治疗乳腺疾病的中成药及其制备方法与流程

本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗乳腺疾病的中成药及其制备方法。

背景技术：

乳腺病是一种常见病，多发病，是危害妇女身心健康的主要疾病，分为乳腺炎、乳腺增生、乳腺纤维病、乳腺囊肿、乳腺癌五大类。都市女性中，乳腺疾病成为了头号大敌。如治疗不及时和治疗不当，就可能发生病变，突变随时导致生命危险。据统计，70％到90％的女性有乳腺增生问题，发病率极高。大约有1/4～1/3妇女一生中曾患乳腺疾病。城市妇女的发病率较农村高，可能与文化知识及对疾病的重视程度乃至耐受程度有关。30～50岁最高峰，青春期及绝经后则少见。对于乳腺增生、乳腺纤维瘤、乳腺囊肿，一些患者多采用手术摘除的办法，但是手术痛苦较大，易导致女性激素分泌的失调，从而过早出现衰老，给患者带来痛苦和遗憾。乳腺增生危害之一的癌变难以回避：乳腺增生病恶变的危险性较正常妇女增加2～4倍，临床症状和体征有时与乳癌相混。由于乳腺增生病重的人群有发展成为乳腺癌的可能性，这也是多数人认为乳腺增生最大的危害。乳腺增生危害之二精神影响：乳腺增生患者，常常会有明显的情绪改变，此外生活规律也会被迫颠倒错乱，身体免疫机能会因劳累而每况愈下，乳房局部会因情绪变化而痛得心烦。乳腺增生危害之三的生理方面：乳腺增生不同症型及其临床表现是：(1)肝郁气滞性：精神抑郁，心烦易怒；(2)冲任不调型：日久失治者，少数可发生癌变。乳腺增生病西医认为系内分泌障碍性增生病，一是由于体内女性激素代谢障碍，体内雌激素水平增高或活性增强，孕激素水平降低，雌、孕激素比例失调，使乳腺实质增生过度和复旧不全；二是由于部分乳腺实质成分中女性激素受体的质和量异常，使乳房各部分的增生程度参差不齐。

目前国内外对于乳腺增生病的治疗尚无确切有效的药物。国外一直采用针对雌激素增高选用抑制雌激素类药物的治疗方法，所用药物有三苯氧胺、甲状腺激素类制剂、溴隐亭、丹那唑、酶类、维生素类、小剂量碘剂以及性激素治疗等。应用这些方法治疗本病，止痛、消块作用好，但因其副作用大，尤其是性激素，应用后可能会进一步干扰人体的激素间的平衡，并增加癌变的可能。故尽量少用或不用，仅在症状严重时，才考虑应用。对重度增生有恶变倾向者，则采取手术疗法，但术后复发率较高。国内临床上对于该病的治疗主要以中药为主，包括加味逍遥丸、逍遥散、小金丸、乳癖消、乳块消等。所有中药都是止痛，缓解症状，且停药后肿块与症状复发的现象；综上所述，现在临床上急需治疗乳腺增生的有效药物。专利“2011103546377，治疗乳腺疾病的中药及其制备方法”是一种治疗乳腺疾病的中药，本发明在此基础上进一步改进中药的配方及其制备方法，优化药物疗效，用于治疗乳腺增生、乳腺纤维瘤、乳腺囊肿等乳腺疾病。

技术实现要素：

本发明目的是解决现有治疗乳腺疾病中没有一种见效快，效果好，方便使用的中成药问题，而提供一种采用口服方式、使用方便、见效快的治疗乳腺疾病的中成药及其制备方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡1～7份、皂角刺1～6份、王不留行1～6份、夏枯草1～8份、赤芍1～7份、郁金1～6份、牡蛎1～4份、丹参1～5份、橘核1～5份、三棱1～5份、莪术0.3～2份、甘草0.3～2份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡2～6份、皂角刺2～5份、王不留行2～5份、夏枯草2～7份、赤芍2～6份、郁金2～5份、牡蛎2～3份、丹参2～4份、橘核2～4份、三棱2～4份、莪术0.5～2份、甘草0.5～2份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡1份、皂角刺3份、王不留行3份、夏枯草1份、赤芍2份、郁金3份、牡蛎2份、丹参2份、橘核3份、三棱2份、莪术0.5份、甘草0.5份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡3份、皂角刺4份、王不留行5份、夏枯草5份、赤芍4份、郁金6份、牡蛎3份、丹参4份、橘核3份、三棱3份、莪术1份、甘草1份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡4份、皂角刺5份、王不留行6份、夏枯草6份、赤芍5份、郁金5份、牡蛎4份、丹参5份、橘核4份、三棱4份、莪术2份、甘草1份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡6份、皂角刺6份、王不留行6份、夏枯草4份、赤芍6份、郁金6份、牡蛎4份、丹参4份、橘核4份、三棱4份、莪术2份、甘草2份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡2份、皂角刺3份、王不留行4份、夏枯草2份、赤芍3份、郁金4份、牡蛎2份、丹参3份、橘核2份、三棱5份、莪术0.5份、甘草2份。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，包括如下步骤：

步骤1、按照重量份数称取一定重量的柴胡、郁金、丹参、莪术、三棱，将称量好的药材粉碎后过80目筛备用；

步骤2、将步骤1中粉碎后的药材细粉经微波灭菌后备用；

步骤3、按照重量份数称取一定重量的皂角刺、赤芍、王不留行、牡蛎、橘核、夏枯草、甘草，将称量好的药材加入8倍的水，浸泡0.5～2h后，煎煮2～3h，煎煮后的药液滤出保留，滤渣加入6倍的水进行第二次煎煮，煎煮1～2h，煎煮后滤出的药液与第一次滤出的药液合并后，待用；

步骤4、将步骤3制备的药液浓缩至相对密度为1.03～1.10，备用；

步骤5、将步骤4制备的药液置于离心分离器中离心，离心转速2500r/min，离心时间20min，离心后取上清液浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏备用；

