本发明涉及了一种二氢杨梅素组合物在抗酒精性肝氧化损伤中的应用，属于天然产物加工
技术领域：
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背景技术：
：二氢杨梅素dmy是显齿蛇葡萄又称藤茶的主要活性成份之一，是民间的传统用药，曾被广泛用于治疗皮肤病、疖肿及骨髓炎、急性淋巴炎等感染性疾病，能抑制多种有害病菌。在25℃水中溶解度为4％，热水中溶解度更大；易溶于甲醇、乙醇及丙酮，极微溶于醋酸乙酯；难溶于氯仿、石油醚。林淑英等对dmy稳定性和影响因素进行了考察，证实二氢杨梅素溶液易发生氧化，稳定性较差，在不超过100℃，加热时间不超过30min以及酸性和中性条件可保持其化学结构稳定，而过渡态金属离子al3+、fe3+、cu2+等对dmy的氧化起诱导催化作用。dmy具有解酒、保肝护肝的作用。钟正贤等以小鼠为模型研究了dmy的保肝作用。研究表明:dmy能明显降低d-半乳糖胺、四氯化碳和异硫氰酸萘醋所引起的小鼠急性肝损伤时血清中ast活性、alt和t-bil含量，减弱了肝组织的变性和坏死，提高了溶血素含量和单核巨睡细胞的吞噬功能，证实dmy有降酶退黄保肝的功能作用。oshimay等人研究也证实dmy对抗半乳糖胺和四氯化碳所引起的肝损伤具有明显作用且有明显抗肝炎毒素作用。此外，dmy能够改善肝细胞损伤引起的血清乳酸脱氧酶活力的增加，抑制肝性m细胞胶原纤维的形成，从而起到保肝护肝的作用，大幅度降低乙醇对肝脏的损伤，使肝脏正常状态迅速得到恢复。乙醇在体内代谢物为乙酸，乙醛是造成肝脏损害的主要物质且易造成酒后头昏和恶醉。hase-k等研究发现dmy有很好的解酒功效；其解酒机理为dmy可以减轻体内乙醇中毒，减弱了乙醇对肝的损伤来保护肝脏。刘建新等用植物-显齿蛇葡萄所煮的水进行解酒实验。结果表明，随着所饮用的水煎剂浓度的加大，酒后人的步态不稳的百分率和跌倒反应的百分率均明显下降，由于显齿蛇葡萄植物中的主要有效成分是dmy，则证明dmy具有减轻体内乙醇中毒的作用，也证实dmy具有缓解酒醉和促进酒后醒酒的作用。二氧杨梅素由于其良好的生理活性有着广泛的应用。其结构中具有超离域度能使整个分子形成一个大7c键的共辄体系，分子中的氧原子具有较强的配位能力，酸性粉轻基和成络基团裁基都很容易和金属离子发生反应，其母核的这种空间结构有利于配合物的形成可作为金属离子良好的配合配体。目前已有少量二氢杨梅素的金属离子配合物的研究。郭清泉等制备二氧杨梅素-铁的配合物并研究其抗氧化性。结果表明二氧杨梅素易于铁发生配合作用且配合率较高，得到的配合物具有良好的抗氧化性。焦小利等将等摩尔量的二氧杨梅素和醋酸锌在碱性环境下制备二氧杨梅素-锌配合物，并釆用mtt，rt-pcr方法对二氢杨梅素-锌配合物体外抗肿瘤活性进行研究。mtt法检测配合物处理后的hela细胞活性结果发现细随着培养时间的延长，各组肿瘤细胞的存活率均呈下降趋势，且抑制作用随着配合物浓度增加及作用时间的延长，该抑制作用渐增强；rt-pcr显示caspase-3随配合物浓度增加而上调，bcl-2基因表达随配合物浓度增加而下调。结论:dmy-锌配合物显示了较强的抗肿瘤活性。铁皮石斛，又名铁吊兰、铁皮兰、黑节草，因表皮呈铁绿色而得名，具有独特的药用价值，具有滋阴补虚、生津润肺、健脾开胃、养肝明目、润肤、养颜，抗衰老滋阴清热，生津止渴的功效。临床研究表明，铁皮石斛不仅可以增强胰岛素活性，同时能显著降低血糖水平，使血正常；可直接刺激g细胞，使胃泌素分泌增加，血清胃泌素浓度增高，胃泌素刺激壁细胞，使胃酸分泌增加；可促进循环、扩张血管、降低血胆固醇和甘油三脂。