本发明属于牙膏制备技术领域，具体来讲是涉及一种生物蛋白抑菌牙膏及检测方法。
背景技术：
牙膏是日常生活中常用的清洁用品，有着很悠久的历史。随着科学技术的不断发展，工艺装备的不断改进和完善，各种类型的牙膏相继问世，产品的质量和档次不断提高，现在牙膏品种已由单一的清洁型牙膏，发展成为品种齐全、功能多样，上百个品牌的多功能型牙膏，满足了不同层次消费水平的需要。
药物牙膏是指在普通牙膏中加入某些药物，使牙膏具有药物的治病作用，也称为功效牙膏。药物牙膏品种繁多，大致可以分为以下几类：1、抗菌消炎型：这类牙膏具有不同程度的抑菌作用，对于口腔软组织(如牙龈)炎症具有一定的辅助疗效。2、抗过敏类：这类牙膏含有抗过敏药物，针对牙齿过敏症状，可以起一定的缓解作用。如高露洁专效抗敏牙膏，它可以直接涂抹于敏感牙齿上，一分钟就能舒缓牙敏感。3、去垢增白类：这类牙膏中含有某些抗牙结石形成的药物，使牙结石在牙齿表面不易沉积，更易去除，增加牙齿洁白效果。4、除臭类：这类牙露在原有芳香剂的基础上，增加了芳香抑臭药物，对口臭的人有一定帮助。5、防龋脱敏类牙膏：牙膏中加有氟化钠、氟化亚锡、氯化锶等。此类牙膏对减少龋齿及牙齿脱敏，确有一定的效果，儿童、青少年与中老年人都适宜选用。6、活血化淤、改善代谢类牙膏：常用此类牙膏对辅助防治牙及牙周的疾病有一定的作用，长期使用未见有副作用，有益无害，老少皆宜。7、抗菌消炎类牙膏：牙膏中加入某些化学药物，以达到抗菌斑、抑菌消炎的作用。对局部原因引起的口臭、牙龈出血、牙周炎等确有一定的效果，但不宜长期使用。
卵黄生物蛋白是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，特别是鱼肉蛋白酶解制得的肽，不含苦味，可以对人体的口腔黏膜进行营养供给和抑菌保护，再将植物提取物及多种活性成分集合肽，具有很强口腔抑菌作用。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供了一种生物蛋白抑菌牙膏及检测方法，将卵黄生物蛋白和植物提取物有效结合，加入多种有效成分，可以发挥出很好的口腔抑菌效果。
本发明的技术方案为：一种生物蛋白抑菌牙膏，主要包括以下成分：卵黄生物蛋白0.8-1.5％、植物提取物0.4-0.8％、纳米活性炭10-20％、植酸钠1-2％、磷酸氢钙3-5％、粘结剂0.8-1.2％、发泡剂2-3％、甜味剂0.2-0.4％、防腐剂0.05-0.09％、余量为去离子水；所述卵黄生物蛋白是对抗变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌五种病菌的复合抗体。也可以根据需要防治的其他口腔疾病或呼吸道疾病对所含的抗体种类进行增减调整。
进一步地，所述卵黄生物蛋白的制备方法为：
s1：选择培养出变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌；
s2：用s1培养的致病菌种按适当比例混合，一般为等比例；然后按1:1比例加入等量的福氏佐剂；再用高速匀浆器以10000-30000rpm高速匀化制备成复合抗原；
s3：用所述复合抗原对产蛋鸵鸟进行注射，检取鸵鸟所生的免疫蛋，分离抽提制得所述卵黄生物蛋白。
进一步地，所述s3分离抽提制得所述卵黄生物蛋白的具体操作方法为：用蛋黄筛取出免疫蛋的蛋黄，搅打均匀；按1:6-7的体积比加入灭菌蒸馏水稀释混匀；调ph值至5.2；加入浓度为3％海藻酸钠至终浓度为2.2‰，搅拌直至出现浑浊沉淀；加入浓度为1.5％的cacl2液至终浓度为1.2‰，搅拌均匀；置于3-5℃条件下静置15-20小时，然后虹吸收取上清，得到所述卵黄生物蛋白。
进一步的，所述的植物提取物为玉米花粉提取物，其制备步骤为：将玉米花粉，加入5-8倍体积去离子水，超声辅助加热到80-90℃进行水提，离心分离上清液后，沉淀物重复提取两次，合并所有的上清液，减压浓缩至1-2g花粉/ml，给所述的浓缩物中缓慢加入质量浓度为75％的乙醇至沉淀不再产生，离心去沉淀，取上清液减压浓缩获得浸膏，给浸膏中加入质量浓度为45％的甲醇搅拌至恰好完全溶解，缓慢减压浓缩回收甲醇后并干燥得到的淡黄色粉末即为玉米花粉提取物。
