本发明属于中药技术领域，具体涉及一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
心脑血管疾病是当今世界上对人体威胁最大的疾病之一，其发病率和死亡率已超过癌症跃居世界第一。心脑血管疾病是我国发病率和死亡率最高的疾病，每年患者已高达一亿六千万人，每年大约有260万人死于心脑血管疾病。且发病人群有年轻化(35-55岁)趋势。其具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高,并发症多”，即“四高一多”的特点。
心脑血管疾病最常见的疾病有：冠心病、缺血性中风、出血性中风等。其中，冠心病，是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病。中医认为冠心病的基本病机为“阳微阴弦”，证属本虚标实，而气虚血淤证为最常见证型之一。
近年来，运用中药来治疗冠心病的越来越多。中国专利申请cn102210835b公开了一种治疗冠心病的中药。其是由熟地、山茱萸、肉苁蓉、炮附子、人参、麦冬、桂枝、当归、黄芪、丹参、檀香、川芎、玄参、生地、山楂、银花、砂仁等植物中草药为原料制成。中国专利申请cn103919910b公开了一种治疗冠心病的药物，由丹参、西洋参、醋炙延胡索、熟地、山茱萸、山楂、炮附子、五味子、桂枝、当归、黄芪、甘草、川穹、银花按照一定比例配制而成。上述中药用于治疗冠心病具有较好的成效，但对于出血性中风无治疗作用，且中药具有服用周期长的特性，需要长期服用。一般地讲，中药的副作用比人工合成的西药要小些，但中药多是天然药物，有效成分比较复杂，若要长期服用，则会对肝肾造成较大的负担，甚至不可避免地会对人体的肝肾造成损坏。
此外，目前对于治疗冠心病的中药组合物的制备方法仍旧停留在传统的浸渍法、煎煮法、醇提法等阶段。煎煮法操作温度较高，容易对热敏性有效成分影响较大，且提取液中杂质较多，不利于后续工作的进行。醇提法，操作温度较低，但有效成分提取率较低。近年来出现了一些新的提取方法，如微波、超临界提取剂超声波等，由于强化内部传递过程，可在较低温度下进行提取，但其需要大型的设备，不适用于大面积工业化应用。
因此，有必要提供一种有效治疗冠心病，并可用于治疗或缓解出血性中风疾病症状的药物，此外，还有必要提供一种切实可行的中药制备方法。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法。该药物可用于治疗冠心病及出血性中风病，其疗效确切，毒性小。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物，由以下重量的制备原料制备而成：黄芩5～20克、夏枯草6～30克、槐米3～12克、牛膝3～12克、当归5～20克、地黄6～30克、丹参6～30克、地龙5～20克、钩藤6～24克、决明子5～20克、煅烧珍珠母6～30克、煅烧磁石6～30克、三七5～20克、水蛭2～10克以及大黄1～6克。
进一步地，所述中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：黄芩8～15克、夏枯草10～18克、槐米3～10克、牛膝3～10克、当归5～15克、地黄10～20克、丹参10～20克、地龙5～15克、钩藤10～20克、决明子8～15克、煅烧珍珠母12～25克、煅烧磁石10～20克、三七8～15克、水蛭2～8克以及大黄2～5克。
进一步地，所述中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：黄芩10克、夏枯草15克、槐米6克、牛膝6克、当归10克、地黄15克、丹参15克、地龙10克、钩藤12克、决明子10克、煅烧珍珠母15克、煅烧磁石15克、三七10克、水蛭5克以及大黄3克。
进一步地，所述中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：黄芩8克、夏枯草10克、槐米3克、牛膝3克、当归5克、地黄10克、丹参10克、地龙5克、钩藤10克、决明子8克、煅烧珍珠母12克、煅烧磁石10克、三七8克、水蛭2克以及大黄2克。
进一步地，所述中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：黄芩15克、夏枯草18克、槐米10克、牛膝10克、当归15克、地黄20克、丹参20克、地龙15克、钩藤20克、决明子15克、煅烧珍珠母25克、煅烧磁石20克、三七15克、水蛭8克以及大黄5克。
相应地，本发明还提供了一种制备上述的中药组合物的方法，包括以下步骤：
a)预处理：取黄芩、夏枯草、槐米、牛膝、当归、地黄、丹参、地龙、钩藤、决明子、三七和大黄，洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