步骤6、将步骤2制备的药材细粉混匀后，加入步骤5制备的清膏，混匀，在60℃下减压干燥，整粒；

步骤7、将步骤6制得的颗粒及粉末进行检验、检验合格后进行胶囊填充、铝塑后得到治疗乳腺疾病的中成药。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，步骤1中的中药置于中药超微粉碎机中粉碎10～30min，粉碎机功率1.8kw，粉碎机转速22000rad/min，粉碎量1～4kg/h。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，步骤2中微波灭菌的微波功率300～1000mhz，微波时间100～180s，微波转速10r/min。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，本发明方法制备的所述的治疗乳腺疾病的中成药中柴胡皂苷a的含量为1.02mg/g，柴胡皂苷d的含量为4.81mg/g；而水蒸馏法提取中柴胡皂苷a的含量0.62mg/g，柴胡皂苷d的含量为0mg/g；水煎煮提取方法中柴胡皂苷a的含量0.41mg/g，柴胡皂苷d的含量为0mg/g。本发明方法制备的所述的治疗乳腺疾病的中成药丹参酮ⅱa含量2.82mg/g，粉碎损耗7.6％；而乙醇回流提取的方法丹参酮ⅱa含量0.72mg/g，损耗76.4％。所以本发明有益效果之一是制备方法的药材成分提取方法优于常规方法，常规提取柴胡均为水蒸馏提取挥发油或直接水煎煮，但无论是何种常规方式提取，只要用水加热，则柴胡中的功效成分—柴胡皂苷a含量下降明显，且柴胡皂苷d全部降解。丹参采用乙醇回流提取丹参酮ⅱa含量也发生降解。而本发明将柴胡、郁金、丹参、莪术和三棱直接粉碎入药，最大程度的保留了功效成分。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，有益效果之二是将柴胡、郁金、丹参、莪术、三棱五味药材的细粉，用微波进行灭菌。丹参药材中丹参酮ⅱa受热易分解破坏，因此丹参药材的灭菌问题，一直没有好的方法进行。本发明首创采用微波的方式对丹参药材的细粉进行灭菌，具有时间短、耗能低、灭菌效率高等特点，最大程度的保留了丹参的功效成分。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，有益效果之三是制备方法的工艺采用高速离心：在工艺上采用高速离心法来纯化药液，既能将细微的药渣、悬浮物、淀粉等无效成份去除，还能将有效成分进行最大限度的保留。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，有益效果之四是在专利号为201110354637.7，专利名称为“治疗乳腺疾病的中药及其制备方法”的原有处方的基础上，经过筛选优化去除红花，增加了郁金、丹参、牡蛎、三棱、橘核和甘草六味药材。组成治疗乳腺疾病的最佳处方。郁金为臣药，辛苦性寒，善行气解郁，活血止痛。《本草备要》云其“行气，解郁；泄血，破瘀”。其行气解郁以助柴胡，活血化瘀又助皂角刺，一物二用，恰适病机。丹参为佐药，苦而微寒，归心、肝经，活血祛瘀，消痈止痛，《日华子本草》载其能“破宿血，补新生血”。牡蛎为佐药，咸而微寒，长于软坚散结，《汤液本草》云其“咸为软坚之剂，以柴胡引之，故能去胁下之硬”。三棱为佐药，与莪术相须为用，功可破血行气，消积止痛，《医学衷中参西录》谓之：“虽坚如铁石，亦能徐徐消散”。甘草调和药性，为使药之用。以上新增六味，优于红花的活血止痛的作用，同时即助君药柴胡行气解郁，又增强了软坚散结、消积止痛的作用。经处方优化后的本发明处方增强了功能，提升了主治效果。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，方剂是依疏肝理气，活血止痛，化痰散结之法而立。方中以柴胡、皂角刺共为君药。柴胡辛苦微寒，功善疏肝理气，使肝气得以条达。《滇南本草》谓其能“行肝经逆结之气”。肝调畅气机，主藏血，柴胡可“宣畅气血”(《药性论》)，尤善治疗肝郁气滞引起的乳房结癖，为治肝郁气滞证之要药。皂角刺辛温，功可活血消肿，托毒排脓。《本草纲目》言其“治痈肿，妨乳”，能消散瘀结乳络之癖，治乳汁瘀滞，不泄结毒之病。皂角刺与柴胡配伍，一者性温，一者微寒，合而无寒热偏盛之弊。柴胡既疏肝行气，又助皂角刺活血之功，即所谓气行则血行，两药相伍，行气活血之力倍增。为增方中活血散结之力，臣以赤芍、郁金、王不留行。赤芍苦而微寒，归肝经，散瘀止痛，《本经》即谓之能“除血痹，破坚积”。《本草经疏》详析此功：“其主除血痹，破坚积者，血瘀则发寒热，行血则寒热自止，血痹疝瘕自消。”郁金辛苦性寒，善行气解郁，活血止痛。《本草备要》云其“行气，解郁；泄血，破瘀”。其行气解郁以助柴胡，活血化瘀又助皂角刺，一物二用，恰适病机。王不留行“性走而不住，虽有王命不能留其行”(《本草纲目》)。本品功善活血通经，下乳消肿。对乳汁不下，日久结癖之证，实属标本兼顾。其于活血行瘀之中，又可消肿敛疮。《名医别录》用其治“痈疽恶疮，瘘乳”，对乳痈结癖，可使“血已顺流，自然轻则解散，重则分消矣。”(《本经疏证》)。气机阻滞，血行不畅，易致痰结癖块，故方中佐以橘核、牡蛎、夏枯草。橘核苦平，归肝经，功能理气散结止痛，为治乳癖结块之要药。《本草备要》云其能“行肝气，消肿”，与行气、活血之品相伍，消散痰瘀结聚。牡蛎、夏枯草皆俱散结之力。牡蛎咸而微寒，长于软坚散结，《汤液本草》云其“咸为软坚之剂，以柴胡引之，故能去胁下之硬”；夏枯草辛苦而寒，长于清肝泻火，散结消肿，《滇南本草》云其“祛肝风，行经络”，“行肝气，开郁结”，“散瘰疬、周身结核”。为增方中活血散瘀之力，又佐以丹参、三棱、莪术。丹参苦而微寒，归心、肝经，活血祛瘀，消痈止痛，《日华子本草》载其能“破宿血，补新生血”；三棱、莪术相须为用，功可破血行气，消积止痛，《医学衷中参西录》谓之：“虽坚如铁石，亦能徐徐消散”。甘草调和药性，为使药之用。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药，气血并治，痰瘀兼顾，共奏疏肝理气，活血止痛，化痰散结之功。如此，于乳癖结块之证，可以渐消缓散，而收全功。依据临床效果实验说明：本发明与现有技术相比具有以下优点：成本低廉、使用方便、见效快，效果显著，可达到根治不复发。对乳癖结块，乳痛；乳腺增生病及乳腺炎疾病有很好的疗效。本发明总有效率为93.9％，相比于原发明“治疗乳腺疾病的中药及其制备方法”的总有效率为91.3％有所提高。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，长期毒性实验说明：本发明连续用药90天，用药后检测血液学，血液生化学指标未发现异常改变，重要组织脏器病理形态学检查亦未发现病理性改变。动物试验结果分析，该药毒性低微，临床用药安全。

本发明所述的治疗乳腺疾病的中成药制备方法，临床试验证明：本发明对不同类型的乳腺增生疾病均有明显的治疗作用。本发明对于乳痛症型146例患者的治疗总有效率为95.9％；对小叶增生型538例患者的治疗总有效率为95.2％；对于囊肿病型221例患者的治疗总有效率为95.9％。对于纤维腺病型302例患者的治疗总有效率为94.4％；对于纤维化型158例患者的治疗总有效率为84.2％。终上所述，本发明对于以上各类型的乳腺增生疾病1365例患者的治疗总有效率为93.9％。较原发明的乳康胶囊对各类型的乳腺增生疾病115例患者的治疗总有效率为91.3％有所提高。试验验证所述的治疗乳腺疾病的中成药用药起效时间最短3天，最长14天，除对最常见的小叶增生有效外，对病程长、纤维腺病型疗效也好，远期观察复发少，对伴结节、囊性易癌变的患者亦有较好的治疗和预防作用，且祛痛效果快且显著。