进一步的，所述的粘结剂为黄原胶。
进一步的，所述的发泡剂为月桂醇硫酸酯钠。
进一步的，所述的甜味剂为三氯蔗糖，是以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍，具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点，是目前最优秀的功能性甜味剂之一。
进一步的，所述的防腐剂为苯甲酸钠，是一种食品型防腐剂，健康无毒害。
进一步的，所述的牙膏的制备方法为：将所述重量比例的粘结剂、发泡剂、植酸钠、磷酸氢钙搅拌混合，得到混合物a，将甜味剂、防腐剂按照所述的重量比例在去离子水中混合搅拌均匀得到混合物b，将所述重量比例的卵黄生物蛋白、植物提取物、纳米活性炭混合搅拌均匀得到混合物c，然后打开制膏机的真空系统，将真空度抽至-0.3mpa，分别加入混合物a、b，同时开动搅拌器，加完混合物a、b物料后将真空度抽至-0.9mpa，开始导入混合物c，并保持真空度在-0.6～-0.9mpa之间，直到将混合物c的物料完全进完，在真空度为-0.9～-0.95mpa下搅拌60分钟，打开制膏机的常压阀门，待制膏机的气体全部放出后，把制膏机内的膏体导出后分装，即得到所述的生物蛋白抑菌牙膏。
一种生物蛋白抑菌牙膏的检测方法，所述的检测方法为牙膏中卵黄生物蛋白组分分子量的检测，具体的检测方法包括以下步骤：
(1)样品溶液配制：
a.准确称取0.68045gkh2po4，然后用适量的双蒸水溶解，用100ml容量瓶定容至刻度线,充分溶解后即制得浓度为0.05mol/l的kh2po4溶液；
b.120ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液的配制：准确称取0.0120g的卵黄生物蛋白，用适量双蒸水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度线，既得浓度为160ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液；
c.精密称取2g左右牙膏样品，加入小烧杯中使用不含氨的蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌，定容至100ml容量瓶中，取10ml注入比色管中，再加入10ml的10％三氯醋酸，静止沉降30分钟后，用离心机以10000r/min的转速离心5-10min，取上清液5ml注入干燥的凯氏瓶中，加入25ml三氯乙酸标准溶液进行肽沉淀消化，混合液震荡，静置10分钟，在4000r/min下离心20min，取上清液，得到所述牙膏的卵黄生物蛋白提取成分溶液；
(2)利用高效液相色谱法对所述的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行检测：在流动相中加入少量的三氟乙酸改善出峰效果，以甲醇-kh2po4为流动相，并设定各个流动相的不同洗脱条件进行全波长扫描，设定柱温为30℃，进样量10ul，根据出图情况来确定卵黄生物蛋白的组份分子量。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：通过将卵黄生物蛋白、植物提取物、纳米活性炭、植酸钠、磷酸氢钙相结合，再加入各种牙膏添加剂，真空制膏得到所述的生物蛋白抑菌牙膏，可以有效的增加生物蛋白肽活性和改善生物蛋白肽对涉及黑素生成的损坏蛋白的降解，对于牙齿污垢进行脱色素、增亮、增白；玉米花粉能促进淋巴结和口腔腺体的发育，增强免疫细胞的活性，提高机体对抗细菌和病毒的能力，并有抗辐射、抗癌作用。同时利用高效液相色谱法对所述的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行检测，活性成分稳定，含量高，效果显著。
附图说明
图1是以甲醇-kh2po4为流动相时在不同的洗脱条件下得到的色谱图。
