一种NADH复方组合物及其制剂和应用的制作方法

本发明涉及生物医药和保健品技术领域，特别涉及nadh在医药保健领域中的新制剂和新用途。

背景技术：

nadh是还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide)的缩写形式，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是存在于包括人类细胞在内的所有活细胞中的一种生理物质，对身体无副作用，这种物质是很多可催化氧化—还原反应的酶的辅助因子，被称为辅酶i。

nadh在生物体内产生于糖酵解和呼吸作用的柠檬酸循环中，在酶促反应中起递氢体的作用，其参与细胞物质代谢、能量合成、细胞dna修复等多种生理活动，是线粒体中能量产生链中的控制标志物。nadh最重要的作用是对细胞呼吸的驱动力，葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的atp是十分少的，而代谢产生的nadh经由一个电子传递的氧化磷酸反应可产生大量的atp，从而满足生物体的能量需要。

nadh的用途非常广泛，可以用于化工催化反应、原料药生产、保健品行业、化妆品行业等。目前关于nadh在医药和保健品领域中的应用的报道已经屡见不鲜，如，用于抗衰老、防治慢性病等，但是却未见关于nadh应用于减肥方面的报道。

据世卫组织统计：全球20岁及以上的成年人中有超过14亿人超重；超重的成年人中，2亿多男性和近3亿女性为肥胖；总而言之，全球成人中10％以上为肥胖人口。另外，44％的糖尿病负担、23％的缺血性心脏病负担以及7％～41％的某些癌症负担可归因于超重和肥胖。据统计，每年至少有280万成人死于超重或者肥胖，超重和肥胖如今已成为全球引起死亡的第五大风险。

2016年，英国著名医学杂志《柳叶刀》发表全球成年人体重调查报告，调查发现全球成人肥胖人口已经超过瘦子，而中国超越美国，成为全球肥胖人口最多的国家。其中，中国男性肥胖人数4320万人，女性肥胖人数4640万人，中国肥胖人群绝对数量达到世界第一。

针对超重和肥胖问题，虽然国内外投入了大量的研发力量，但因研发难度较大，目前经药监局批准上市的减肥药物屈指可数。但这些屈指可数的药物仍然存在以下两方面问题：1、给药需伴有与体重相关的疾病，如高血压、2-型糖尿病或高脂血症；2、长期服用会出现不同程度的头疼、头晕、疲劳、恶心、口干的副作用，停药后还会有反弹。

而随着健康绿色生活理念的流行，越来越多的人对天然的减肥瘦身产品趋之若鹜，其中，以左旋肉碱的减肥产品尤甚。左旋肉碱因其来源于牛肉、猪肉等红色肉类、对人体无毒副作用，深受人们的青睐，如今已是风靡全球。

左旋肉碱(l-carnitine)，又称l-肉碱、l－肉毒碱、维生素bt，或音译卡尼丁，化学名称β－羟基γ－三甲铵丁酸，是一种促使脂肪转化为能量的类氨基酸。左旋肉碱用作减肥产品具有三大特点：(1)只减脂肪不减水分；(2)使运动减肥的效果加倍；(3)最安全健康的减肥营养补充品。目前，左旋肉碱已应用在于医药、保健品和食品等领域，并已被瑞士、法国、美国和世界卫生组织规定为法定的多用营养剂，我国食品添加剂卫生标准gb2960-1999规定了左旋肉碱酒石酸盐为食品营养强化剂，可应用于咀嚼片、软饮、胶囊、乳粉及乳饮料等。

左旋肉碱在脂肪代谢中的作用已经被证实，即扮演着“脂肪搬运工”的角色。具体来说，脂肪被氧化分解的场所在线粒体内，脂肪如果不进入线粒体内，不管如何锻炼、如何节食，都不能被消耗掉。脂肪要进入线粒体内必须先穿越线粒体膜这个障碍，而穿越这个障碍必须依赖于左旋肉碱这个载体的运输功能。如果把脂肪比作煤炭，线粒体比作锅炉，那么左旋肉碱就相当于是铁铲，它把煤炭(脂肪)送进锅炉(线粒体)中燃烧。

