集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的制备方法与流程

本发明涉及一种集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的制备方法，属于药物载体领域。

背景技术：

磁性药物载体是一个发展前景比较广阔的领域，对其制备、性能及应用的探索已成为研究的热点。在制备上，磁性纳米材料一般为核壳式的微球，已经有不少学者对核壳式磁性纳米材料进行了探索。如段雪等人制备的mgfe2o4@ibu(布洛芬)/ldh磁性复合物、fe3o4@dfur(脱氧氟尿苷)/ldh复合物和fe3o4@sio2@ldh微球；侯万国教授等合成了fe3o4@ldh复合物；施剑林研究员等合成了fe3o4@sio2@ldh核壳结构等。这种结构在外置磁场的作用下，载药系统可以把药物输送到目标部位，提高靶向性。

目前对药物载体的研究已经趋向多元化、多功能化协同合作。

技术实现要素：

根据现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是：提供一种集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的制备方法，该产物具有磁靶向功能、具有热疗和化疗功能，实现了药物载体的多功能化。

本发明通过热分解法合成了mtx修饰的四氧化三铁，又通过静电引力作用将mtx-fe3o4和aunps成功组装到mtx/ldhs上，得到最终产物fe3o4@mtx/ldh-au。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的制备方法，包括以下步骤：

(1)采用热分解法合成fe3o4-mtx：

将fecl3.6h2o溶于乙二醇中，然后将naac、聚乙二醇和mtx加入上述溶液中，搅拌后，转移至高压反应釜中，反应完成后将其放入烘箱内，进行水热处理，即制备出了fe3o4-mtx纳米复合物；

(2)fe3o4@mtx/ldh纳米材料的合成：

溶液a的配置：将新合成的fe3o4-mtx纳米复合物加入到醇水溶液中，将mtx溶于nh3·h2o中，并将其转移至上述醇水溶液中，此混合溶液标记为溶液a；

混合盐溶液b的配置：将mg(no3)3·6h2o和al(no3)3·9h2o同样溶于50ml醇水溶液中配成混合盐溶液b，

将溶液a转移至三颈烧瓶中并持续通入氮气，然后将混合盐溶液b滴加到溶液a中，滴加过程中调节混合溶液的ph值为9.5，温度保持在60℃，磁力搅拌并不断的通入n2，1h后停止反应，即得到产物fe3o4@mtx/ldh；

(3)集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的合成：

采用种子生长法合成aunps，将柠檬酸钠溶液加入圆底烧瓶中，在油浴中加热至沸腾，然后逐滴加入haucl4，溶液由黄色变为酒红色，直到颜色不再变化，形成金种；将金种降温至90℃，加入柠檬酸钠溶液和haucl4，搅拌反应后，即得到粒径为30nm的金纳米粒子；

取新合成的aunps离心洗涤后，重新分散到蒸馏水中，将其加入到fe3o4@mtx/ldh纳米复合物中，室温下搅拌，即得到最终产物fe3o4@mtx/ldh-au。

所述的采用热分解法合成fe3o4-mtx：

称取1.35gfecl3.6h2o溶于40ml乙二醇中，然后分别称取3.6gnaac、1.0g聚乙二醇和30mgmtx加入上述溶液中，室温下搅拌30min后，转移至50ml高压反应釜(压力15-30mpa)中反应，反应结束后将其放入烘箱内，在180℃下进行24h水热处理，即制备出了fe3o4-mtx纳米复合物。

所述的fe3o4@mtx/ldh纳米材料的合成：

溶液a的配置：准确称取50mg新合成的fe3o4-mtx纳米复合物加入到50ml醇水溶液中(乙醇、水体积比为1:3)，将0.0341gmtx溶于8ml10％nh3·h2o，并将其转移至上述溶液中，此混合溶液标记为溶液a；

混合盐溶液b的配置：称取0.07692gmg(no3)3·6h2o和0.05627gal(no3)3·9h2o，将其同样溶于50ml醇水溶液(乙醇、水体积比为1:3)中配成混合盐溶液b，

将溶液a转移至三颈烧瓶中并持续通入氮气，以保护溶液中的四氧化三铁，然后将混合盐溶液b滴加到溶液a中，滴加过程中用质量分数为10％的氨水调节混合溶液的ph值为9.5，温度保持在60℃，磁力搅拌并不断的通入n2，1h后停止反应，即得到产物fe3o4@mtx/ldh。