附图说明

图1为具体实施方式二中空白对照组的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图2为具体实施方式二中模型组的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图3为具体实施方式二中乳疾灵的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图4为具体实施方式二中乳块消的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图5为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图6为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药中剂量的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图7为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药高剂量的大鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图8为具体实施方式二中空白对照组的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图9为具体实施方式二中模型组的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图10为具体实施方式二中乳疾灵的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图11为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图12为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片；

图13为具体实施方式二中所述的治疗乳腺疾病的中成药中剂量的小鼠乳腺增生疾病细胞病理图片。

具体实施方式

具体实施方式一：

一种治疗乳腺疾病的中成药，由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡1份、皂角刺3份、王不留行3份、夏枯草1份、赤芍2份、郁金3份、牡蛎2份、丹参2份、橘核3份、三棱2份、莪术0.5份、甘草0.5份。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、按照重量份数称取一定重量的柴胡、郁金、丹参、莪术、三棱，将称量好的药材粉碎后过80目筛备用；

步骤2、将步骤1中粉碎后的药材细粉经微波灭菌后备用；

步骤3、按照重量份数称取一定重量的皂角刺、赤芍、王不留行、牡蛎、橘核、夏枯草、甘草，将称量好的药材加入8倍的水，浸泡0.5～2h后，煎煮2～3h，煎煮后的药液滤出保留，滤渣加入6倍的水进行第二次煎煮，煎煮1～2h，煎煮后滤出的药液与第一次滤出的药液合并后，待用；

步骤4、将步骤3制备的药液浓缩至相对密度为1.03～1.10，备用；

步骤5、将步骤4制备的药液置于离心分离器中离心，离心转速2500r/min，离心时间20min，离心后取上清液浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏备用；

步骤6、将步骤2制备的药材细粉混匀后，加入步骤5制备的清膏，混匀，在60℃下减压干燥，整粒；

步骤7、将步骤6制得的颗粒及粉末进行检验、检验合格后进行胶囊填充、铝塑后得到治疗乳腺疾病的中成药。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的制备方法，步骤1中的中药置于中药粉碎机中粉碎20min，粉碎机功率1.8kw，粉碎机转速22000rad/min，粉碎量4kg/h。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的制备方法，步骤2中微波灭菌的微波功率300mhz，微波时间180s，微波转速10r/min。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的制备方法，柴胡不同提取方法对应的柴胡皂苷含量数据如表1所示，丹参不同提取方法制得的丹参酮ⅱa含量如表2所示。

表1柴胡不同提取方法对应的柴胡皂苷含量数据表

表2丹参不同提取方法对应的丹参酮ⅱa含量数据表

乙醇回流法提取丹参酮ⅱa转移率为23.6％,损耗76.4％，本实施方式中丹参80目细粉的损耗是7.6％，丹参酮ⅱa2.82mg/g。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的制备方法，制备方法的药材灭菌方法对于微波灭菌的条件通过实验进行了筛选，并与高温灭菌进行对比分析，以丹参药材中丹参酮ⅱa含量和微生物限度为考察指标进行考察。

使用微波灭菌设备进行灭菌，分别使用10转/分、20转/分和30转/分三种转速，药粉为0.5cm和1.0cm两种厚度分别进行考察。

分别取上述五种过筛后的药材细粉放入自封袋中，使其厚度为1.0cm及0.5cm各三组。开启机器，设置转速10转/分开启微波，取厚度为1.0cm、0.5cm的药粉各一组依次放在传送带上，通过后将转速设置为20转/分，取厚度1.0cm、0.5cm的药粉各一组依次放在传送带上，通过后将转速设置为30转/分，取剩下的厚度为1.0cm、0.5cm的药粉依次放在传送带上，通过后关闭机器。测定不同条件微波灭菌后药粉的含量以及微生物限度,结果如表3所示,与高温灭菌进行对比分析，以丹参药材中丹参酮ⅱa含量和微生物限度为考察指标进行考察如表4所示。

表3微波灭菌前后药粉含量及微生物限度

表4高温灭菌与微波灭菌检测结果表

由表3和表4可知，五种生药粉经过微波灭菌后只有10转/分条件下微生物限度均符合规定而莪术药材的含量及丹参酮ⅱa的含量均无明显变化，采用微波灭菌10转/分；1.0cm厚方法对生药粉进行灭菌。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药的1365例临床医疗效果如下：

一般资料：1365例中年龄25-60岁，中位34.6岁，其中女性1321例，男性44例，病程最短数日，最长10余年，已婚者占84.2％。入院主诉均有不同程度的乳房胀痛、乳房肿块、乳头溢液，部分病人有情绪烦躁、忧丝厌食、月经紊乱、睡眠不安等症状，女性患者与月经有关的病例占65.4％，与月经无关的病例占34.6％。体征上除单纯乳痛症外，多可触及局限或散在增粗腺体，呈颗粒状或条索状。男性患者则在乳头乳晕下触及扁平状腺块。初治患者为37.6％，既往曾用其他药物及方法治疗效果不佳者占62.4％。

诊断方法：所有病例均经临床手扪，继续红外扫描，钼靶x线摄片，细胞学或冰冻切检等联合方法明确诊断，排外乳腺恶性病变。

治疗方法：所述的治疗乳腺疾病的中成药每次服用3-4粒，每日3次，40天为一疗程，间歇或不间歇继服第二三疗程，经期停服。

治疗的标准：

结合临床症状，体征和乳腺红外扫描综合判定疗效；对患者治疗前后作触诊和红外线扫描，对照患者治疗前后的触诊和红外线扫描结果进行诊断，判定所述的治疗乳腺疾病的中成药的药效学作用；通过对患者性激素等水平治疗前后的测定来了解所述的治疗乳腺疾病的中成药对人体内分泌系统功能的调节作用，进一步探讨所述的治疗乳腺疾病的中成药的用药机制，同时观察药物的剂量和毒副作用。

判断标准：经治疗后满2个疗程以上者，分以下4个方面判定疗效。

①痊愈乳痛、溢液、增粗腺体或肿块消失；

②显效乳痛、溢液明显减轻，增粗腺体或肿块缩小1/2以上；

③有效乳痛、溢液有所减轻，增粗腺体或肿块缩小不到1/2；

④无效乳痛、溢液无明显改善，增粗腺体或肿块不缩小，甚至恶变者；

结果分析：对临床经诊断明确为乳腺增生病的1365例患者进行治疗，其中乳痛症型146例，小叶增生型538例，囊肿病型221例，纤维腺病型302例，纤维化型158例。所述的治疗乳腺疾病的中成药用药起效时间最短3天，最长14天，除对最常见的小叶增生有效外，对病程长、纤维腺病型疗效也好，男性肿块消失快，远期观察复发少，对伴结节、囊性易癌变的有较好的治疗和预防作用，且祛痛快、效果显著，具体疗效总结见表5：