b)一次辐照处理：往上述粗粉中加入粗粉3～6倍量的65～85％的乙醇，得混合液，加入0.3～0.5wt％的硫酸亚铁，在室温下用60co-γ射线辐照处理5～10min，得中药粗提取物；其中辐照剂量为0.3～0.8kgy；
c)脉冲电磁场处理：将上述中药粗提取物于常温下暴露于高压脉冲电磁场中处理5～12min，得中药提取物；其中，脉冲电磁场场强控制在10～15kv/cm，频率为10～20hz；
d)二次辐照处理：往上述中药提取物加入核酸，于室温下用60co-γ射线辐照处理30～60min，其中辐照剂量为3～5kgy；
e)将上述辐照处理过后的中药提取物过滤1～2次，合并滤液，将滤液浓缩至30～40℃下测相对密度为1.15～1.25g/ml的浸膏，喷雾干燥后加入粉碎过后的煅烧珍珠母、磁石，得中药组合物。
进一步地，所述步骤b)中所述辐照剂量为0.5kgy；
进一步地，所述步骤d)中所述辐照剂量为5kgy。
本发明另一目的在于提供上述中药组合物或通过上述方法制备得到的中药组合物用于制备预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的用途。
进一步地，所述的用途，所述心脑血管疾病为冠心病或出血性中风病。
本发明另一目的在于提供一种药物，包含上述的中药组合物或通过上述方法制备得到的中药组合物。
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。
进一步地，所述药物的剂型为口服剂。
脉冲电磁场是一项高效、节能的新技术，发明人发现将其与有机溶剂提取结合能够有效的破碎植物细胞壁，促进生物活性物质的溶出，且能使提取时间从原来的3～6h缩短到1～1.5h，并且总黄酮的得率也有明显上升(能使总黄酮的含量提高152.1％)。但也存在一个缺陷，需要控制电磁场场强在较高的幅度(30～45kv/cm)和较高的频率(100～200hz)才能达到效果。为了克服上述缺陷，发明人经过大量的资料调研和试验研究，终于发现，在进行脉冲电磁场处理前先进行辐照处理，以较低幅度的电磁场场强和较低的频率仍然能够达到需要的效果，并且提取时间也进一步缩短至30min内，得率能够提高65.2％。需要特别说明的是，在辐照处理过程中需要加入催化剂硫酸亚铁，如果不加入硫酸亚铁，其会导致总黄酮的得率下降37.1％。上述特殊效果产生的机制尚未清楚，发明人认为，可能是辐照处理，并且在催化剂硫酸亚铁的作用下，使水分子分解成了大量具有较高反应活性的粒子，如e-aq、·oh等，这些活性粒子的存在提高了脉冲电磁场对细胞壁的破坏率，从而即使以较低幅度的电磁场场强和较低的频率仍然能够实现快速提取，且得率有显著提高。
另外值得提出的是，由于本发明配方含药材较多，长期服用，容易对肝脏产生较大的负担。而神奇的是，利用再一次的辐照处理，可以明显降低本发明药物的毒性，通过试验二证明，加入本发明药物共培养后，正常肝细胞的存活率仍然高达98％，而加入不经二次辐照处理得到的中药组合物共培养后，正常肝细胞的存活率下降至60％。上述特殊效果的实现，发明人认为可能是辐照处理能够使中药组合物中的一些毒性物质，如黄曲霉素，降解成无害的小分子。需要说明的，在二次辐照处理过程中需要加入核酸，有利于防止二次辐照对中药组合物中的有效成分的破坏。
内皮素-1(et-1)和一氧化氮是一对反映血管内皮细胞功能的常用指标，两者的比例失衡导致冠脉张力增高，管腔変窄，加重心肌缺血缺氧从，从而促进冠心病心绞痛的病情发展。血管紧张素转换酶(ace)的主要作用是催化血管紧张素ⅰ转化为血管紧张素ⅱ以及灭活缓激肽，ace的活性与冠心病有关。通过试验证明：本发明药物能显著降低冠心病模型小鼠血清内et-1和ace的浓度，升高no的浓度，差异具有显著性。
本发明具有以下优点：
1)本发明提供的中药组合物，对防治冠心病具有确切的作用，可显著降低冠心病模型小鼠血清内et-1和ace的浓度，升高no的浓度，差异具有显著性，
2)本发明提供的中药组合物，对防治或缓解出血性中风具有显著的疗效，可显著改善出血性中风小鼠的症状，降低小鼠大脑出血量。
3)本发明可用于防治冠心病以及出血性中风疾病，且其对肝功能影响小，可长期服用，在治疗或预防心脑血管疾病方面具有良好的应用前景。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
核酸为食品级核酸，购自山东康勤生物科技有限公司，cas号:63231-63-0。
实施例1一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物
本发明所述实施例1由以下重量的制备原料制备而成：黄芩10克、夏枯草15克、槐米6克、牛膝6克、当归10克、地黄15克、丹参15克、地龙10克、钩藤12克、决明子10克、煅烧珍珠母15克、煅烧磁石15克、三七10克、水蛭5克以及大黄3克。
