本发明属于医药与食品技术领域，具体涉及一种从黑木耳中提取的黑色素在保肝产品中的应用。
背景技术：
黑色素(melanin)是由吲哚或酚类化合物氧化聚合而成的非均质高分子化合物，一般呈黑色、褐色或者棕色，广泛存在于动植物和微生物中具有广泛的生物学功能，天然黑色素具有滋补、养生、抗氧化和抗衰老等方面的功效，已引起人们的浓厚兴趣，但国内外对食用菌所产生的黑色素的研究鲜见报道。当前，由于环境污染和药物等的影响，与肝脏有关的疾病呈不断上升的趋势，重型肝炎、肝纤维化、肝硬化等在人群中占有很大的比例，肝脏疾病已成为严重威胁人类健康的首要根源之一。四氯化碳是经典的肝损伤毒物，经肝细胞代谢产生自由基，致使脂质过氧化，破坏肝细胞膜结构和功能的完整，引起肝细胞的损伤和坏死。
保肝药是指具有改善肝脏功能、促进肝细胞再生、增强肝脏解毒功能等作用的药物，用于临床肝病治疗。中国为乙肝的流行大国，脂肪肝的发病率也比较高。现有治疗乙肝、脂肪肝的保肝药物包括解毒类药物、促肝细胞再生类药物、利胆类药物、促进能量代谢类药物、促进蛋白质合成类药物以及中药制剂等。这些保肝药物或此或彼存在不同问题。如所述中药制剂也有一些不良反应，其中的五味子提取物虽然能有效地降低血清中碱性磷酸酶的水平，但是，停药后易反跳，对谷草转氨酶的作用不明显，有些慢性肝病患者服用后出现谷草转氨酶的升高的现象。再有就是远期疗效差。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种从黑木耳中提取的黑色素在保肝产品中的应用。从黑木耳中提取黑色素，将其用于保肝药物或食品，对于病毒性肝炎、药物性肝损伤、酒精肝、脂肪肝的预防或者治疗具有明显效果。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
将黑木耳烘干后打磨成粉，用酸破坏子实体中的蛋白质，再通过碱性溶液沉淀，收集沉淀得到黑色素粗提物，再进行纯化，所得到的黑色素用于保肝产品中。
具体的，将黑木耳烘干后打磨成粉，将所得黑木耳粉末于盐酸中60℃下水浴1小时，然后离心取沉淀，再加入氢氧化钠溶液超声1小时后离心取上清液，将上清液调至pH为1.5于80℃水浴12小时，离心取沉淀；将沉淀用去离子水洗4次，得到黑色素粗提物；将所得黑色素粗提物再依次用乙醇、乙酸乙酯、丙酮、超纯水洗涤，烘干沉淀后放置于-20℃保存备用，得到黑色素纯品，将纯化后的黑色素用于保肝产品中。
所述的保肝产品包括保肝药物或保肝食品。
所述的保肝产品中，其中所含有的从黑木耳中提取的黑色素成分占保肝产品的重量百分比为0.1~100%。
所述的保肝药物，当其中所含有的从黑木耳中提取的黑色素成分占保肝药物的重量百分比小于100%时，其他成分为其他保肝成分和辅料，所述其他保肝成分包括联苯双酯，所述辅料包括食用淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、聚乙二醇。
所述的保肝药物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、微囊剂、酒剂、糖浆剂、口服液；当剂型为微囊剂时，有效保肝成分（黑色素）占保肝药物的重量百分比例为100%。
本发明的有益效果在于：
本发明将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝产品中，有效保肝成分黑色素对于病毒性肝炎、药物性肝损伤、酒精肝、脂肪肝的预防或者治疗具有明显效果。该效果能够由以下动物实验表明，该实验反应了本发明之黑木耳黑色素对四氯化碳（CCl4）肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的影响，以及肝匀浆中超氧化物歧化酶和丙二醛的影响。实验过程如下：
将40只小鼠随机分为五组，每组10只，即阳性对照组、阴性对照组、模型组、黑色素组。阴性对照组、无菌水，阳性对照组300mg/kg，给药组100mg/kg。适应性喂养一周后，采用灌胃给药，每天给药一次，连续给药七天。于末次给药后，禁食不禁水后，小鼠摘眼球取血，离心后，分离血清待测。相应时间脱颈椎处死后，迅速在肝脏左叶同一部位肝组织约放入冰冷的生理盐水中反复漂洗至无血色，用滤纸拭干，称重，用匀浆液和匀浆器制备肝组织匀浆液，离心取上清，检测各项指标。
1. 黑色素对实验动物体重的影响
表1 黑色素对实验小鼠体重的影响
从表1 可以看出在实验的过程中，空白组和给药组没有显著性差异，说明从从黑木耳中提取的黑色素无毒，可食用。
2. SOD含量
表2 肝组织SOD含量
由表2可知，与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中SOD活性明显降低，具有极显著的统计学意义，表明损伤引起了小鼠肝功能的下降，造模成功。阳性对照组和黑色素给药组均可有效的提高肝组织中SOD的活力。
3. MDA含量