表51365例乳腺增生病疗效

观察本组病例，均无明显毒副反应，仅出现二例服药后胃部不适，经停药对症处理好转。分析本品成分中除疏肝理气的药物外，尚有攻坚散结之类药物，此亦正是对纤维化型，瘤样结节病变有效的主因，临床使用中对严重胃炎、溃疡性病患应慎用。

临床总结：所述的治疗乳腺疾病的中成药具有疏肝理气，化瘀散结。在临床上用于乳癖结块，乳痛；乳腺增生病及乳腺炎。

结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药优于原发明的技术，更适于乳腺增生病早期及轻中症状患者。

安全性：试验过程中无不良事件发生。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药可以显著提高乳腺增生病及乳腺炎患者的临床疗效，与原发明产品试验数据及同类药品文献数据相比疗效有所提高，口服安全值得在临床上推广使用。

具体实施方式二：

本实施方式与具体实施方式一不同的是：本实施方式由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡3份、皂角刺4份、王不留行5份、夏枯草5份、赤芍4份、郁金6份、牡蛎3份、丹参4份、橘核3份、三棱3份、莪术1份、甘草1份。

本实施方式下进行药效学实验：从肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮复制大鼠乳腺增生的疾病模型和腹腔注射苯甲酸雌二醇复制小鼠乳腺增生的疾病模型，两方面进行主要药效学试验，来证明所述的治疗乳腺疾病的中成药具有抑制乳腺增生的作用。并从所述的治疗乳腺疾病的中成药抗炎作用和镇痛作用两方面进行试验研究。

(一)大鼠乳腺增生的疾病模型的药效试验

肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮复制大鼠乳腺增生的疾病模型，连续口服给药所述的治疗乳腺疾病的中成药，观察所述的治疗乳腺疾病的中成药对乳腺增生大鼠血清中性激素含量、乳腺组织体积的影响，并对乳腺组织进行病理组织学检查。试验结果：所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组与模型组相比，乳腺体积均减小，结果均有显著差异(p＜0.05)。与阳性药物比较，结果未见显著差异；所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中剂量组与模型组相比，血清中雌二醇含量降低，结果有显著性差异(p＜0.05)。与阳性药物比较，结果未见显著差异。所述的治疗乳腺疾病的中成药高、低剂量组与模型组相比，孕酮的含量增高，结果有显著差异(p＜0.05)。所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组与阳性药物乳疾灵相比，孕酮含量增高，结果有显著差异(p＜0.05)；所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组与乳疾灵组相比，睾酮含量增高，结果有显著差异(p＜0.05)；病理组织学检查表明所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中剂量组能够减小乳腺小叶体积和腺管扩张程度。结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药具有抑制乳腺增生的作用。

1、试验目的：观察所述的治疗乳腺疾病的中成药抗大鼠药物诱导乳腺增生作用，为评价所述的治疗乳腺疾病的中成药抗乳腺增生作用提供初步证据。

2、受试药物：

受试样品：所述的治疗乳腺疾病的中成药；

阳性对照：乳疾灵(090805)，乳块消(20090612)。

3、实验方法：

(1)将大鼠按体重分为实验组(100只)和空白组(20只)，实验组肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg，1次/d，连续25d。继而改用肌注黄体酮5mg/kg，1次/d，连续5d。空白组肌注等体积生理盐水，连续注射30d。

(2)注射30d，抽取实验组(5只)和空白组(5只)大鼠，取第三对和第四乳房，经乳头基底部最大切面取下该对完整的乳腺，测量乳腺组织体积。实验组与模型组相比乳腺组织体积有明显差异，且实验组乳腺组织明显红肿，证明造模成功。

(3)将造模成功的大鼠按体重分组6组(n＝12只)。分为所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中、低三组(0.4、0.2、0.1g/kg)、乳块消组(0.2g/kg)、乳疾灵组(0.3g/kg)和模型组。所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中、低剂量组和乳疾灵、乳块消阳性药物组灌胃给予药物1次/日，模型组、空白组灌胃给予等体积生理盐水10ml/kg，持续28d。(乳块消、乳疾灵给药剂量按临床用量折算。)

(4)末次给药后1小时，3％苯巴比妥腹腔麻醉(1.5ml/kg)，腹主动脉取血4-5ml，静置分离血清。取第三对和第四对乳房，经乳头基底部最大切面取下该对完整的乳腺。

4、评价指标：

测定血清雌二醇(e2)、孕酮(p)、泌乳素(prl)、黄体生成素(lh)、卵泡刺激素(fsh)和睾酮(t)水平；测量乳腺组织的最大直径、最小直径和厚度，按照最大直径×最小直径×厚度计算出乳腺体积；乳腺用10％的甲醛固定,常规石蜡包埋、切片,he染色，在光镜下观察小叶腺泡、导管上皮增生情况。

5、试验结果：

(1)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠血清中性激素含量的影响

模型组、乳疾灵组、乳块消组和所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组与空白组相比，雌二醇的含量增高，均有显著差异(p＜0.05)。

乳疾灵、所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中剂量组与模型组相比，血清中雌二醇含量降低，结果有显著性差异(p＜0.05)。

所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组与空白组相比，孕酮的含量增高，有显著差异(p＜0.05)。

所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组与乳疾灵组相比，睾酮含量增高，有显著差异(p＜0.05)。

卵泡生成素、黄体生成素、泌乳素，各组未见显著性差异。

(2)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠乳腺体积的影响

模型组与空白组相比，体积增大，有显著性差异(p＜0.05)。乳疾灵组、乳块消组、所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组与模型组相比，乳腺体积减小，均有显著差异(p＜0.05)。

(3)病理组织学检查结果如附图1至附图7所示。

附图1是空白组：乳腺小叶形态规则，腺管排列整齐，未见扩张，腺管上皮细胞无增生。乳腺导管无扩张。

附图2是模型组：乳腺小叶增生，数目增多，体积增大，形态不规则。乳腺腺泡增大，腺管扩张，上皮增生，上皮细胞质中可见较多空泡，腺腔中见较多分泌物。乳腺导管上皮细胞增多呈多层，导管扩张。

附图3是阳性药乳疾灵，附图4是阳性药乳块消：乳腺小叶仍有轻度增生，但小叶体积较模型组小，数量也较之减小。乳腺腺管上皮细胞增生明显减轻，腺腔内可见较多脱落的上皮细胞。

附图7是所述的治疗乳腺疾病的中成药高剂量组：乳腺小叶体积较模型组小，腺管仍有扩张，但较模型组轻。

附图6是所述的治疗乳腺疾病的中成药中剂量组：乳腺小叶体积较模型组小，腺管仍有扩张，腺管上皮细胞可见空泡，腺腔内分泌物较多。

附图5是所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组：乳腺小叶体积较大，数目增多，腺管扩张明显，腺上皮增生。