具体实施方式
为便于对本发明的理解，下面将结合具体实施例为例做进一步的解释说明，实施例并不构成对本发明实施例的限定。
实施例1：一种生物蛋白抑菌牙膏，主要包括以下成分：卵黄生物蛋白0.8％、植物提取物0.4％、纳米活性炭10％、植酸钠1％、磷酸氢钙3％、粘结剂0.8％、发泡剂2％、甜味剂0.2％、防腐剂0.05％、余量为去离子水；所述卵黄生物蛋白是对抗变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌五种病菌的复合抗体。
其中，所述卵黄生物蛋白的制备方法为：
s1：选择培养出变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌；
s2：用s1培养的致病菌种按适当比例混合，一般为等比例；然后按1:1比例加入等量的福氏佐剂；再用高速匀浆器以10000rpm高速匀化制备成复合抗原；
s3：用所述复合抗原对产蛋鸵鸟进行注射，检取鸵鸟所生的免疫蛋，分离抽提制得所述卵黄生物蛋白，所述s3分离抽提制得所述卵黄生物蛋白的具体操作方法为：用蛋黄筛取出免疫蛋的蛋黄，搅打均匀；按1:6的体积比加入灭菌蒸馏水稀释混匀；调ph值至5.2；加入浓度为3％海藻酸钠至终浓度为2.2‰，搅拌直至出现浑浊沉淀；加入浓度为1.5％的cacl2液至终浓度为1.2‰，搅拌均匀；置于3℃条件下静置15小时，然后虹吸收取上清，得到所述卵黄生物蛋白。
其中，所述的植物提取物为玉米花粉提取物，其制备步骤为：将玉米花粉，加入5倍体积去离子水，超声辅助加热到80℃进行水提，离心分离上清液后，沉淀物重复提取两次，合并所有的上清液，减压浓缩至1g花粉/ml，给所述的浓缩物中缓慢加入质量浓度为75％的乙醇至沉淀不再产生，离心去沉淀，取上清液减压浓缩获得浸膏，给浸膏中加入质量浓度为45％的甲醇搅拌至恰好完全溶解，缓慢减压浓缩回收甲醇后并干燥得到的淡黄色粉末即为玉米花粉提取物。所述的粘结剂为黄原胶。所述的发泡剂为月桂醇硫酸酯钠。所述的甜味剂为三氯蔗糖，是以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍，具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点，是目前最优秀的功能性甜味剂之一。所述的防腐剂为苯甲酸钠，是一种食品型防腐剂，健康无毒害。
其中，所述的牙膏的制备方法为：将所述重量比例的粘结剂、发泡剂、植酸钠、磷酸氢钙搅拌混合，得到混合物a，将甜味剂、防腐剂按照所述的重量比例在去离子水中混合搅拌均匀得到混合物b，将所述重量比例的卵黄生物蛋白、植物提取物、纳米活性炭混合搅拌均匀得到混合物c，然后打开制膏机的真空系统，将真空度抽至-0.3mpa，分别加入混合物a、b，同时开动搅拌器，加完混合物a、b物料后将真空度抽至-0.9mpa，开始导入混合物c，，直到将混合物c的物料完全进完，在真空度为-0.9mpa下搅拌60分钟，打开制膏机的常压阀门，待制膏机的气体全部放出后，把制膏机内的膏体导出后分装，即得到所述的生物蛋白抑菌牙膏。
一种生物蛋白抑菌牙膏的检测方法，所述的检测方法为牙膏中卵黄生物蛋白组分分子量的检测，具体的检测方法包括以下步骤：
(1)样品溶液配制：
a.准确称取0.68045gkh2po4，然后用适量的双蒸水溶解，用100ml容量瓶定容至刻度线,充分溶解后即制得浓度为0.05mol/l的kh2po4溶液；
b.120ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液的配制：准确称取0.0120g的卵黄生物蛋白，用适量双蒸水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度线，既得浓度为160ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液；