所述的集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的合成：

采用种子生长法合成aunps，将150ml0.0022mol/l柠檬酸钠溶液加入圆底烧瓶中，在137℃的油浴中加热至沸腾，然后逐滴加入1ml0.025mol/lhaucl4，溶液由黄色变为酒红色，直到颜色不再变化，形成金种；

将金种降温至90℃，迅速加入3ml0.06mol/l柠檬酸钠溶液和1ml0.025mol/lhaucl4，磁力搅拌反应1h后，即得到粒径为30nm的金纳米粒子；

取20ml新合成的aunps离心洗涤后，重新分散到20ml蒸馏水中，将其加入到10ml10mg/mlfe3o4@mtx/ldh纳米复合物中，室温下搅拌5h，即得到最终产物fe3o4@mtx/ldh-au。

所述的醇水溶液中醇与水的体积比为1：3(醇水这里的醇是说乙醇)。

本发明的有益效果是：

1、本发明通过热分解法合成了mtx修饰的四氧化三铁，又通过静电引力作用将mtx-fe3o4和aunps成功组装到mtx/ldhs上，得到最终产物fe3o4@mtx/ldh-au。该产物具有磁靶向功能、具有热疗和化疗功能，实现了药物载体的多功能化；

2、本发明值得的fe3o4@mtx/ldh-au复合物在pbs的释放主要分为两个阶段，前100min释放速率比较快，而100-500min释放速度较慢，这与mtx/ldh的药物释放规律相似。我们同样认为第一阶段主要是吸附在fe3o4@mtx/ldh-au表面的药物的释放，而第二阶段的药物释放主要是由层间药物分子与磷酸根阴离子的离子交换引起的。综上说明，fe3o4@mtx/ldh-au复合物具有较好的缓释性能。

附图说明

图1为fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh和fe3o4@mtx/ldh-au的tem图；

图2为样品fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh、fe3o4@mtx/ldh-au和au-mtx的xrd图；

图3为是样品mtx、fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh和fe3o4@mtx/ldh-au的ftir图；

图4为fe3o4@mtx/ldh-au纳米复合物的缓释曲线图；

其中图1中(a，b)样品为fe3o4-mtx的tem图；(c，d)样品为fe3o4@mtx/ldh的tem图；(e，f)样品为fe3o4@mtx/ldh-au的tem图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的实施例做进一步描述：

实施例1

如图1～4所示，本发明为集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的制备方法，包括以下步骤：

(1)采用热分解法合成fe3o4-mtx；

(2)fe3o4@mtx/ldh纳米材料的合成；

(3)集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的合成。

所述的采用热分解法合成fe3o4-mtx：

称取1.35gfecl3.6h2o溶于40ml乙二醇中，然后分别称取3.6gnaac、1.0g聚乙二醇和30mgmtx加入上述溶液中，室温下搅拌30min后，转移至50ml高压反应釜(15-30mpa压力下)中反应，反应结束后将其放入烘箱内，在180℃下进行24h水热处理，即制备出了fe3o4-mtx纳米复合物。

所述的fe3o4@mtx/ldh纳米材料的合成：

溶液a的配置：准确称取50mg新合成的fe3o4-mtx纳米复合物加入到50ml醇水溶液中(乙醇/水体积比为1:3)，将0.0341gmtx溶于8ml10％nh3·h2o，并将其转移至上述溶液中，此混合溶液标记为溶液a；

混合盐溶液b的配置：称取0.07692gmg(no3)3·6h2o和0.05627gal(no3)3·9h2o，将其同样溶于50ml醇水溶液(乙醇/水体积比为1:3)中配成混合盐溶液b，

将溶液a转移至三颈烧瓶中并持续通入氮气，以保护溶液中的四氧化三铁，然后将混合盐溶液b滴加到溶液a中，滴加过程中用质量分数为10％的氨水调节混合溶液的ph值为9.5，温度保持在60℃，磁力搅拌并不断的通入n2，1h后停止反应，即得到产物fe3o4@mtx/ldh。