6、结论：

所述的治疗乳腺疾病的中成药高、中剂量组能够降低乳腺增生模型大鼠血清中雌二醇水平；

所述的治疗乳腺疾病的中成药高、低剂量能够提高血清中孕酮的水平。

所述的治疗乳腺疾病的中成药各剂量组能够减小乳腺增生模型大鼠乳腺组织体积。

病理组织学观察，所述的治疗乳腺疾病的中成药能够减小乳腺小叶体积，减轻乳腺导管扩张程度。

通过以上结果，所述的治疗乳腺疾病的中成药对乳腺增生模型大鼠有治疗作用。

(二)小鼠乳腺增生的疾病模型的药效学实验

通过药效学实验表明按本发明处方工艺制备的药品除了能具有抑制乳腺增生的作用之外，并且对急慢性炎症均有较强的抑制作用和镇痛作用。

腹腔注射苯甲酸雌二醇复制小鼠乳腺增生的疾病模型，连续灌胃给药所述的治疗乳腺疾病的中成药30天，观察所述的治疗乳腺疾病的中成药对乳腺增生小鼠血清中性激素含量、乳腺高度及直径的影响，并对乳腺组织进行病理组织学检查。结果显示，所述的治疗乳腺疾病的中成药显著降低乳腺增生小鼠的乳腺高度和直径，病理组织学检查可见所述的治疗乳腺疾病的中成药中、高剂量组乳腺小叶体积较模型组均有减小，腺管扩张程度下降。所述的治疗乳腺疾病的中成药和乳疾灵均对乳腺增生小鼠血清雌二醇含量及孕酮含量未见明显影响。结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药具有抑制乳腺增生的作用，且其作用强度与乳疾灵无明显差异。

1、实验目的：观察所述的治疗乳腺疾病的中成药抗小鼠药物诱导乳腺增生作用，为评价所述的治疗乳腺疾病的中成药抗乳腺增生作用提供初步证据。

2、受试样品：

受试样品：所述的治疗乳腺疾病的中成药；

阳性对照：乳疾灵，西安太极药业有限公司，批号：130601。

3、试验动物：

健康spf级km雌性未孕小鼠72只，体重(20±2)g，辽宁长生生物技术有限公司。

4、实验方法：

将小鼠随机分为实验组(60只)和空白组(12只)，空白组小鼠腹腔注射生理盐水0.1mg/kg，两天一次；实验组腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg，两天一次，直至实验结束。造模第四天，以小鼠出现乳头红晕、隆起为模型制备成功。

将造模成功的小鼠随机分为5组，每组12只，分别为所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组(0.25、0.5、1.0g/kg)、乳疾灵组(1.0g/kg)和模型组。所述的治疗乳腺疾病的中成药的低、中、高剂量组和乳疾灵组灌胃给予药物，模型组、空白组灌胃给予等体积生理盐水0.1ml/10g，每天一次，持续30天。

末次给药30min后收集标本；摘眼球取血2ml，静置30分钟后，4℃离心(3000r/min)3min，取血清，置-20℃冰箱保存待测。取血后，完整剥取小鼠胸部，切取第2、3、4对乳腺组织，放入10％甲醛溶液固定液中待检。测量小鼠第2、3、4对乳腺高度及直径；采用放射免疫法测定血清中雌二醇e2、孕酮p含量；乳腺用10％甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，he染色，在光镜下观察小叶腺泡、导管上皮增生情况。

5、结果：

(1)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠血清性激素含量的影响

动物注射苯甲酸雌二醇之后，与空白对照组比较，模型对照组血清中雌二醇含量明显升高(p﹤0.001)，孕酮含量明显降低(p﹤0.001)，数据显示造模成功。连续给予所述的治疗乳腺疾病的中成药、乳疾灵30天后，各组动物血清雌二醇和孕酮含量与模型组比较未见显著变化。

(2)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠乳腺高度的影响

与空白组比较，模型组第二、三、四对乳腺高度显著性增大(p﹤0.001)；所述的治疗乳腺疾病的中成药连续给药30天后，所述的治疗乳腺疾病的中成药高剂量组显著降低第三对乳腺的高度(p﹤0.01)，其作用强度与乳疾灵组相比，无统计学差异。

(3)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠乳腺直径的影响

与空白对照组比较，模型对照组第二、三、四对乳腺直径显著增大(p﹤0.001)。所述的治疗乳腺疾病的中成药连续给药30天后，低、中、高剂量组小鼠乳腺直径都有不同程度地减小，与模型组比较有显著性差异，其中高剂量组第二对乳腺直径减小最明显(p﹤0.001)，所述的治疗乳腺疾病的中成药各剂量组与阳性药乳疾灵组相比，无统计学差异。

(4)病理组织学检查结果如附图8至附图13所示：

附图8为空白组：乳腺小叶形态规则，腺管排列整齐，未见扩张，腺管上皮细胞无增生。乳腺导管无扩张。

附图9为模型组：乳腺小叶增生，数目增多，体积增大，形态不规则。乳腺泡增大，腺管扩张，上皮增生，上皮细胞质中可见较多空泡，腺腔中见较多分泌物。乳腺导管上皮细胞增多呈多层，导管扩张。

附图10为阳性药(乳疾灵)：乳腺小叶仍有轻度增生，但小叶体积较模型组小。乳腺腺管上皮细胞增生明显减轻，腺腔分泌物较模型组明显减少。

附图13为所述的治疗乳腺疾病的中成药高剂量组：乳腺小叶体积较模型组小，腺管仍有扩张，但较模型组轻，略逊于阳性药组。

附图12为所述的治疗乳腺疾病的中成药中剂量组：乳腺小叶体积较模型组小，腺管扩张，腺管上皮细胞可见空泡，腺腔内分泌物较多。

附图11为所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组：乳腺小叶体积较大，腺管扩张较明显，腺上皮增生。

各组动物乳腺增生腺腔扩张导管扩张程度统计见表6：

表6各组乳腺病理变化程度

6、结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药具有抑制乳腺增生的作用，且其作用强度与乳疾灵无明显差异。

具体实施方式三：

本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：本实施方式由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡4份、皂角刺5份、王不留行6份、夏枯草6份、赤芍5份、郁金5份、牡蛎4份、丹参5份、橘核4份、三棱4份、莪术2份、甘草1份。