通常，人们每天从膳食中摄入的左旋肉碱不到50毫克，而为使身体达到理想的健康状态，普通成人每日应摄入不少于500毫克的左旋肉碱，肥胖人群和素食主义者，特别是女人，则需要更多，所以就需要在膳食之外额外补充左旋肉碱以满足保持理想身材的需要。但是研究发现，尽管人们为减肥服用的左旋肉碱多达1～3g，可是却没有在肌肉中发现左旋肉碱含量有明显的上升，不能使产品的作用最大化，导致左旋肉碱的绝对生物利用度仅为15.9±4.9％，减肥效果大打折扣。

技术实现要素：

针对上述背景技术中提到的目前市场上的左旋肉碱减肥产品的生物利用度低、减肥效果大打折扣的技术问题，本发明的目的在于开发nadh在减肥方面的新用途，以期获得一种新的减肥产品，以解决左旋肉碱减肥产品的上述不足。

为实现上述目的，发明人进行了长期大量的实验研究。脂肪的代谢过程包括如下两个阶段，第一阶段：脂肪酸被左旋肉碱从线粒体外运送到线粒体内；第二阶段：脂肪酸在线粒体内进行β-氧化分解并产生能量。发明人研究发现，脂肪代谢的第二阶段需要辅酶nadh的参与，当体内nadh匮乏时，便会阻碍脂肪的代谢。服用左旋肉碱并增强运动，确实可以让脂肪酸更多地进入线粒体进行氧化，同时人体也会自我调节产生更多的nadh来加速氧化，但这对于要减掉足够多的脂肪来说是远远不够的，因为nadh在体内的合成不会在短时间内增加很多。这样就导致运送到线粒体内的脂肪酸无法得到及时消耗，从而抑制了脂肪酸被继续运送到线粒体内，人体便会自我调节将多余的左旋肉碱代谢掉，这也就是服用了很多左旋肉碱却没有在肌肉中发现左旋肉碱含量明显上升的原因所在。

基于发明人的上述研究，本发明提供了一种nadh复方组合物，所述组合物包含如下重量份组分：nadh或其生理可接受盐以及左旋肉碱或其生理可接受盐。nadh和左旋肉碱的生理可接受盐包括所有已知的生理可接受酸性和碱性成盐物质，其中较为优选的是nadh钠盐和左旋肉碱酒石酸盐。

优选地，所述组合物包含如下重量份组分：nadh或其生理可接受盐1～10％、左旋肉碱或其生理可接受盐1～10％、油相5～50％、乳化剂20～70％、助乳化剂0～50％。

优选地，所述油相选自大豆油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、玉米油、蓖麻油、辛酸/癸酸甘油三酯、甘油单油酸酯、油酸、橄榄油、麻油、花生油和杏仁油中的至少一种。

优选地，所述乳化剂为非离子型表面活性剂。

更优选地，所述乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙二醇硬脂酸酯-15、油酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇辛基苯基醚、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、泊洛沙姆188、吐温-80、液态卵磷脂、月桂酸蔗糖酯、棕榈酸蔗糖酯、硬脂酸蔗糖酯、月桂酸聚乙二醇甘油酯和甘油聚乙二醇-75-硬脂酸酯中的至少一种。

优选地，所述助乳化剂选自乙醇、丙二醇、聚乙二醇200、聚乙二醇400、异丙醇、1，2-丙二醇、正丁醇、二乙二醇单乙基醚和碳酸丙二酯中的至少一种。

优选地，上述nadh复方组合物采用如下方法制备而成：称取处方量的油相、乳化剂和助乳化剂于西林瓶中，加入处方量的nadh或其生理可接受盐混合均匀后，得一澄清液；再加入处方量的左旋肉碱或其生理可接受盐，37℃下充分搅拌1h使其溶解完全，即得。该nadh复方组合物可直接填充于软胶囊中供口服，也可分散在载体材料等药用辅料中，压制成片剂使用，或者添加缓释材料制备成缓释制剂。

