本发明涉及中医药加工
技术领域：
，尤其涉及一种优化的九蒸九制熟地黄的炮制工艺方法。
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：地黄为玄参科植物地黄rehmanniaglutinosalibosch.的块根。始载于《神农本草经》，列为上品。历代本草均有记载，为常用中药之一。地黄入药分为：鲜地黄、干地黄、熟地黄、生地黄炭、熟地黄炭等。地黄经过不同的炮制方法加工后，其性味、功效亦发生相应的改变。鲜地黄性寒、味甘苦，以清热生津、凉血止血为主。鲜地黄经加工焙干后名干地黄或生地黄，其性寒、味甘，以清热凉血、养阴生津为主。干地黄经蒸制后名熟地黄，其性由寒转温，其味由苦转甘，其功效由清转补，以滋阴补血，益精填髓为主。临床根据其不同的功效，分别用于不同的病证。地黄的炮制方法及炮制品的质量对临床疗效会直接产生影响。纵观历代本草，地黄的炮制方法有十余种之多，有些方法沿用至今。但是很多炮制方法没有找到最优化的条件，影响到临床准确用药。地黄采用蒸制法加工最早文献记载见于汉代《金匮要略方论》：“咀，蒸之如斗米饭久，以铜器盛其汁，更绞地黄汁”。在南齐《刘涓子鬼遗方》中有：“切，蒸焙”，唐《外台秘要》有：“细切蒸之极熟”的记载。熟地黄一词始见于唐孙思邈《备急千金要方》,其炮制方法为“采地黄，去其须、叶及细根，捣绞汁以渍肥者，著甑中，土若米无在以盖上，蒸之一时出，暴燥，更内汁中，又蒸汁，尽出，便乾之。”孙思邈《千金翼方》曰:“斤数拣择一准生法，浸讫，候好晴日便早蒸之，即暴于日中，夜置汁中以物盖之，明朝又蒸，古法九遍止，今但看汁尽色黑熟，蒸三、五遍亦得”。其炮制过程要求重蒸三、五遍，质量要求色黑。由文中所述“古法九遍止”可知，炮制熟地黄蒸制多次的方法在此之前即有，但尚未见文献记载。宋代对熟地黄的蒸制标准提出了进一步的要求,《证类本草》引图经曰“今干之法：取肥地黄三、二十斤，洗净，更以拣去细根及根节瘦短者，亦得二、三十斤，捣绞取汁，投银铜器中，下肥地黄浸漉会浃，饭上蒸三、四过，时时浸漉转，蒸讫又暴，使汁尽其地黄光黑如漆，味甘如饴糖”。对熟地黄炮制品的质量提出了“光黑如漆，味甘如饴”的质量标准。熟地黄的这种质量标准要求一直沿用至今。历代用酒炮制熟地黄均采用黄酒，并以绍兴产黄酒为佳，认为：熟地黄质厚味浓，滋腻碍胃，酒之后则性转温主补血，且可借酒力行散，起到行药势，通血脉的作用，更有利补血，使地黄补而不腻。生地与熟地药理作用是不同的，生地性寒，功能为凉血清热、滋阴补肾、生津止渴，常用于治疗骨蒸痨热、咽喉燥痛、痰中带血等症。生地制成熟地后，药性由寒变微温，其功能也发生变化，成为补血药。熟地黄炮制的方法文献记载不尽相同，有“蒸三、五遍”、“九蒸九制”等，但是大多根据经验炮制，尚不能找到最优炮制方法，这些对熟地黄炮制品的质量要求虽都能达到“光黑如漆，味甘如饴”的标准，但是药效上缺有所差别，直接影响到熟地黄炮制品的治病疗效。古人通过临床实践发现，只有九蒸九制的熟地，才能充分去其寒性，变为温药，其补肾养血的功效才能体现出来，因此，三、五次蒸制不能够达到药效。在熟地黄的炮制工艺中，常规九蒸九制尽管在外观色泽上达到要求，但由于其工艺复杂，条件繁多，成本高，且炮制工艺过程以临床药工的经验为主，随意性大，最容易出现炮制效果不佳的情况，其有效成分的增加、有毒成分的减少不能够达到最优，因此，并不是一种主流的炮制工艺，但也正是由于这种精细的炮制方法，一旦条件适宜，炮制出的熟地黄药效极为有效。通常对熟地黄炮制品的质量要求是一致的即“光黑如漆，味甘如饴”的标准，而每个人的色觉、味觉存在较大的差异，因此中药饮片加工后的成品，其质量参差不齐。本发明在对九蒸九制的炮制工艺进行优化，找出最优的炮制条件，并且通过更为具体的参数指标对炮制产品进行质量验证，获得最优的炮制工艺。技术实现要素：本发明提供了九蒸九制熟地黄的炮制方法及质量控制标准，为临床该药的炮制加工提供规范依据，通过新炮制方法和工艺条件，有助于提高药物质量，5-羟甲基糠醛（hmf）和甲基丙烯酸羟乙酯(hmfa)的含量最高，进一步提高熟地黄的药效。基于此，本发明提供一种熟地黄的九蒸九制炮制方法，其包括：第一步，拣选；第二步，洗药；第三步，一蒸一制；第四步，二蒸二制；第五步，三蒸三制；第六步，四蒸四制；第七步，五蒸五制；第八步，六蒸六制；第九步，七蒸七制；第十步，八蒸八制；第十一步，九蒸九制；第十二步，灭菌、包装；其中，所述炮制方法中九蒸九制熟地黄的蒸制温度范围为130℃～150℃。其中，所述炮制方法中九蒸九制熟地黄的压力范围为0.2mpa～0.4mpa。其中，所述炮制方法中九蒸九制熟地黄所使用的待炮制的生地黄和黄酒的质量比例为3：1～2：1。