本实施方式制备的所述的治疗乳腺疾病的中成药，抗炎作用研究如下所述：

1、受试药物：

受试样品：所述的治疗乳腺疾病的中成药；

阳性对照：乳疾灵，西安太极药业有限公司生产，批号：130601。

2、试验动物：

健康spf级sd雌性未孕大鼠110只，体重180±20g，购自辽宁长生生物技术有限公司。

健康spf级km雌性未孕小鼠50只，体重25-35g，购自辽宁长生生物技术有限公司。

3、实验方法：

(1)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠足趾肿胀的影响

游标卡尺测量各组大鼠的左后足足厚度；给药1h后分取未孕雌性sd大鼠60只，体重为160-200g，按体重将其随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、乳疾灵组(0.7g/kg)、所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组(0.16g/kg)、中剂量组(0.32g/kg)、高剂量组(0.64g/kg)。空白对照组和模型对照组均灌胃给予生理盐水，给予量为1ml/100g；所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组和乳疾灵阳性药物组每日灌胃给予药物一次，大鼠的给药体积也按照1ml/100g，连续给药10天。在最后一天灌胃给药前1h，用游标卡尺测量大鼠左足的厚度，给药1h后，用注射器分别向大鼠的左后足爪中部皮下注射鸡蛋清，浓度为10％，给予量为0.1ml/爪；观察大鼠左后足肿胀程度，然后分别于0.5、1、2、4、6h后用ip54游标卡尺各测量一次大鼠左后足的厚度，测量时需要注意必须在相同部位。求出大鼠左后足同一肿胀部位的足肿胀度，计算足肿胀抑制率。

足肿胀度(mm)＝注射蛋清后左后足的厚度-注射蛋清前左后足的厚度；

足肿胀抑制率(％)＝(模型组肿胀度均值-给药组肿胀度均值)/模型组肿胀度均值×100％；

对结果进行统计学分析，试验结果以±sd表示，各给药组与模型组间、模型组与空白组间进行t检验。

(2)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠耳廓炎症的作用

取50只spf级雌性km小鼠，体重为25-35g，用随机方法按体重将其分为5组，每组10只，分别为模型对照组、乳疾灵组(1.0g/kg)、所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组(0.25g/kg)、中剂量组(0.5g/kg)、高剂量组(1.0g/kg)，连续给药3天，每天一次；模型对照组给予生理盐水，剂量按0.1ml/10g计；各给药组分别灌胃给药，给药量按0.1ml/10g计。于末次给药1h后，将小鼠右耳的正反两面涂以二甲苯致炎，每只给予0.1ml。致炎15分钟后将全部小鼠脱椎处死，沿小鼠耳廓基线将双耳分别剪下以便打孔，用内径9mm的耳肿打孔器在双耳的同一部位打孔，收集打下的耳片。分别称重，计算各组肿胀度及肿胀抑制率。

耳肿胀度(mg)＝右耳重量-左耳重量；

肿胀抑制率(％)＝(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100％；

数据处理：肿胀度结果以x±sd表示，统计学检验采用组间t检验进行比较。

(3)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠慢性炎症性肉芽肿作用

取spf级sd雌性大鼠50只，体重为160-200g，用双盲法将其随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组、乳疾灵组(0.7g/kg)、所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组(0.16g/kg)、中剂量组(0.32g/kg)、高剂量组(0.64g/kg)。在所有大鼠背部中间处取2cm×2cm面积剃毛，用酒精棉擦拭消毒，皮下注射2ml的2％琼脂(在55℃水浴中保温)，注射后立即凸起球状包块，即形成了大鼠慢性炎症肉芽肿模型。第二天开始，各给药组分别灌胃给予低、中、高剂量所述的治疗乳腺疾病的中成药及阳性药乳疾灵，模型组灌胃给予生理盐水，各组给药容量均为1ml/100g，每天一次，连续给药7天，每天观察大鼠背部肉芽肿的变化。于末次给药1h后将大鼠处死，剪开其背部肉芽肿部位的皮肤，剥离肉芽肿琼脂块并称其重量，然后计算各组药物抑制大鼠慢性炎症性肉芽肿的抑制率。

肉芽肿胀抑制率(％)＝(模型组肿块重量-各给药组肿块重量)/模型对照组肿块重量×100％；

用t检验比较各剂量组与模型对照组之间有无差异。

5、结果

(1)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠足趾肿胀的影响

注射鸡蛋清后，模型对照组大鼠的足肿胀度明显增加，模型对照组的肿胀度与空白对照组比较差异显著(p＜0.001)。给予鸡蛋清2小时后，所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组大鼠组肿胀度明显低于模型组；给予鸡蛋清4小时后，各给药剂量组与模型对照组相比较，各剂量组大鼠足肿胀度均明显低于模型组(p＜0.05)；给予给予鸡蛋清6小时后，各剂量组大鼠足肿胀度均明显低于模型组(p＜0.01)，各剂量组的肿胀抑制率可达38.0％、24.1％、27.8％，所述的治疗乳腺疾病的中成药低剂量组大鼠足肿胀度与乳疾灵组比较有统计学差异(p＜0.05)。

(2)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠耳廓炎症的影响

各剂量的所述的治疗乳腺疾病的中成药对雌性km小鼠耳廓炎症均有一定的抑制作用，所述的治疗乳腺疾病的中成药中、高剂量作用效果最为明显。二甲苯致炎15分钟后，所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组肿胀度由模型对照组的19.82±2.95分别降至17.23±1.95,13.23±0.88,9.56±1.77(p＜0.05,p＜0.001)；肿胀抑制率分别为13.1％，33.2％，51.8％，高剂量所述的治疗乳腺疾病的中成药的作用优于乳疾灵(p＜0.001)。阳性药乳疾灵也有一定的抗炎作用，抑制率为30.9％。

(3)所述的治疗乳腺疾病的中成药对大鼠慢性炎症性肉芽肿的作用

各组大鼠给药后的肉芽组织重量经统计学处理，与模型对照组相比，所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组对琼脂所致的雌性sd大鼠慢性炎症性肉芽肿均有很强的抑制作用。所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组的肉芽组织重量由模型对照组的2.03±0.46g分别下降至0.88±0.36g，1.18±0.28g，1.31±0.47g(p＜0.01,p＜0.001)抑制率分别为56.6％、41.9％、35.5％，低剂量组肉芽肿重量与乳疾灵组有显著差异(p＜0.05)，中、高剂量组与乳疾灵组未见显著差异。乳疾灵对慢性炎症性肉芽肿也有较好的抑制作用(抑制率42.4％)。

6、结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药对急慢性炎症均有较强的抑制作用。

具体实施方式四：

本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：本实施方式由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡6份、皂角刺6份、王不留行6份、夏枯草4份、赤芍6份、郁金6份、牡蛎4份、丹参4份、橘核4份、三棱4份、莪术2份、甘草2份。

本实施方式所述的治疗乳腺疾病的中成药，镇痛作用的研究如下所述：

1、试验目的：采用热板法和扭体法复制小鼠疼痛的疾病模型，评论所述的治疗乳腺疾病的中成药的镇痛作用。

2、受试药物：

受试样品：所述的治疗乳腺疾病的中成药；

阳性对照：阿司匹林肠溶片，吉林市鹿王制药股份公司，批号：h22025784

3、试验动物：

健康spf级雌性km小鼠120只，体重(20±2)g，购自辽宁长生生物技术有限公司。

4、给药途径：

经口灌胃给药，与临床给药途径一致。

5、试验方法：

(1)热板法

取小鼠70只，体重18～22g，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔足的时间(s)作为痛阈值，以不超过30s、不少于5s为合格，筛选出小鼠50只，随机分为5组，空白对照组、阿司匹林组(0.23g/kg)和所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高剂量组(0.25、0.5、1.0g/kg)，每组10只，称重并标记。将热板仪恒温调至(55±0.5)℃，在室温为22℃的安静环境中，给药前测定每只小鼠的痛阈值2次，取平均值作为给药前的阈值。分别灌胃给药1次，对照组给等容量(0.1ml/10g体重)生理盐水，给药60min后同样在22℃安静环境中，分别复测1次各鼠痛阈值，记录并计算痛阈值提高百分率。