丙二醛(MDA)：生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标，可通过MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度。
表3 肝组织MDA含量
由表3可知，与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中MDA活性明显升高，具有极显著的统计学意义，表明损伤引起了小鼠肝功能的下降，造模成功。阳性对照组和黑色素给药组均可有效的抑制肝组织中MDA的活力。
4. ALT含量
ALT(谷丙转氨酶）升高是肝脏功能出现问题的一个重要指标。在常见的因素里，各类肝炎都可以引起ALT升高，这是由于肝脏受到破坏所造成的。谷丙转氨酶主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。因此，谷丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最明显的指标。
表4 血清ALT含量
由表4可见：与正常对照组比较，模型组小鼠血清活性明显升高，表明损伤引起了小鼠肝功能的下降，造模成功。阳性对照组和黑色素组均可有效的抑制血清活性的升高。与模型组比较，阳性对照组小鼠血清活性极显著降低，阳性对照药物有效。黑色素组小鼠血清活性明显低于模型组，具有显著的统计学意义提示黑色素对引起的小鼠急性损伤有显著的保护作用。
5. AST 含量
AST（谷草转氨酶）它是医学临床上肝功能检查的指标，用来判断肝脏是否收到损伤。肝内的谷草转氨酶有两种同工酶，分别存在于肝脏细胞线粒体(mAST)和胞浆内(sAST)，在肝细胞轻度病变时，仅sAST释入血，而病变严重时mAST也会相继释放到血液中。故血清AST活性随肝细胞损伤的程度增高
表5 血清AST含量
由表5可知，与正常对照组比较，模型组小鼠血清活性明显升高，具有极显著的统计学意义，表明损伤引起了小鼠肝功能的下降，造模成功。阳性对照组和黑色素给药组均可有效的抑制血清活性的升高。与模型组比较，阳性对照组小鼠血清活性极显著降低阳性对照药物有效。黑色素组小鼠血清活性明显低于模型组，具有极显著的统计学意义提示黑色素对引起的小鼠损伤有显著的保护作用。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不仅仅限于这些实施例。
将黑木耳子实体烘干后打磨成粉，将所得黑木耳粉末于盐酸中60℃下水浴1小时，然后离心取沉淀，再加入氢氧化钠溶液超声1小时后离心取上清液，将上清液调至pH为1.5于80℃水浴12小时，离心取沉淀；将沉淀用去离子水洗4次，再依次通过乙醇、乙酸乙脂、丙酮、超纯水洗涤，烘干沉淀后放置于-20℃保存备用，得到较纯的黑色素。检测的其色素含量为2500-3000mg/kg。
实施例1
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成片剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为0.1%，其他成分为辅料。
实施例2
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成颗粒剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为50.0%，其他成分为辅料。
实施例3
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成胶囊剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为75%，其他成分为辅料。
实施例4
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成微囊剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为100%。
实施例5
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成滴丸；黑色素占保肝药物的重量百分比例为5%，其他成分为辅料。
实施例6
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成酒剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为25%，其他成分为辅料。
实施例7
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成口服液；黑色素占保肝药物的重量百分比例为20%，其他成分为辅料。
实施例8
将从黑木耳中提取的黑色素用于保肝药物中，制成糖浆剂；黑色素占保肝药物的重量百分比例为30%，其他成分为辅料。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。