实施例2一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物
本发明所述实施例2由以下重量的制备原料制备而成：黄芩8克、夏枯草10克、槐米3克、牛膝3克、当归5克、地黄10克、丹参10克、地龙5克、钩藤10克、决明子8克、煅烧珍珠母12克、煅烧磁石10克、三七8克、水蛭2克以及大黄2克。
实施例3一种预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物
本发明所述实施例3由以下重量的制备原料制备而成：黄芩15克、夏枯草18克、槐米10克、牛膝10克、当归15克、地黄20克、丹参20克、地龙15克、钩藤20克、决明子15克、煅烧珍珠母25克、煅烧磁石20克、三七15克、水蛭8克以及大黄5克。
实施例4本发明预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
a)预处理：取实施例1所述原料，洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
b)一次辐照处理：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，得混合液，加入0.4wt％的硫酸亚铁，在室温下用60co-γ射线辐照处理8min，得中药粗提取物；其中辐照剂量为0.5kgy；
c)脉冲电磁场处理：将上述中药粗提取物于常温下暴露于高压脉冲电磁场中处理10min，得中药提取物；其中，脉冲电磁场场强控制在12kv/cm，频率为15hz；
d)二次辐照处理：往上述中药提取物加入核酸，于室温下用60co-γ射线辐照处理45min，其中辐照剂量为5kgy；
e)将上述辐照处理过后的中药提取物过滤2次，合并滤液，将滤液浓缩至35℃下测相对密度为1.20g/ml的浸膏，喷雾干燥后加入粉碎过后的煅烧珍珠母、磁石，得中药组合物。
对比例1预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
对比例1与实施例4的区别在于，去掉b)一次辐照处理步骤，其余参数与操作参考实施例4。
对比例2、预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
对比例2与实施例4的区别在于，b)一次辐照处理步骤中，不加入催化剂硫酸亚铁，其余参数与操作参考实施例4。
对比例3、预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
s1、预处理：取实施例1所述原料，分别洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
s2、乙醇提取：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，在室温下回流提取3次，每次3h，合并提取液，过滤，将滤液浓缩至35℃下测相对密度为1.20g/ml的浸膏，喷雾干燥后加入粉碎过后的煅烧珍珠母、磁石，得中药组合物。
对比例4、预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
对比例4与实施例4的区别在于，去掉d)二次辐照处理步骤，其余参数与操作参考实施例4。
对比例5、预防和/或治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备
对比例5与实施例4的区别在于，d)二次辐照处理步骤中不加入核酸，其余参数与操作参考实施例4。
试验例一、不同制备方法对中药组合物中总黄酮含量的影响
1.1材料
本发明实施例4以及对比例1～3制备得到的中药组合物。试验分析用芦丁标准品，购于中国医药集团上海化学试剂公司，所有分析用试剂均为分析纯。
1.2试验方法
1.2.1标准曲线的绘制
准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁(作黄酮标准对照)9.5mg，用60％的乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得到浓度为0.19mg/ml的标准品溶液，作为贮备液备用。准确量取此液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于25ml容量瓶中，分别加5％亚硝酸钠和10％硝酸铝溶液各0.3ml，放置6min。加1mol/ml氢氧化钠溶液4.0ml，分别用30％的乙醇稀释至刻度，混匀，放置16min，并根据标准曲线求出总黄酮浓度-吸光度回归方程，得出总黄酮浓度计算公式。