其中，所述第三步进一步具体为：第a步，浸酒，将净制后的生地黄置于周转筐内，加黄酒，黄酒量为总黄酒添加量的20%～25%为宜，浸润2～4小时至酒被吸尽，半小时翻动一次；第b步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约8小时停蒸汽闷润一夜，蒸制温度范围为130℃～150℃，蒸至内外呈滋润黑色，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第c步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第d步，拌润，将第一次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次，获得中间品。其中，所述第四步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约6小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第二次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。其中，所述第五步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第三次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第十一步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至六、七成干或摊于制场自然晾制至六、七成干；第c步，干燥，执行《干燥岗位标准操作规程》,《热风循环烘箱标准操作规程》或《敞口式烘箱标准操作规程》，设定温度55～60℃，厚度：25～30mm，时间约36小时，干燥后的水分控制在15.0﹪以内。本发明还提供采用上述方法制备的熟地黄。所述熟地黄中hmf经hplc检测峰面积优选3500000～3700000，hmfa经hplc检测峰面积优选280000～300000。有益的技术效果本发明通过试验获取九蒸九制熟地黄的最优炮制条件，有助于提高药物质量及药效成分，5-羟甲基糠醛（hmf）和甲基丙烯酸羟乙酯(hmfa)的含量最高，进一步提高熟地黄的药效。具体实施方式炮制熟地黄的制备工艺中，温度、压力、黄酒的用量是三个最主要的条件因素，通过本发明大量的正交试验得出，温度是影响炮制熟地黄药效品质的最重要的因素，要获得九蒸九制熟地黄最优温度范围为130℃～150℃，最优的温度为140℃，压力0.2mpa～0.4mpa合适，最优压力为0.3mpa，生地黄和黄酒用量比例3：1～2：1合适，我们选用2：1为最优比例。我们分析这个最优的制备条件，温度若低于130℃，则熟地不容易被蒸透，蒸制的时间会延长，此外微生物控制较差，温度若高于150℃，则熟地容易在蒸制过程中外焦里生，影响有效成分；压力若小于0.2mpa，黄酒不容易蒸制进熟地，压力若大于0.4mpa，对设备要求较高和能源消耗过多，不够经济实惠；若地黄与黄酒的比例大于3：1，则黄酒的量不足，无法完全蒸透地黄，若地黄与黄酒的比例小于2：1，则黄酒的量过多，蒸制的时间过长，黄酒的消耗过多，不够经济实惠，且一蒸一制时，所使用黄酒量较多，才能浸泡透，优选占据整个黄酒用量的20%～25%，便于第一次蒸制获得尽可能多的有效成分，最后一次蒸制所使用的黄酒量也较多，占据整个黄酒用量的20%～25%。黄酒宜选用5年以上的老黄酒，其发散之性减弱，而温补之性增强，故选取陈年黄酒蒸制地黄，使熟地黄的温补药效更强，在本发明中选择绍兴产的5年以上的老黄酒，而如果黄酒选用新出厂的酒品，则无法达到这种功效，熟地黄的温补性能很弱。本发明提供的熟地黄的炮制工艺方法具体包括：第一步，拣选，执行《净选岗位标准操作规程》，从生地黄中拣出杂质，放洁净周转容器中，称量，切片，厚度在25～30mm；第二步，洗药，执行《洗药岗位标准操作规程》及《洗药机标准操作规程》，洗药岗位操作工将熟地黄放入机中，用符合饮用水标准的水洗涤3遍至洁净、无泥沙，装入洁净塑料周转容器；第三步，一蒸一制；第四步，二蒸二制；第五步，三蒸三制；第六步，四蒸四制；第七步，五蒸五制；第八步，六蒸六制；第九步，七蒸七制；第十步，八蒸八制；第十一步，九蒸九制；第十二步，灭菌，凭包装指令包装，执行《包装岗位标准操作规程》，要求称量准确，封口严密，无夹药、漏药现象，每包装贴有合格证，合格证内容清晰完整。所述第三步进一步具体为：第a步，浸酒，将净制后的生地黄置于周转筐内，加黄酒，黄酒量为总黄酒添加量的20%～25%为宜，浸润2～4小时至酒被吸尽，半小时翻动一次；第b步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约8小时停蒸汽闷润一夜，蒸制温度范围为130℃～150℃，蒸至内外呈滋润黑色，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第c步，熟地黄干燥：温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第d步，拌润，将第一次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次，获得中间品。