地，r1和r2各自独立地选自苯基。

更优选地，化合物或其盐在药物组合物中的含量为20-35％。

本发明药物能够可降低il-1β含量，在关节炎早期可降低mmp-2和tnf-α，并可改善软骨组织形态从而保护关节软骨。

附图说明

图1是股骨髁软骨组织切片染色(he，×100)。

图2是软骨组织切片mankin’s评分。

a.正常组；b.模型组；c.本发明药物组(治疗组)。

具体实施方式

下面通过实施例详细说明本发明药物对膝骨性关节炎的治疗效果。

实验例1本发明药物的表征

¹³cnmr(100mhz、d6-dmso)分析δ(ppm)155.5,155.3,139.1,138.8,129.5,129.2,127.4,127.2,123.2,123.0,85.6,85.2,67.8,67.5,30.7,30.5ppm。

实验例2本发明药物治疗膝骨性关节炎的效果

动物模型的建立及分组

新西兰兔随机选取10只为正常组，其余采用hulth法构建膝骨关节炎模型。术前禁食6h，3％戊巴比妥钠ip(0.9ml/kg)麻醉，选取右侧后肢内侧，先与髌韧带平行，纵行向下，至关节间隙下约0.5cm处弧形向后，再与关节间隙平行，延伸至关节间隙后部，沿关节囊纤维走向切开关节囊，向外侧推离髌骨造成脱位。依次进入兔膝关节，屈曲膝关节，直视下可见膝交叉韧带，用眼科剪剪断前后交叉韧带并切除内侧半月板，避免损伤关节面软骨。行前后抽屉实验证实交叉韧带完全切断，生理盐水清洁关节腔积血、积屑、逐层缝合伤口，无菌包扎固定。术后所有动物每天驱赶上午、下午各强制运动30min。术后4周对兔膝关节显微镜下观察，随机选取造模成功的兔子，分为治疗组、模型组，每组10只。给药后第4、6、8周进行测定。

给药方法：治疗组给予灌胃实施例1药物20mg/kg，正常组和模型组灌胃20ml/kg的生理盐水。

观察指标及方法

股骨髁软骨病理检测

取股骨内侧髁约0.5cm×0.5cm×0.2cm组织块标本，10％甲醛溶液固定，脱钙，石蜡包埋，4μm连续切片。苏木素伊红染色，树胶封片，光镜下观察。he染色按文献(周军，刘晓海，宋亚玲，等.抗骨增生胶囊对大鼠骨性关节炎的实验研究[j].中国实验方剂学杂志，2012，18(19)：145)mankin’s评分标准进行。

检测il-1β(白细胞介素-1β)、mmp-2(基质金属蛋白酶-2)、tnf-α(肿瘤坏死因子)的含量

于药物治疗后第4、6、8周处死动物，通过兔耳缘静脉取血，分离血清，-20℃冻存；膝关节进行关节液的采集，取样部位消毒，切开右膝关节囊，用0.5ml生理盐水冲洗关节腔收集关节液，离心收集上清液-20℃保存，待测。待所有标本收集完成后，用酶联免疫吸附测定法(elisa)检测il-1β、mmp-2、tnf-α的含量，步骤按说明书进行。

统计分析采用spss13.0统计软件处理数据，计量资料以表示，两组均数比较进行多因素方差分析，组间两两比较采用s-n-k检验，p<0.05为差异有统计学意义。

股骨髁软骨病理

正常组关节软骨细胞排列整齐、分布均匀，潮线结构完整，细胞着色均匀。关节炎模型组与治疗组相比，4周组：两组软骨表面均较平整，接近正常，无明显的簇集软骨细胞，潮线完整，软骨细胞排列无明显差异，治疗组软骨细胞分布更均匀，序列更整齐。6周组：模型组关节软骨轻度损伤，软骨表层不平整，无裂痕，有少量簇集的软骨细胞，染色稍有不均。治疗组软骨表层较平整，无明显的簇集软骨细胞。8周组：模型组软骨面轻度糜烂，表面不平整，软骨细胞排列紊乱，簇集的软骨细胞增多，治疗组无明显的簇集软骨细胞，染色较均匀。结果见图1。

mankin’s评分

与正常组比较，模型组术后4、6、8周mankin’s评分显著高于正常组；与模型组比较，术后6周，治疗组mankin’s评分有降低的趋势，至第8周，两组差异非常显著(p<0.001)，提示本发明药物对于骨性关节炎的修复，随着治疗时间的延长，骨性关节炎修复愈佳。见图2。

il-1β、mmp-2、tnf-α含量检测结果见下表

与正常组比较，造模4、6、8周模型组il-1β、tnf-α均显著升高(p<0.01)。与模型组比较，治疗组4、6、8周各时间点il-β显著降低(p<0.05)；tnf-α仅6周时显著降低(p<0.05)。

与正常组比较，造模4，6周模型组关节液中mmp-2显著升高(p<0.01)；与模型组比较在给药第6周时，治疗组能显著降低mmp-2的表达(p<0.01)，在第4周和第8周两组比较无显著性差异。