黄芪，又名绵芪，其多糖有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。可以显著促进血清和肝脏蛋白质的更新。可增加脾脏蛋白质合成，并使脾脏细胞增生，胞浆内含大量粗面内质网。黄芪对糖代谢呈双向调节作用，能显著降低葡萄糖负荷后小鼠的血糖水平，对抗肾上腺素所致的血糖升高，又能对抗苯乙双胍所致的小鼠血糖降低。公开号为cn104127406a的中国专利公开了一种二氢杨梅素在制备肝脏细胞氧化损伤的抑制剂中的应用，将二氢杨梅素制成各种剂型后直接口服即可，二氢杨梅素片剂的制造方法为二氢杨梅素75克，淀粉25.95克溶解于150克水中，喷雾干燥制成二氢杨梅素微胶囊颗粒。将微胶囊粒与乳糖37.5克、交联羧甲基淀粉钠10.5克，硬脂酸镁1.05克混合，加入到三维运动混合机中，混合时间为15-20分钟，得到总混合物。然后直接压片共得到1000片，每片0.15克，二氢杨梅素含量75毫克/粒；二氢杨梅素胶囊的制造方法为二氢杨梅素30克,明胶18克，溶解于150克水中，喷雾干燥制成二氢杨梅素微胶囊颗粒。27.5克酪蛋白磷酸肽，23克d-甘露糖醇，1.5克硬脂酸镁和微胶囊颗粒放入多位混合机充分混合均匀，制成湿粒，过20目筛，干燥，整粒，用胶囊充填机分装制成胶囊；二氢杨梅素饮料的制造方法为37.5克二氢杨梅素，10克柠檬酸，435克蜂蜜，150克阿斯巴甜，香草5克香草香精，9362.5克水混合均匀，煮沸，无菌灌装饮料瓶即得。公开号为cn104666293a的中国专利公开了一种二氢杨梅素环糊精包合物及其制备方法，包括如下步骤：(1)将100-500份的二氢杨梅素溶解于100-39600份的溶剂a中，制成二氢杨梅素溶液；(2)将200-600份的环糊精和/或环糊精衍生物直接加入上述二氢杨梅素溶液和/或将200-600份的环糊精和/或环糊精衍生物溶解于100-39600份的溶剂b中，制成环糊精和/或环糊精衍生物溶液加入上述二氢杨梅素溶液；(3)用剪切机将混合溶液剪切，并用镜检有络合物形成时，则包接完成，然后用喷雾塔喷雾干燥，得粉末固体二氢杨梅素与环糊精和/或环糊精衍生物包合物。公开号为cn107007813a的中国专利公开了一种高效解酒护肝组合物，其制备方法和应用。所述组合物以重量份数280～390份的脱水显齿蛇葡萄叶、重量份数210～580份的枳椇子、重量份数140～300份的玉米低聚肽粉和重量份数90～130份的阿萨伊果速溶粉组成。其中，脱水显齿蛇葡萄叶经超声提取，提取物总黄酮含量≥35％、二氢杨梅素含量25～32％；枳椇子经乙醇热回流提取，提取物总黄酮含量≥8％。阿萨伊果速溶粉由阿萨伊果打浆、过滤除渣、滤液浓缩、添加辅料、混合干燥制成。公开号为cn101569614的中国专利公开了一种葛根素包衣缓释滴丸的方法，包括下述步骤：a、制备葛根素速释滴丸丸芯：聚乙二醇6000作为基质，将其与葛根素原料药粉末以重量比为：10∶1～3∶1混合，采用熔融法用滴丸机制备滴丸丸芯，熔融温度为70～90℃，药液保温温度为60～80℃；b、包衣：以丙酮∶无水乙醇＝95∶5v/v的混合溶液为溶剂，加入成膜剂，增塑剂、制孔剂，将其置于超声仪中超声溶解4～5h，超声条件为80w，即得包衣液；用包衣锅采用滚转包衣法对滴丸丸芯进行包衣，包衣温度40℃，包衣锅转速为每分钟30～50转，增重5％～10％，即得葛根素包衣缓释滴丸。