所述第四步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约6小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第二次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第五步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；拌润：将第三次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第六步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第四次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第七步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第五次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第八步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第六次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第九步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第七次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第十步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；第c步，拌润，将第七次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润约2～4小时，半小时翻动一次。所述第十一步进一步具体为：第a步，蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒，黄酒补充量为总黄酒添加量的20%～25%为宜，通入压力为0.2～0.4mpa的蒸汽约4小时，蒸制温度范围为130℃～150℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄拌匀；第b步，熟地黄干燥，温度为55～60℃，干燥约36小时至六、七成干或摊于制场自然晾制至六、七成干；第c步，干燥，执行《干燥岗位标准操作规程》,《热风循环烘箱标准操作规程》或《敞口式烘箱标准操作规程》，设定温度55～60℃，产品熟地黄厚度25～30mm，时间约36小时，干燥后的水分控制在15.0﹪以内。以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。实施例九蒸九制熟地黄炮制药物：生地黄饮片黄酒宜选用5年以上的老黄酒，其发散之性减弱，而温补之性增强，故选取陈年黄酒蒸制地黄，使熟地黄的温补药效更强，在本发明中选择绍兴产的5年以上的老黄酒，而如果黄酒选用新出厂的酒品，则无法达到这种功效，熟地黄的温补性能很弱。拣选600g生地黄，执行《净选岗位标准操作规程》，从生地黄中拣出杂质，放洁净周转容器中，称量，切片，厚度在25～30mm之间。执行《洗药岗位标准操作规程》及《洗药机标准操作规程》，洗药岗位操作工将熟地黄放入机中，用符合饮用水标准的水洗涤3遍至洁净、无泥沙，装入洁净塑料周转容器。一蒸一制：将60kg生地黄浸酒，将净制后的生地黄置于周转筐内，加黄酒，黄酒量为8kg，浸润4小时至酒被吸尽，半小时翻动一次；蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，通入压力为0.4mpa的蒸汽8小时停蒸汽闷润一夜，蒸制温度范围为140℃，蒸至内外呈滋润黑色，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；在温度为60℃条件下，干燥熟地黄约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干，将第一次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次，获得中间品。