c.精密称取2g左右牙膏样品，加入小烧杯中使用不含氨的蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌，定容至100ml容量瓶中，取10ml注入比色管中，再加入10ml的10％三氯醋酸，静止沉降30分钟后，用离心机以10000r/min的转速离心5min，取上清液5ml注入干燥的凯氏瓶中，加入25ml三氯乙酸标准溶液进行肽沉淀消化，混合液震荡，静置10分钟，在4000r/min下离心20min，取上清液，得到所述牙膏的卵黄生物蛋白提取成分溶液；
(2)利用高效液相色谱法对所述的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行检测：在流动相中加入少量的三氟乙酸改善出峰效果，以甲醇-kh2po4为流动相，并设定各个流动相的不同洗脱条件进行全波长扫描，设定柱温为30℃，进样量10ul，根据出图情况来确定卵黄生物蛋白的组份分子量。
实施例2：一种生物蛋白抑菌牙膏，主要包括以下成分：卵黄生物蛋白1.1％、植物提取物0.6％、纳米活性炭15％、植酸钠1.5％、磷酸氢钙4％、粘结剂1％、发泡剂2.5％、甜味剂0.3％、防腐剂0.07％、余量为去离子水；所述卵黄生物蛋白是对抗变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌五种病菌的复合抗体。
其中，所述卵黄生物蛋白的制备方法为：
s1：选择培养出变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌；
s2：用s1培养的致病菌种按适当比例混合，一般为等比例；然后按1:1比例加入等量的福氏佐剂；再用高速匀浆器以20000rpm高速匀化制备成复合抗原；
s3：用所述复合抗原对产蛋鸵鸟进行注射，检取鸵鸟所生的免疫蛋，分离抽提制得所述卵黄生物蛋白，所述s3分离抽提制得所述卵黄生物蛋白的具体操作方法为：用蛋黄筛取出免疫蛋的蛋黄，搅打均匀；按1:6.5的体积比加入灭菌蒸馏水稀释混匀；调ph值至5.2；加入浓度为3％海藻酸钠至终浓度为2.2‰，搅拌直至出现浑浊沉淀；加入浓度为1.5％的cacl2液至终浓度为1.2‰，搅拌均匀；置于4℃条件下静置17.5小时，然后虹吸收取上清，得到所述卵黄生物蛋白。
其中，所述的植物提取物为玉米花粉提取物，其制备步骤为：将玉米花粉，加入6.5倍体积去离子水，超声辅助加热到85℃进行水提，离心分离上清液后，沉淀物重复提取两次，合并所有的上清液，减压浓缩至1.5g花粉/ml，给所述的浓缩物中缓慢加入质量浓度为75％的乙醇至沉淀不再产生，离心去沉淀，取上清液减压浓缩获得浸膏，给浸膏中加入质量浓度为45％的甲醇搅拌至恰好完全溶解，缓慢减压浓缩回收甲醇后并干燥得到的淡黄色粉末即为玉米花粉提取物。所述的粘结剂为黄原胶。所述的发泡剂为月桂醇硫酸酯钠。所述的甜味剂为三氯蔗糖，是以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍，具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点，是目前最优秀的功能性甜味剂之一。所述的防腐剂为苯甲酸钠，是一种食品型防腐剂，健康无毒害。
其中，所述的牙膏的制备方法为：将所述重量比例的粘结剂、发泡剂、植酸钠、磷酸氢钙搅拌混合，得到混合物a，将甜味剂、防腐剂按照所述的重量比例在去离子水中混合搅拌均匀得到混合物b，将所述重量比例的卵黄生物蛋白、植物提取物、纳米活性炭混合搅拌均匀得到混合物c，然后打开制膏机的真空系统，将真空度抽至-0.3mpa，分别加入混合物a、b，同时开动搅拌器，加完混合物a、b物料后将真空度抽至-0.9mpa，开始导入混合物c，直到将混合物c的物料完全进完，在真空度为-0.93mpa下搅拌60分钟，打开制膏机的常压阀门，待制膏机的气体全部放出后，把制膏机内的膏体导出后分装，即得到所述的生物蛋白抑菌牙膏。
一种生物蛋白抑菌牙膏的检测方法，所述的检测方法为牙膏中卵黄生物蛋白组分分子量的检测，具体的检测方法包括以下步骤：
(1)样品溶液配制：