本发明还提供了一种nadh复方口服制剂，所述口服制剂包含本发明提供的上述nadh复方组合物，该口服制剂优选为片剂或者胶囊剂。

优选地，上述口服制剂除了包含上述nadh复方组合物之外，还包含药用辅料，所述药用辅料包含如下重量份组分：吸附剂10～70％、稀释剂10～80％、粘合剂0～10％、崩解剂5～10％、矫味剂0～3％和润滑剂0.5～4％；所述药用辅料与所述nadh复方组合物的重量比为20:1～5:2。

优选地，所述吸附剂选自无水氯化钙、磷酸钙、碳酸钙、碳酸镁、氧化镁微粉硅胶、微晶纤维素、乳糖、氢氧化铝凝胶粉、氯化钠、预胶化淀粉、蔗糖粉、葡萄糖粉、甘露醇、山梨醇淀粉、环糊精、碳酸钠、碳酸氢钠、硫酸钙、聚维酮、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000中的至少一种。

优选地，所述稀释剂选自微晶纤维素、磷酸氢钙、乳糖、淀粉、糊精、甘露醇、葡萄糖粉、蔗糖粉和山梨醇中的至少一种。

优选地，所述粘合剂选自聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、各种浓度的乙醇溶液和水中的至少一种。

优选地，所述崩解剂选自交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素和部分预胶化淀粉中的至少一种。

优选地，所述矫味剂选自甜菊素、阿司帕坦、枸橼酸、食用香精、乳糖、葡萄糖、蔗糖和甘露醇中的至少一种。

优选地，所述润滑剂选自微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉和硬脂富马酸钠中的至少一种。

优选地，上述nadh复方口服制剂可采用如下1至3任一项所述的方法制备而成：

1、按配比分别称取上述nadh复方组合物和各种药用辅料，将nadh复方组合物用吸附剂吸附后，添加稀释剂、粘合剂、矫味剂以及部分崩解剂制软材，18目或20目筛制粒，烘干，制得干颗粒；再将干颗粒以18目或20目筛整粒，加入润滑剂和剩余的崩解剂，混合均匀压片，即得nadh复方口服片剂；

2、按配比分别称取上述nadh复方组合物和各种药用辅料，将nadh复方组合物用吸附剂吸附后，与其余药用辅料混合均匀，直接压片，即得nadh复方口服片剂；

3、按配比分别称取上述nadh复方组合物和各种药用辅料，将nadh复方组合物用吸附剂吸附后，添加其余药用辅料制软材，18目或20目筛制粒，烘干，制得干颗粒，再将干颗粒以14目或18目筛整粒，整粒后的颗粒填充于胶囊壳中，即得nadh复方口服胶囊剂。

本发明还提供了nadh在医药和保健品领域中的一种新用途，即，以nadh为主要成分的上述nadh复方组合物或者上述nadh复方口服制剂在制备减肥产品中的应用。

本发明还提供了一种新的瘦身方法，该方法具体是指：给予瘦身者生理上可接受量的上述nadh复方组合物，或者给予瘦身者生理上可接受量的上述nadh复方口服制剂。

有益效果：

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明首次将nadh与左旋肉碱联合使用，提供了一种新的减肥产品，该减肥产品弥补了脂肪代谢过程中单纯补充左旋肉碱时因nadh缺乏而造成左旋肉碱生物利用度较低的不足，较现有的单纯左旋肉碱减肥产品，其减肥效果大大增强。

2、本发明提供的由有效成分、油相、乳化剂和助乳化剂组成的nadh复方组合物，口服后在体内能自发乳化形成粒径在10～100nm范围内的微小乳滴，极大的增加了药物与介质及粘膜的接触面积，促进了药物的口服吸收，进一步增强了减肥效果，以及提高了左旋肉碱的生物利用度。