二蒸二制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将一蒸一制获得的中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽6小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第二次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。三蒸三制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第三次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。四蒸四制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第四次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。五蒸五制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第五次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。六蒸六制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第六次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。七蒸七制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第七次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。八蒸八制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，加黄酒2kg，通入压力为0.3mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥约36小时至八成干或摊于制场自然制至近干；将第七次蒸出液与干燥后的熟地黄拌匀浸润4小时，半小时翻动一次。九蒸九制：蒸制，执行《蒸制岗位标准操作规程》及《蒸煮锅标准操作规程》或《蒸笼标准操作规程》，将中间品投入可倾式蒸煮锅内或均匀置入蒸笼内，补充黄酒8kg，通入压力为0.4mpa的蒸汽4小时，蒸制温度范围为140℃，停蒸汽闷润2小时，倒出里面蒸出的液体和熟地黄拌匀；熟地黄干燥，温度为60℃，干燥36小时至六、七成干或摊于制场自然晾制至六、七成干；熟地黄再次干燥，执行《干燥岗位标准操作规程》,《热风循环烘箱标准操作规程》或《敞口式烘箱标准操作规程》，设定温度60℃，厚度：25～30mm，时间约36小时，干燥后的水分控制在15.0﹪以内。实验一九蒸九制熟地与市售生地黄、三蒸三制熟地有效成分的比较药材：本发明中药炮制方法炮制的九蒸九制熟地实施例1，编号为1。从市场上购置市售生地黄、熟地黄（三蒸三制）以及九蒸九制熟地黄(条件未知)，分别编号为2：生地黄、3：熟地黄、4：九蒸九制熟地黄，购自合肥市某大型药店，每种药材购置3批次，所有药材经安国市中药行专家鉴定，为正品。实验仪器：ｐ3000高效液相色谱仪；welchromc18色谱柱（4.6mm×250mm，5μｍ）；ag204电子分析天平；re～52a旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ｔg16～ｗ微量高速离心机；hh～601超级恒温水浴。实验试剂：5-羟甲基糠醛（hmf）和5-羟甲基糠酸(hmfa)对照品（两种物质为熟地黄的鉴定物质，以标准品绘制标准曲线）为安徽中医药大学基础医学院提供，经hplc测定无杂峰，符合定性要求。样品制备方法：将干燥后的各类地黄分别用打粉机制备成粗粉，粒度能全部通过粒径为24目二号筛，精密称取各药材粉末1.0g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ｍl，称定重量，加热回流提取1.5h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ｍl，旋蒸浓缩至近干，残渣用体积分数15％甲醇溶解，转移至5ｍl量瓶中，定容，摇匀，经0.45μｍ滤膜过滤，备用。色谱条件：welchromc18色谱柱（4.6mm×250mm，5μｍ），流速1.0ｍl／min，检测波长为284nm，柱温35℃，进样量20μl。二元梯度洗脱，流动相ａ为乙腈，ｂ为体积分数0.1％磷酸水溶液（洗脱程序：0~5min，1％ａ；5~10min，1％~4％ａ；10~22min，4％~6％ａ；22~30min，6％~18％ａ；30~60min，18％~25％ａ；60~80min，25％~35％ａ）。