(2)扭体法

取小鼠50只，按体重随机分组为5组，空白对照组、阿司匹林组(0.23g/kg)和所述的治疗乳腺疾病的中成药低、中、高(0.25、0.5、1g/kg)剂量组，每组10只。空白对照组给等体积0.1ml/10g生理盐水，每天灌胃1次，连续3天，末次给药0.5h后，腹腔注射1.0％乙酸0.2ml。观察并记录注射乙酸后15min内小鼠出现扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部高抬)的次数。

6、结果：

(1)所述的治疗乳腺疾病的中成药对小鼠痛阈值的影响

结果可见，阿司匹林可以显著提高小鼠对热板引起疼痛的耐受能力，痛阈值从(17.60±2.76)s提高到(24.94±3.41)s，给予所述的治疗乳腺疾病的中成药的各组小鼠的痛阈值也显著提高，其痛阈值分别从(20.41±3.30)s、(17.97±2.52)s、(17.83±3.43)s增加到(24.89±7.36)s、(27.76±4.48)s、(27.73±6.53)s,与空白对照组比较均有统计学差异(p＜0.05，p＜0.01)，与阿司匹林组未见显著差异。

(2)所述的治疗乳腺疾病的中成药对乙酸引起小鼠扭体反应的影响

给予所述的治疗乳腺疾病的中成药3天后，中、高剂量组所述的治疗乳腺疾病的中成药显著减少乙酸引起的小鼠扭体反应次数，与空白对照组比较有统计学差异(p＜0.001)，其作用强度与阿司匹林0.23g/kg比较仍有显著差异(p＜0.01)。

7、结论：所述的治疗乳腺疾病的中成药具有镇痛作用。

综上所述，所述的治疗乳腺疾病的中成药对乳腺增生模型大鼠有治疗作用，对苯甲酸雌二醇所致的小鼠乳腺增生有较好的抑制作用，并且对急慢性炎症均有较强的抑制作用和镇痛作用。

具体实施方式五：

本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：本实施方式由如下重量份数的中药材制备而成：柴胡2份、皂角刺3份、王不留行4份、夏枯草2份、赤芍3份、郁金4份、牡蛎2份、丹参3份、橘核2份、三棱5份、莪术0.5份、甘草2份。

对本实施方式制备的所述的治疗乳腺疾病的中成药进行急性毒性试验和长期毒性试验：

一、所述的治疗乳腺疾病的中成药的急性毒性试验：

方法：取合格小鼠40只，健康，雌性。随机分为两组，即阴性对照组与供试品组，每组20只。取供试品以溶媒配制成浓度为0.2g/ml的供试品溶液，口服灌胃，一日给药2次，给药体积每次为40ml/1kg，给药间隔4h。给药当日分别于给药前后观察小鼠大体状况，之后一日观察1次，连续14日，并分别与给药第7、14日称取动物体重。

结果：小鼠口服灌胃给予所述的治疗乳腺疾病的中成药共16g/kg，给药完毕后即刻观察，小鼠毛发、活动、眼神、进食饮水、二便均未见明显异常，腔道无异常分泌物。继续观察14日，未见明显毒性反应与动物死亡，供试品组动物的体重与同期的阴性对照组动物相比，亦未见明显差异。

结论：小鼠一日2次口服灌胃给予所述的治疗乳腺疾病的中成药共16g/kg，相当于人的一次临床用剂量(0.06g/kg)的267倍，未见明显的急性毒性反应与动物死亡。

二、所述的治疗乳腺疾病的中成药的长期毒性实验：

动物自接收当日起适应性饲养3日。

首次给药前所有动物称重做为本试验中动物的初始体重。

取合格雌性sd大鼠160只按随机分为4组，即阴性对照组、高剂量组、中剂量组与低剂量组，每组40只。5只/笼饲养。同笼动物采用苦味酸在体表毛发上不同位置涂抹标记以备区分。所有笼具用笼卡清楚表明该动物实验的专题编号、专题名称、供试品编号、实验日期、主要实验人员，并在笼卡上用色标标明该笼动物所属剂量组(红色：高剂量组；黄色：中剂量组；蓝色：低剂量组。)，阴性对照组不加色标。

供试液的配制与给予：由于供试品中含有中药材粗粉，考虑到供试液的抽吸与灌胃效率，故将供试品以溶媒配制成浓度为0.16g/ml、0.08g/ml、0.04g/ml的供试液，给药体积均为20ml/kg，均为给药当日临用现配。经计算高、中、低剂量分别为3.2g/kg、1.6g/kg、0.8g/kg，分别相当于人拟临床用剂量(0.06g/kg)的53倍、27倍和13倍(剂间距为2)，低剂量相当于动物主要药效学研究最大有效剂量(大鼠，0.4g/kg)的2倍，基本可以反映供试品的长期毒性。高、中、低三个剂量组口服灌胃给予不同浓度的供试液，阴性对照组同法给予对照品。实验周期定为一日1次，每周给药6日，连续给药6个月，停药恢复期为1个月。

每日2次记录动物大体状况，给予供试品前后各1次。主要观察其外观体征，行为活动和粪便形状。发现有中毒症状动物取出单笼饲养，重点观察。

每周定期称体重1次，测定耗食量1次。

各组于连续给药3个月时分别取10只动物、于末次给予供试品后分别取20只动物，禁食不禁水17小时，腹腔注射乌来糖1g/kg麻醉，腹主动脉取血作血液学、血清生化学检查，并进行大体剖检，取材作组织病理学检查。

剩余动物不再给予供试品，继续观察，每日1次，1个月后禁食不禁水17小时，腹腔注射乌来糖1g/kg麻醉，取血作血液学、血清生化学检查，并进行大体剖检，取材作组织病理学检查。

上述动物处理后所作组织病理学检查，均先取高剂量组与阴性对照组进行判读。如高剂量组无明显组织病理学异常或两组间无明显差异，则不再对中、低剂量组的组织切片作检查。如发现高剂量组动物出现组织病理学异常改变或与阴性对照组相比有明显差异，则须对其余两给药组动物进行组织切片判读。

所述的治疗乳腺疾病的中成药长期毒性试验结果如下：

1、一般症状：

供试品各剂量组与阴性对照组动物在给药期间精神状态良好，毛色、行为活动、采食、饮水、二便、呼吸均未见明显异常，眼、口鼻与其他腔道均未见明显异常分泌物。停药后观察1个月，供试品各剂量组与阴性对照组动物大体状况均未见明显异常。