a.准确称取0.68045gkh2po4，然后用适量的双蒸水溶解，用100ml容量瓶定容至刻度线,充分溶解后即制得浓度为0.05mol/l的kh2po4溶液；
b.120ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液的配制：准确称取0.0120g的卵黄生物蛋白，用适量双蒸水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度线，既得浓度为160ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液；
c.精密称取2g左右牙膏样品，加入小烧杯中使用不含氨的蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌，定容至100ml容量瓶中，取10ml注入比色管中，再加入10ml的10％三氯醋酸，静止沉降30分钟后，用离心机以10000r/min的转速离心7.5min，取上清液5ml注入干燥的凯氏瓶中，加入25ml三氯乙酸标准溶液进行肽沉淀消化，混合液震荡，静置10分钟，在4000r/min下离心20min，取上清液，得到所述牙膏的卵黄生物蛋白提取成分溶液；
(2)利用高效液相色谱法对所述的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行检测：在流动相中加入少量的三氟乙酸改善出峰效果，以甲醇-kh2po4为流动相，并设定各个流动相的不同洗脱条件进行全波长扫描，设定柱温为30℃，进样量10ul，根据出图情况来确定卵黄生物蛋白的组份分子量。
实施例3：一种生物蛋白抑菌牙膏，主要包括以下成分：卵黄生物蛋白1.5％、植物提取物0.8％、纳米活性炭20％、植酸钠2％、磷酸氢钙5％、粘结剂1.2％、发泡剂3％、甜味剂0.4％、防腐剂0.09％、余量为去离子水；所述卵黄生物蛋白是对抗变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌五种病菌的复合抗体。也可以根据需要防治的其他口腔疾病或呼吸道疾病对所含的抗体种类进行增减调整。
其中，所述卵黄生物蛋白的制备方法为：
s1：选择培养出变形链球茵、远缘链球菌、流感病毒、肺炎型支原体、肺炎杆菌；
s2：用s1培养的致病菌种按适当比例混合，一般为等比例；然后按1:1比例加入等量的福氏佐剂；再用高速匀浆器以30000rpm高速匀化制备成复合抗原；
s3：用所述复合抗原对产蛋鸵鸟进行注射，检取鸵鸟所生的免疫蛋，分离抽提制得所述卵黄生物蛋白；所述s3分离抽提制得所述卵黄生物蛋白的具体操作方法为：用蛋黄筛取出免疫蛋的蛋黄，搅打均匀；按1:7的体积比加入灭菌蒸馏水稀释混匀；调ph值至5.2；加入浓度为3％海藻酸钠至终浓度为2.2‰，搅拌直至出现浑浊沉淀；加入浓度为1.5％的cacl2液至终浓度为1.2‰，搅拌均匀；置于5℃条件下静置20小时，然后虹吸收取上清，得到所述卵黄生物蛋白。所述的植物提取物为玉米花粉提取物，其制备步骤为：将玉米花粉，加入8倍体积去离子水，超声辅助加热到90℃进行水提，离心分离上清液后，沉淀物重复提取两次，合并所有的上清液，减压浓缩至2g花粉/ml，给所述的浓缩物中缓慢加入质量浓度为75％的乙醇至沉淀不再产生，离心去沉淀，取上清液减压浓缩获得浸膏，给浸膏中加入质量浓度为45％的甲醇搅拌至恰好完全溶解，缓慢减压浓缩回收甲醇后并干燥得到的淡黄色粉末即为玉米花粉提取物。所述的粘结剂为黄原胶。所述的发泡剂为月桂醇硫酸酯钠。所述的甜味剂为三氯蔗糖，是以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍，具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点，是目前最优秀的功能性甜味剂之一。