精密度：实验对同一样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，连续进样5次，记录保留时间及各峰峰面积。重复性实验：取同一药材5份，按前述制备方法操作，制备样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，记录保留时间及各峰峰面积。稳定性：实验同一样品溶液，室温存放，分别于0、4、8、12、24、48h，按前述色谱条件进行hplc分析，记录保留时间及各峰峰面积。产品熟地黄性状鉴定标准：不规则的厚片或块，表面乌黑色，有光泽，黏性大，质柔软而带韧性，不易折断，断面乌黑色，有光泽，气微，味甜。结果本发明质控标准炮制地黄与市售地黄性状对比本发明质控标准炮制地黄与市售生地黄相比，在性状上均存在较大差异，本发明炮制地黄“色黑如漆、味甘如饴”，质地柔软，同时带有任性，切开后表里颜色一致，为乌黑色。市售生地黄呈深棕色，质地较硬，韧性相对较强，切开后，呈表深里浅。三蒸三制熟地黄颜色深棕色，质地较柔软，韧性较好，切开后表里颜色均较深，为黑色，但是光泽度不均匀。市售九蒸九制熟地黄外表颜色乌黑，光泽度较好，切开后表里颜色较为一致，粘度与本发明炮制熟地比较，相对较差，有待于进一步鉴定与本发明炮制地黄差异。色谱条件的建立及优化284nm是hmf和hmfa的检测波长，它是地黄炮制前后变化最显著的成分之一。因此，本实验参考2015年版《中国药典》生、熟地黄的含量测定色谱条件，并对流动相梯度程序进行优化，以获得尽量多的共有峰信息，最终确定的色谱条件。采用多个波长进行分析，样品间可识别的共有峰增加，能更准确地反映药材间的差异。方法学验证在精密度、重复性和稳定性实验中，测得其共有峰相对保留时间及相对峰面积的rsd均在1.1％和4.7％以内，表明仪器的精密度和方法重复性良好，样品在室温下48h内稳定。表1hmf对照品标准曲线的制备结果序号1234567进样量μg0.05060.15180.30360.60721.21441.82162.4288峰面积35454811549752305415461548392498451391844518564842表2hmfa对照品标准曲线的制备结果序号1234567进样量μg0.01130.03390.10170.15260.20340.30510.4068峰面积35454811549752305415461548392498451391844518564842熟地黄样品测定取熟地黄样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，以hmf和hmfa标准品hplc所绘制的标准曲线为参考。表3不同样品hmf、hmfa吸收峰面积结果样品hmf峰面积/105hmfa峰面积/105生地黄679554*364841*市售熟地黄（三蒸三制）1135484*334541*市售熟地黄（九蒸九制）2648479*304879本发明炮制熟地黄3654814289747与本发明炮制熟地黄比较，*p<0.05。所有数据均以同种样品，三个批次所得数据均值为准。hmf和hmfa生成量的高低直接影响方剂主体作用的发挥。有研究报道，hmf和hmfa虽然药材本身含有，但相对含量较低，其主要积累量均是在地黄炮制过程中大量生成，故地黄炮制方法直接影响两个成分的含量积累，熟地黄中的hmf主要来自于炮制加热过程中单糖的脱水转化，加热时间和温度对其产生量有重要影响，在较短的时间内单糖不断脱水转化，表现为hmf随加热时间的延长而增加。研究发现hmf存在一定的药理活性，如降血糖、改善学习记忆、抗心肌缺血等作用，熟地黄功效的药理活性成分。而hmfa是由hmf氧化而来，控制hmf氧化程度，对于保留有效成分具有十分重要的作用。因此，相对较高的hmf的产生和相对较低的hmfa的产生，是熟地黄较为中药的质量控制要求。综上所述，研究表明，市场上熟地黄商品的hmf及hmfa的含量不能达到熟地黄的品质标准。本实验在利用hplc方法对本发明炮制熟地黄所含hmf和hmfa进行定量分析的基础上，阐明了其在不同炮制过程中的量变规律，揭示出地黄炮制的现实科学意义。通过前述实验可以看出，虽然同为九蒸九制，但是获得的熟地黄的hmf和hmfa含量并不相同，因此，要达到最优的熟地黄品质，有必要对九蒸九制的制备条件进行摸索，本申请经过大量的正交实验，发现温度是影响炮制的熟地黄hmf、hmfa量的最重要的因素，为获得最优的炮制条件，下面进行最优条件的实验验证。实验二九蒸九制熟地不同制备条件有效成分的比较药材：本发明中药炮制方法炮制的九蒸九制熟地，以温度为入手研究的主要因素，以整个炮制过程温度为100℃炮制的九蒸九制熟地、整个炮制过程温度为140℃炮制的九蒸九制熟地、整个炮制过程温度为180℃炮制的九蒸九制熟地为研究材料，分别编号为1、2、3。