体重：供试品组大鼠与阴性对照组对比，高剂量组动物于第6-17与19-27周体重较轻(p<0.05，p<0.01)；中剂量组动物于第12与13周体重较轻(p<0.05，p<0.01)。给药期与恢复期内其余时段体重均未见组间差异(p>0.05)。高剂量组动物于给药第5周体重增长较慢(p<0.01)；中剂量组动物于给药第1、5、7与9周体重增长较慢(p<0.05，p<0.01)；低剂量组动物于给药第7与28周起体重增长较慢(p<0.05，p<0.01)。给药期与恢复期内其余时段体重增长速度均未见组间差异(p>0.05)。

2、耗食量与食物利用率：供试品组大鼠与阴性对照组相比，高剂量组动物于给药第2、12、13、20与25周耗食量减少(p<0.05，p<0.01)；中剂量组动物于给药第12周耗食量减少(p<0.01)；低剂量组动物于给药第12周耗食量减少(p<0.05)。在给药期与恢复期其余时段内耗食量均未见明显组间差异(p>0.05)。高剂量组动物于给药第5周食物利用率降低(p<0.01)；中剂量组动物于给药第5与7周食物利用率降低(p<0.05，p<0.01)；低剂量组动物于给药第7周食物利用率降低(p<0.01)。在给药期与恢复期其余时段内食物利用率均未见明显组间差异(p>0.05)。

3、血液学检查：

(1)给药3个月

供试品各剂量组与阴性对照组相比，给药3个月，血液学各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)。

(2)给药6个月

供试品各剂量组大鼠与阴性对照组相比，给药6个月，高剂量组动物纤维蛋白原(fgb)水平较低(p<0.05)；血液学其余各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)，上述误差仍处于该实验室背景数据正常范围之内。

(3)恢复期

供试品各剂量组大鼠与阴性对照组相比，在恢复期内，中剂量组动物血红蛋白(hgb)水平升高(p<0.01)。给药期与恢复期的血液学各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)。

上述差异仍处于该实验室背景数据正常范围之内。

4、血液生化学：

4.1给药3个月

与阴性对照组动物相比，给药3个月后供试品中剂量组动物总胆固醇(tcho)水平较高(p<0.05)；结合其它相关指标与组织病理学检查结果分析，该差异处于正常范围之内，与药物本身作用没有明显关系。供试品组与阴性对照组相比，给药3个月，各组动物的孕酮、雌二醇、睾酮及血液生化学其余各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)。

4.2给药6个月

与阴性对照组动物相比，供试品高剂量组动物尿素氮(bun)水平较高(p<0.05)；甘油三酯(tg)水平较低(p<0.05),结合其他相关指标与组织病理学检查结果分析，该项数据处于正常范围之内，与药物本身作用没有明显关系。供试品组与阴性对照组相比，给药6个月，各组动物的孕酮、雌二醇、睾酮及血液生化学其余各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)。

5、恢复期：

供试品各剂量组与阴性对照组相比，在恢复期内各组动物的孕酮、雌二醇、睾酮等性激素及其余各项血液生化学各项指标均未见明显差异(p>0.05)。

6、脏器重量及其系数：

6.1给药3个月

高剂量组雌性大鼠的脑、心脏与肾上腺系数与阴性对照组相比升高(p<0.05)，但大体剖检与组织病理学分析表明，该差异与药物本身作用没有明显关系。供试品各剂量组与阴性对照组相比，给药3个月，脏器重量及其系数其余各项指标均未见明显的组间差异(p>0.05)。

6.2给药6个月

与阴性对照组相比，高剂量组雌性大鼠的肾脏重量减轻(p<0.01)，脑系数升高(p<0.01)，但大体剖检与组织病理学分析表明，该差异与药物本身作用没有明显关系。供试品各剂量组与阴性对照组相比，给药6个月，脏器重量及其系数其余各项指标均未见明显组间差异(p>0.05)。供试品组与阴性对照组相比，给药6个月后停药恢复1个月，脏器重量及其系数各项指标均未见明显组间差异。

7组织病理学检查：

7.1给药3个月

按试验计划对各组动物进行了病理解剖及大体病理检查，对高剂量组及阴性对照组的脑、心、肝、脾、肺、肾、脑(大脑、小脑、脑干、垂体等)、脊髓(颈、胸、腰)、胸腺、淋巴结、主动脉、乳腺、唾液腺、气管、甲状腺、胃、胰腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、膀胱、卵巢、子宫、肌肉坐骨神经、胸骨等器官进行了常规组织病理学检查。病变程度的表示方法如下：±：轻微异常；+：轻度异常；++：中毒异常；+++：显著异常；++++：严重异常。

对各组动物进行了大体病理检查，并对高剂量组及阴性对照组的主要脏器进行了常规组织病理学检查。除部分脏器出现的一些自发、偶发或非特异性病理改变外，受试大鼠各主要器官均未发现明显的药物毒性相关的病理改变。

7.2给药6个月

按试验计划对各组动物进行了病理解剖及大体病理检查，对高剂量组及阴性对照组的脑、心、肝、脾、肺、肾、脑(大脑、小脑、脑干、垂体等)、脊髓(颈、胸、腰)、胸腺、淋巴结、主动脉、乳腺、唾液腺、气管、甲状腺、胃、胰腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、膀胱、卵巢、子宫、肌肉坐骨神经、胸骨等器官进行了常规组织病理学检查。病变程度的表示方法如下：±：轻微异常；+：轻度异常；++：中毒异常；+++：显著异常；++++：严重异常。

对各组动物进行了大体病理检查，并对高剂量组及阴性对照组的主要脏器进行了常规组织病理学检查。除部分脏器出现的一些自发、偶发或非特异性病理改变外，受试大鼠各主要器官均未发现明显的药物毒性相关的病理改变。

8、恢复1个月

按试验计划对各组动物进行了病理解剖及大体病理检查，对高剂量组及阴性对照组的脑、心、肝、脾、肺、肾、脑(大脑、小脑、脑干、垂体等)、脊髓(颈、胸、腰)、胸腺、淋巴结、主动脉、乳腺、唾液腺、气管、甲状腺、胃、胰腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、膀胱、卵巢、子宫、肌肉坐骨神经、胸骨等器官进行了常规组织病理学检查。病变程度的表示方法如下：±：轻微异常；+：轻度异常；++：中毒异常；+++：显著异常；++++：严重异常。

对各组动物进行了大体病理检查，并对高剂量组及阴性对照组的主要脏器进行了常规组织病理学检查。除部分脏器出现的一些自发、偶发或非特异性病理改变外，受试大鼠各主要器官均未发现明显的药物毒性相关的病理改变。

使用试验设计剂量的所述的治疗乳腺疾病的中成药6个月后恢复1个月，受试动物各主要器官均未发现明显的药物毒性相关性病理改变。

试验结论：长期毒性试验结果表明，大鼠连续6个月口服灌胃给予所述的治疗乳腺疾病的中成药，动物一般大体状况、血液学、血液生化学、脏器重量及其系数与组织病理学检查结果均未产生与药物相关的异常改变。