1.2.2样品中总黄酮含量的测定
1.2.2.1样品液的制备
准确称取实施例4和对比例1～3制备得到的中药组合物样品各5g，用95％乙醇回流提取5h(温度恒定于70℃)，过滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至近干，加10ml蒸馏水溶解后，用20ml正丁醇萃取至水液无黄酮反应为止。减压回收正丁醇至近干，加适量30％乙醇溶解，过滤，移至250ml容量瓶中，再用30％乙醇稀释至刻度，摇匀，此即为样品提取液。精密吸取此溶液5ml，置于25ml容量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，得各待测样品液。
1.2.2.2样品液的测定
准确吸取各待测样品液5ml，其余操作同标准曲线制作的测定方法。测定吸光度后，用公式计算总黄酮的含量，每组重复测定3次，取平均值。
2.结果分析
样品中总黄酮的含量
表1样品中总黄酮含量
结果分析：结果表明，在乙醇回流提取的基础上结合脉冲电磁场，能够使提取物中总黄酮的含量提高152.1％；从对比例1和对比例2的试验结果可以明显看出，在进行脉冲电磁场处理前，增加辐照处理步骤，能够使总黄酮的得率提高65.2％，而如果在辐照过程中不加入催化剂硫酸亚铁，则会导致总黄酮的得率下降37.1％。
试验例二、二次辐照处理对中药组合物毒性的影响
2.1材料
取实施例4以及对比例4制备得到的中药组合物各5g，用10ml蒸馏水溶解，得各样品待测液，人正常肝细胞hl-7702(l02)，购自上海君瑞生物技术有限公司。
2.2方法
将人正常肝细胞hl-7702(l02)以每孔3000～6000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，加入上述各样品待测液，培养48h，每孔加入10μl浓度为5mg/ml的mtt溶液，继续培养4h，然后弃去培养液每孔加入100μl的dmso，于恒速摇床上避光摇晃。待结晶物充分溶解后，在酶标仪上读取od值(波长570nm，参考波长630nm)，读取每孔的吸光值，计算各组细胞存活率。
2.3结果
表2二次辐照处理对中药组合物毒性影响的结果
2.4结果分析
加入经二次辐照处理后制备得到的中药组合物共培养后，肝细胞的存活率仍然高达98％，而去掉二次辐照处理制备得到的中药组合物，其与肝细胞共培养后，细胞存活率有了显著的下降，这说明，二次辐照处理能够有效降低中药组合物的毒性。
试验例三、中药组合物对冠心病小鼠血管内et-1、no、ace的影响
3.1试验动物昆明小鼠50只，雄性，5～8周龄，体质量18～20克，spf级。
3.2试验方法
3.2.1造模第一阶段(气虚血淤证模型)，采用“游泳+饥饿+高脂饮食”的复合方法诱导小鼠气虚血淤证模型。空白对照组给予正常饮食，模型对照组、实施例4组(实施例4制备得到的中药组合物)、对比例5组(对比例5制备得到的中药组合物)以及阳性对照组(中国专利申请cn102210835b所述中药组合物)运动游泳法使小鼠达到力竭状态，给予饥饿喂养，食量为正常小鼠每日摄食量的60％，饲料尾高脂饲料(市售精面50％、基础饲料0％、猪油20％、蔗糖10％、蛋黄7％、胆固醇25％、牛胆盐0.5％，充分混合，烤熟后备用)，造模周期为6周。
3.2.2造模第二阶段(心肌缺血模型)气虚血淤证造模结束后，进行心肌缺血模型的复制。除空白对照组外，各组按20单位/kg剂量腹腔注射垂体后叶素，空白对照组注射等体积蒸馏水，每日注射一次。2周后，从5组内分别随机抓取小鼠，乌拉坦1μg/g麻醉后用心电图记录小鼠的心电图，通过软件记录数据，观察心率和t波高度变化来判断心肌缺血模型是否成功。
3.2.3验证模型造模组小鼠与对照组小鼠对比具有以上特征，即为造模成功：①行为学特征：造模组小鼠表现出倦怠少动，活动无力，毛发枯槁，稀疏脱发等，对照组小鼠则活动自如，毛色洁白光泽，未见其他异样；②血液流变学：造模组小鼠高、中、低切变率的全血粘度均显著高于或低于对照组，造模组的血浆粘度高于对照组；③心肌缺血模型验证：造模组的小鼠心率增快，心电图显示t波低平或倒置。
3.3给药方法造模小鼠每日以药液灌胃，给药剂量按人鼠体表面积折算法计算，本发明是实施例4组、对比例5组和阳性对照组药量均为1.5g/(kg.d)，每日予悬浊液灌胃；模型组和空白对照组小鼠给予蒸馏水灌胃，连续给药4周。
3.4指标检测给药4周后，立即行小鼠眶周静脉取血，血液不经任何处理，予室温放置。低温下3000r/min离心15min，取上层血清检测et-1、no和ace含量，操作严格按照试剂盒说明进行。
3.4统计学分析用spss软件包进行统计分析。
4.结果如表3所示。
表3各组小鼠血管内皮细胞功能相关指标et-1、no和ace浓度比较