3、本发明提供的nadh复方组合物是一种热力学稳定的均一体系，使得nadh和左旋肉碱的稳定性明显提高，可实现产品的长效给药。

4、本发明提供的nadh复方组合物及其制剂的制备工艺简单易行，无需使用特殊的仪器或设备，成本低廉，节能环保。

附图说明

图1是本发明提供的nadh复方口服片剂的体外累积释放曲线图，其中，横坐标为释放时间(h)，纵坐标为累积释放百分率(％)；

图2是本发明提供的nadh复方口服片剂的电镜图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释，本发明并不局限于以下实施例。

以下实施例中所使用的原料及化学试剂均为市售商品。

实施例1

1、nadh复方口服片剂的配方如下：

2、制备方法如下：

按照上述配方称取各组分，将大豆油、聚氧乙烯蓖麻油以及nadh加入西林瓶中，混合均匀后得一澄清液，再加入左旋肉碱，37℃下充分搅拌1h使其溶解完全，即得nadh复方组合物溶液。

然后将nadh复方组合物溶液用乳糖进行吸附，待吸附完全后再加入微晶纤维素ph101、磷酸氢钙、甜菊素、羟丙甲基纤维素以及3/4量的低取代羟丙基纤维素，混合均匀后过20目筛制粒，烘干，再过18目筛整粒。所得颗粒可以填充于drcaps耐酸型胶囊中，即得nadh复方口服胶囊剂；或者加入硬脂富马酸钠和剩余的低取代羟丙基纤维素，混合均匀后压片，即得nadh复方口服片剂。

3、崩解度测定

取所制得的nadh复方口服片剂6片置于250ml烧杯中，加入20±1℃100ml的水轻轻振摇，记录全部通过二号筛网的时间为68±2s，将所得混悬液过0.45μm微孔滤膜滤去不溶性固体辅料后，测定粒径为32±3nm。

实施例2

1、nadh复方口服片剂的配方如下：

2、制备方法如下：

按照上述配方称取各组分，将油酸乙酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、二乙二醇单乙基醚以及nadh加入西林瓶中，混合均匀后得一澄清液，再加入左旋肉碱，37℃下充分搅拌1h使其溶解完全，即得nadh复方组合物溶液。

然后将nadh复方组合物溶液用无水氯化钙进行吸附，待吸附完全后再加入微晶纤维素ph101、阿司帕坦、聚乙烯吡咯烷酮以及1/2量的交联羧甲基纤维素钠，混合均匀后过20目筛制粒，烘干，再过18目筛整粒。所得颗粒可以填充于drcaps耐酸型胶囊中，即得nadh复方口服胶囊剂；或者加入硬脂酸镁和剩余的交联羧甲基纤维素钠，混合均匀后压片，即得nadh复方口服片剂。

3、崩解度测定

取所制得的nadh复方口服片剂6片置于250ml烧杯中，加入20±1℃100ml的水轻轻振摇，记录全部通过二号筛网的时间为70±2s，将所得混悬液过0.45μm微孔滤膜滤去不溶性固体辅料后，测定粒径为30±3nm。

实施例3

1、nadh复方口服片剂的配方如下：

2、制备方法如下：

按照上述配方称取各组分，将肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、聚氧乙烯蓖麻油以及nadh加入西林瓶中，混合均匀后得一澄清液，再加入左旋肉碱，37℃下充分搅拌1h使其溶解完全，即得nadh复方组合物溶液。

然后将nadh复方组合物溶液用预胶化淀粉进行吸附，待吸附完全后，再加入乳糖、微晶纤维素ph102、甜菊素、食用香精、70％乙醇以及1/2量的低取代羟丙基纤维素，混合均匀后过18目筛制粒，烘干，再过18目筛整粒。所得颗粒可以填充于drcaps耐酸型胶囊中，即得nadh复方口服胶囊剂；或者加入硬脂富马酸钠和剩余的低取代羟丙基纤维素，混合均匀后压片，即得nadh复方口服片剂。