实验仪器：ｐ3000高效液相色谱仪；welchromc18色谱柱（4.6mm×250mm，5μｍ）；ag204电子分析天平；re～52a旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ｔg16～ｗ微量高速离心机；hh～601超级恒温水浴。实验试剂：5-羟甲基糠醛（hmf）和5-羟甲基糠酸(hmfa)对照品（两种物质为熟地黄的鉴定物质，以标准品绘制标准曲线）为安徽中医药大学基础医学院提供，经hplc测定无杂峰，符合定性要求。样品制备方法：将干燥后的各类地黄分别用打粉机制备成粗粉，粒度能全部通过粒径24目的二号筛，精密称取各药材粉末1.0g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ｍl，称定重量，加热回流提取1.5h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ｍl，旋蒸浓缩至近干，残渣用体积分数15％甲醇溶解，转移至5ｍl量瓶中，定容，摇匀，经0.45μｍ滤膜过滤，备用。色谱条件：welchromc18色谱柱（4.6mm×250mm，5μｍ），流速1.0ｍl／min，检测波长为284nm，柱温35℃，进样量20μl。二元梯度洗脱，流动相ａ为乙腈，ｂ为体积分数0.1％磷酸水溶液（洗脱程序：0~5min，1％ａ；5~10min，1％~4％ａ；10~22min，4％~6％ａ；22~30min，6％~18％ａ；30~60min，18％~25％ａ；60~80min，25％~35％ａ）。精密度：实验对同一样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，连续进样5次，记录保留时间及各峰峰面积。重复性实验：取同一药材5份，按前述制备方法操作，制备样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，记录保留时间及各峰峰面积。稳定性：实验同一样品溶液，室温存放，分别于0、4、8、12、24、48h，按前述色谱条件进行hplc分析，记录保留时间及各峰峰面积。结果三组制备工艺所得熟地黄性状对比1、2组熟地满足“色黑如漆、味甘如饴”，质地柔软，同时带有任性，切开后表里颜色一致，为乌黑色，而3组熟地尽管外观上也较符合标准，但是有焦糊气味，可能部分贴壁熟地因加热温度过高，出现炮制过度的情况，其效果如何，有待于进一步鉴定。色谱条件的建立及优化284nm是hmf的检测波长，它是地黄炮制前后变化最显著的成分之一。因此，本实验参考2015年版《中国药典》生、熟地黄的含量测定色谱条件，并对流动相梯度程序进行优化，以获得尽量多的共有峰信息，最终确定的色谱条件。采用多个波长进行分析，样品间可识别的共有峰增加，能更准确地反映药材间的差异。方法学验证在精密度、重复性和稳定性实验中，测得其共有峰相对保留时间及相对峰面积的rsd均在1.1％和4.7％以内，表明仪器的精密度和方法重复性良好，样品在室温下48h内稳定。熟地黄样品测定取熟地黄样品溶液，按前述色谱条件进行hplc分析，以hmf和hmfa标准品hplc所绘制的标准曲线为参考，hmf和hmfa的标准曲线见表1和表2。表4不同样品hmf、hmfa吸收峰面积结果样品hmf峰面积/105hmfa峰面积/105①100℃3015148*332448*②140℃（最优）3648461290154③180℃1578116*395487*与140℃炮制熟地黄比较，*p<0.05所有数据均以同种样品，三个批次所得数据均值为准。表5两次最优工艺熟地样品hmf、hmfa吸收峰面积结果样品hmf峰面积/105hmfa峰面积/105实验一熟地黄3654814289747实验二熟地黄3648461290154所有数据均以同种样品，三个批次所得数据均值为准。通过上述数据得出，两次最优制备工艺所制备的熟地黄含量稳定，具有可重复性，说明实验条件客观，可以作为重复性试验结果。通过实验二数据可以得出，若炮制温度不够，其有效成分含量生成不足；若炮制温度过高，其有效成分迅速下降，可能有效成分被高温迅速破坏，若出现焦糊，整批次药物都要销毁，否则不仅无药效，甚至有有害成分产生。综上所述，本发明的提出，对于建立熟地黄的最佳炮制方法具有十分重要的意义。具体量化，建立标准操作规程（sop）以确保熟地黄的优良品质，为其主体药效的发挥奠定好基础。提高地黄的产量和质量，更好地合理利用地黄资源，使它能发挥更大的疗效，大大地提高企业经济效益。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。当前第1页12