注：与空白对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，与模型组相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示：与空白对照组相比，模型组小鼠血清et-1和ace浓度极显著升高，no的浓度极显著降低，具有统计学意义。与模型组相比，本发明实施例4组和阳性对照组均能显著降低冠心病模型小鼠血清内et-1和ace的浓度，升高no的浓度，差异具有显著性。对比例5组与模型组相比，能显著降低冠心病模型小鼠血清内ace的浓度和显著升高no浓度，同时，et-1的浓度也有小幅度的降低，但差异不显著，不具有统计学意义。这可能是因为，核酸的加入能够降低了二次辐照处理对中药有效成分的破坏。
试验四、本发明中药组合物治疗出血性中风急性期的临床研究
4.1临床资料
4.1.1诊断标准：满分为30分，≥10分即可诊断为瘀热阻窍证。
①神情：a、心烦(2分)；b、躁扰不宁(3分)；c、神昏谵语(4分)；②发热类型：a、头面烘热(2分)；b、潮热(3分)；c、烦热(4分)；③面唇：a、面唇深红(3分)；b、面唇暗红(4分)；c、面唇深紫或紫暗红(5分)；④腹症：a、腹胀(1分)；b、腹满(2分)；c、腹痛(3分)；⑤大便：a、便干或难解(1分)；b、便干3日未解(2分)；c、便干3日以上未解(3分)；⑥舌质：a、暗红(3分)；b、瘀点或瘀斑(4分)；c、绛或紫或舌下脉络青紫(5分)；⑦口中感觉：口干(2分)；⑧脉象：弦或滑或涩或结(2分)；⑨舌苔：黄或灰黑(2分)。
4.2纳入标准：
①符合脑出血西医诊断标准；②符合出血性中风急性期瘀热阻窍证诊断标准；③年龄≤90岁；④发病72h以内入院且患者知情同意。
排除标准：①短暂性脑缺血发作、脑梗死、蛛网膜下腔出血及由血液病、肿瘤或外伤等引起的颅内出血；②脑疝或深度昏迷者；③有严重心、肺、肝、肾并发症者。
4.3一般资料
出血性中风患者共100例，其中男73例，女27例，年龄32～88岁，平均年龄55±2岁。
4.4治疗方法
治疗组：本发明实施例4制备得到的中药组合物，加100ml水，口服，每日1次，21天为1疗程；
阳性对照组：中国专利申请cn102210835b所述中药组合物，加100ml水，口服，每日1次，21天为1疗程。
4.5观察指标及方法
①神志、语言、运动功能及神经系统体征等改善情况参照《中风病诊断与疗效评定标准》中的“中风病类诊断评分”评价，于治疗前后各评价1次。中风病类诊断评分主要从患者的神志、语言、运动功能及神经系统体征等方面评定，采用计分法，满分为52分。评分越高，表明病情越重，神经功能损伤越严重。②瘀热阻窍证证候评，于治疗前、治疗后11天及21天各评价1次；③头部ct扫描脑出血量吸收情况，于治疗前、治疗后11天及21天各检查1次。
4.6统计学方法
采用spss进行数据处理。
4.7结果如表4～6所示。
表4两组患者治疗前后中风病类诊断评分比较
注：与治疗前相比，*p＜0.05，**p＜0.01，与阳性对照组同项目相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表5两组患者治疗前后瘀热阻窍证候诊断评分比较
注：与本组治疗前相比，*p＜0.05，**p＜0.01，与本组治疗后11天相比，#p＜0.05，##p＜0.01；与对照组同项目比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
表6两组患者治疗前后脑出血量的比较
注：与本组治疗前相比，*p＜0.05，**p＜0.01，与本组治疗后11天相比，#p＜0.05，##p＜0.01；与对照组同项目比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
结果：
表4显示，采用本发明实施例4制备得到的中药组合物治疗后中风病类诊断评分明显下降，与治疗前比较差异极显著，具有统计学意义(p＜0.01)；且治疗前后差值明显大于阳性对照组(p＜0.01)。
表5显示，采用本发明实施例4制备得到的中药组合物治疗后11天、21天后瘀热阻窍证候诊断评分与治疗前相比差异极显著，具有统计学意义(p＜0.01)，与对照组同组项目相比，差异明显(p＜0.01)。
表6显示，采用本发明实施例4制备得到的中药组合物治疗后11天、21天后脑出血量较治疗前下降明显，具有统计学意义(p＜0.01)；且治疗21天后较治疗11天后，评分亦下降明显(p＜0.01)；与对照组同组项目相比，差异明显(p＜0.01)。
综上所述，本发明提供的中药组合物除了可以用于治疗冠心病外，对出血性中风也具有显著的疗效。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。