所述的集磁靶向、热疗化疗一体化的多功能药物载体的合成：

采用种子生长法合成aunps，将150ml0.0022mol/l柠檬酸钠溶液加入圆底烧瓶中，在137℃的油浴中加热至沸腾，然后逐滴加入1ml0.025mol/lhaucl4，溶液由黄色变为酒红色，直到颜色不再变化，形成金种；

将金种降温至90℃，迅速加入3ml0.06mol/l柠檬酸钠溶液和1ml0.025mol/lhaucl4，磁力搅拌反应1h后，即得到粒径为30nm的金纳米粒子；

取20ml新合成的aunps离心洗涤后，重新分散到20ml蒸馏水中，将其加入到10ml10mg/mlfe3o4@mtx/ldh纳米复合物中，室温下搅拌5h，即得到最终产物fe3o4@mtx/ldh-au。

所述的醇水溶液中醇与水的体积比为1∶3(醇水这里的醇是说乙醇)。

从图1中可以看出，fe3o4-mtx分布比较均匀，粒径均一。测得fe3o4-mtx的zeta电位为-40.5mv，具有较强的稳定性，通过静电作用，将镁铝盐溶液，mtx溶液以及fe3o4混合，在fe3o4原位进行生长，生成了具有核壳结构的fe3o4@mtx/ldh纳米复合物(图1c-d)，在图中看到明显的ldh薄壳包裹在fe3o4的表面，证明了fe3o4@mtx/ldh纳米复合物结构的存在。将fe3o4@mtx/ldh与一定体积的aunps混合搅拌，得到fe3o4@mtx/ldh-au纳米复合物(图1e-f)，aunps通过静电引力成功的吸附到了fe3o4@mtx/ldh表面。

样品fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh、fe3o4@mtx/ldh-au和au-mtx的xrd图见图2，样品fe3o4-mtx在30.1°、35.5°、43.1°、53.4°、57.0°和62.6°处出现了较强的特征峰，这对应于fe3o4反立方尖晶石结构的(220)、(311)、(400)、(422)、(511)和(440)晶面的衍射峰。在fe3o4@mtx/ldh中，除了fe3o4-mtx的特征峰外，还存在ldh的衍射峰，但强度不高。对于au-mtxnps而言，在2θ为38°，44.6°，64.8°和77.8°处出现的强峰对应于aunps的(111)，(200)，(220)和(311)晶面的特征衍射峰。而在fe3o4@mtx/ldh-au样品中，fe3o4-mtx，aunps和ldh的特征衍射峰均存在。xrd图中右上角的小图部分是样品fe3o4@mtx/ldh-au在2θ为2-20°的xrd，在此图中可以明显地看出，ldh的(003)和(006)衍射峰的存在，且与no3-ldhs(003特征衍射峰对应的2θ角为10.92°)相比，样品的(003)衍射峰向低角度方向移动，表明药物mtx成功的插入到ldhs层间。综上说明，样品fe3o4@mtx/ldh-au已合成成功。

图3是样品mtx、fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh和fe3o4@mtx/ldh-au的ftir图。样品fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh和fe3o4@mtx/ldh-au在575cm^-1处出现了fe-o的特征吸收峰，说明了fe3o4均存在于上述物质中。对比各样品可发现，四种样品均在波数为1614cm^-1和1100cm^-1的位置出现特征吸收峰，这两个吸收峰分别对应mtx中coo^-的反对称振动峰和mtx芳香环中伯胺和叔胺c-n键的伸缩振动峰，说明mtx成功地负载于fe3o4-mtx、fe3o4@mtx/ldh和fe3o4@mtx/ldh-au纳米粒子表面。

fe3o4@mtx/ldh-au纳米复合物的载药量为38.2％，在37℃ph＝7.4的pbs缓冲溶液中探究fe3o4@mtx/ldh-au的缓释性能(图4)，从图中可以看出复合物具有非常明显的缓释效果，缓释曲线平稳，并没有发生药物的突释现象。fe3o4@mtx/ldh-au复合物在pbs的释放主要分为两个阶段，前100min释放速率比较快，而100-500min释放速度较慢，这与mtx/ldh的药物释放规律相似。我们同样认为第一阶段主要是吸附在fe3o4@mtx/ldh-au表面的药物的释放，而第二阶段的药物释放主要是由层间药物分子与磷酸根阴离子的离子交换引起的^[106]。综上说明，fe3o4@mtx/ldh-au复合物具有较好的缓释性能。