3、崩解度测定

取所制得的nadh复方口服片剂6片置于250ml烧杯中，加入20±1℃100ml的水轻轻振摇，记录全部通过二号筛网的时间为65±2s，将所得混悬液过0.45μm微孔滤膜滤去不溶性固体辅料后，测定粒径为27±3nm。

实施例4

1、nadh复方口服片剂的配方如下：

2、制备方法如下：

按照上述配方称取各组分，将肉豆蔻酸异丙酯、聚氧乙烯蓖麻油以及nadh加入西林瓶中，混合均匀后得一澄清液，再加入左旋肉碱，37℃下充分搅拌1h使其溶解完全，即得nadh复方组合物溶液。

然后将nadh复方组合物溶液用乳糖进行吸附，待吸附完全后，再加入微晶纤维素、阿司帕坦、食用香精、70％乙醇以及1/2量的交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀后过18目筛制粒，烘干，再过18目筛整粒。所得颗粒可以填充于drcaps耐酸型胶囊中，即得nadh复方口服胶囊剂；或者加入硬脂酸镁和剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀后压片，即得nadh复方口服片剂。

3、崩解度测定

取所制得的nadh复方口服片剂6片置于250ml烧杯中，加入20±1℃100ml的水轻轻振摇，记录全部通过二号筛网的时间为57±2s，将所得混悬液过0.42μm微孔滤膜滤去不溶性固体辅料后，测定粒径为25±1nm。

实施例5

小鼠药理评价对比实验研究

实验对象：

选取50只雄性小鼠，6周龄，实验开始前基础饲料喂养两周，初体重为26±2g。

小鼠分组：

将所有实验小组随机分成5组，每组10只，组别如下，

①肥胖实验1组；②肥胖实验2组；③肥胖对照组；

④肥胖空白组；⑤正常空白组

小鼠模型建立：

笼养，每5只1笼；环境温度22±2℃，湿度45～65％；光灯照明12h交替，小鼠自由进食和饮水；其中，正常空白组喂养普通饲料，其余4组喂养高脂饲料；每周2次记录体重变化；饲养过程持续6周，建立模型。

给药方式：

①组每天灌胃给予实施例1制备得到的nadh复方组合物溶液一次；

②组每天灌胃给予实施例1中nadh与左旋肉碱的混合物(不含其它成分)一次；

③组每天灌胃给予左旋肉碱一次；

①组、②组和③组的每次给药量按左旋肉碱计为50mg；

期间5组小鼠均喂养普通饲料，自由饮食，持续观察4周。

实验结果：

实验结束后，称量小鼠体重后解剖小鼠，取肾脏周围以及睾丸周围的脂肪、肝脏，称重，计算每组小鼠的平均体重增长率(体重增长率％＝体重增量/实验初体重*100)和平均体脂比(体脂比％＝(肾脏周围脂肪重+睾丸周围脂肪重)/实验末体重*100)，实验结果如表1所示。

表1

实施例6

体外释放度检测

分别取实施例1至实施例4制备得到的nadh复方口服片剂，在37±0.1℃、ph1.0的酸性释放介质中，以转速100rpm，分别于1小时、3小时、6小时、8小时、12小时取样，用高效液相色谱法计算累积释放百分比，以释放时间(h)为横坐标，累积释放百分率(％)为纵坐标，绘制释放曲线如图1所示。

实施例7

电镜检测

取实施例1制备得到的nadh复方口服片剂置于100ml纯化水中，用玻璃棒搅拌5分钟，然后取上清液以5000rpm离心处理，得到具有乳光的上清液，使用电镜检查，电镜图如图2所示。

实施例8

稳定性比较

将实施例1制备得到的nadh复方口服片剂和市售产品置于40℃、75％湿度的条件下考察稳定性，分别在0、1、2和3个月取样检测样品的有关物质，检测结果如表2所示。

表2