其中，所述的防腐剂为苯甲酸钠，是一种食品型防腐剂，健康无毒害。所述的牙膏的制备方法为：将所述重量比例的粘结剂、发泡剂、植酸钠、磷酸氢钙搅拌混合，得到混合物a，将甜味剂、防腐剂按照所述的重量比例在去离子水中混合搅拌均匀得到混合物b，将所述重量比例的卵黄生物蛋白、植物提取物、纳米活性炭混合搅拌均匀得到混合物c，然后打开制膏机的真空系统，将真空度抽至-0.3mpa，分别加入混合物a、b，同时开动搅拌器，加完混合物a、b物料后将真空度抽至-0.9mpa，开始导入混合物c，直到将混合物c的物料完全进完，在真空度为-0.95mpa下搅拌60分钟，打开制膏机的常压阀门，待制膏机的气体全部放出后，把制膏机内的膏体导出后分装，即得到所述的生物蛋白抑菌牙膏。
一种生物蛋白抑菌牙膏的检测方法，所述的检测方法为牙膏中卵黄生物蛋白组分分子量的检测，具体的检测方法包括以下步骤：
(1)样品溶液配制：
a.准确称取0.68045gkh2po4，然后用适量的双蒸水溶解，用100ml容量瓶定容至刻度线,充分溶解后即制得浓度为0.05mol/l的kh2po4溶液；
b.120ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液的配制：准确称取0.0120g的卵黄生物蛋白，用适量双蒸水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度线，既得浓度为160ug/ml的标准卵黄生物蛋白溶液；
c.精密称取2g左右牙膏样品，加入小烧杯中使用不含氨的蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌，定容至100ml容量瓶中，取10ml注入比色管中，再加入10ml的10％三氯醋酸，静止沉降30分钟后，用离心机以10000r/min的转速离心10min，取上清液5ml注入干燥的凯氏瓶中，加入25ml三氯乙酸标准溶液进行肽沉淀消化，混合液震荡，静置10分钟，在4000r/min下离心20min，取上清液，得到所述牙膏的卵黄生物蛋白提取成分溶液；
(2)利用高效液相色谱法对所述的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行检测：在流动相中加入少量的三氟乙酸改善出峰效果，以甲醇-kh2po4为流动相，并设定各个流动相的不同洗脱条件进行全波长扫描，设定柱温为30℃，进样量10ul，根据出图情况来确定卵黄生物蛋白的组份分子量。
实施例4：利用高效液相色谱法对所述的实施例2制备的牙膏中卵黄生物蛋白的组份分子量的分布进行分析。应用agilent1100型高效液相色谱(美国agilent公司)系统，使用c18反相色谱柱，对流动相、洗脱方式、洗脱时间、色谱条件进行探索，使用甲醇、kh2po4为流动相、0.6ml/min流速、10min洗脱时间，得到很好的分离效果。该方法简便快速且灵敏度高，结果的准确性好。
1实验材料
1.1仪器与药品
agilent1100型高效液相色谱(美国agilent公司)系统，手动进样系统；真空透膜脱气；高稳定性二元泵；二极管阵列及示差检测器；柱温箱：低于环境10-80℃，±0.15℃。甲醇为色谱纯，kh2po4为分析纯。
1.2色谱条件色谱柱为c18；流动相为甲醇：kh2po4＝50:50，柱温为30℃；检测波长为254nm；流速为0.6ml/min。
2.根据其出图的效果，得到流动相为甲醇：kh2po4＝50:50，波长为254nm时出图的效果最好，在相同的流动相条件下，波长为230nm时出的色谱图也比较好，但是其谱图的稳定性没有254nm的好。故本实验选择的是流动相为甲醇∶kh2po4＝50:50，波长为254nm的色谱条件。以甲醇-kh2po4为流动相时在不同的洗脱条件下得到的色谱图如图1所示。
最后说明：采用上述技术方案是为了便于理解本发明的实施例，本发明还可以有其他实施例，本发明的保护范围并不限于此。在不背离本发明精神和实质的情况下，所属技术领域的技术人员当可根据本发明做出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都属于本发明的权利要求的保护范围。