公开号为cn1977975的中国专利公开了一种包合态的葛根素/环糊精组合物的制备方法，其步骤是：将β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精三者中的一种或其中任意两者或三者的混合物和1～5质量比纯水混合成混悬液或溶液，加入环糊精0.2～1.0摩尔比的葛根素，充分混合，加热60～80℃搅拌1小时，冷却、压滤，固体物减压干燥；或于50℃下减压除水，即得固体包合物。公开号为cn102934768a的中国专利公开了一种葛根素、松花粉和蜂胶复合片剂的制备方法，如下步骤：(1)主要原材料混合：按照上述的质量百分比称取蜂胶粉、破壁松花粉、葛根素混合均匀；(2)粘合剂制作：按照上述的质量百分比称取蔗糖和糊精，加入水，然后蔗糖、糊精煮成浓度为45％-55％的浆作为粘合剂；(3)湿法制粒：把上述的蜂胶粉、破壁松花粉、葛根素混合物和蔗糖与糊精制作的粘合剂进行混合，采用湿法制粒，干燥温度为65℃-75℃，整粒用12目筛，控制颗粒水分为≤5.0％，将制粒好的颗粒密封好待用；(4)片剂制作：按照上述的质量百分比称取羧甲基淀粉钠和微晶纤维素，把制粒后的颗粒与羧甲基淀粉钠、微晶纤维素，混合均匀，然后在压片机进行压片制得本发明葛根素、松花粉和蜂胶复合片剂。技术实现要素：为了更好的发挥二氢杨梅素和葛根素等黄酮类物质对肝损伤的修复作用，又降低其对胃肠刺激作用，以解决二氢杨梅素常温下溶解度差、生物利用率低、对光线、溶液的ph值及铁、铝等金属离子敏感、易氧化变质等缺点。采用包埋材料对其包接，达到提高二氢杨梅素的稳定性及生物利用率的目的。因此，本发明第一个目的是提供一种二氢杨梅素组合物在抗酒精性肝氧化损伤中的应用，该方法将葛根素与二氢杨梅素进行包接，形成葛根素与二氢杨梅素组合物，提高二氢杨梅素组合物对光、氧、溶液ph值、铁、铝等金属离子不稳定性及生物利用率。因此，本发明第一个目的是提供一种二氢杨梅素组合物产品的制备方法：取铁皮石斛多糖30～50份加入5～15倍重量的水，加入葛根素5～15份，加入二氢杨梅素20～35份，在搅拌混合时采用超声波去氧5～10min，真空干燥30～60min后，再加入黄芪多糖20～40份，超声波处理10～30min后，真空干燥后压片，再用常规肠溶片溶液进行包衣后采用真空干燥后包装保存备用，其中二氢杨梅素用0.5～6倍重量乙醇进行溶解。在一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：取铁皮石斛多糖40～50份加入5～15倍重量的水，加入葛根素10～15份，加入二氢杨梅素30～35份，在搅拌混合时采用超声波去氧5～10min，真空干燥30～50min后，再加入黄芪多糖30～40份，超声波处理20～30min后，真空干燥后压片，再用常规肠溶片溶液进行包衣后采用真空干燥后包装保存备用，其中二氢杨梅素用1～4倍重量乙醇进行溶解。在另一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：取铁皮石斛多糖45份加入10倍重量的水，加入葛根素15份，加入二氢杨梅素30份，在搅拌混合时采用超声波去氧10min，真空干燥30min后，再加入黄芪多糖35份，超声波处理25min后，真空干燥后压片，再用常规肠溶片溶液进行包衣后采用真空干燥后包装保存备用，其中二氢杨梅素用2倍重量乙醇进行溶解。本发明第二个目的是提供上述组合物产品的制备方法，其具体步骤如下：a、取铁皮石斛多糖加入水，加入葛根素得混合物ⅰ；b、取二氢杨梅素加入乙醇进行溶解，向其中加入混合物ⅰ，在搅拌混合时采用超声波去氧5～10min，真空干燥30min后得混合物ⅱ，其中二氢杨梅素用5倍重量乙醇进行溶解；c、向混合物ⅱ中加入黄芪多糖，超声波处理25min后，真空干燥后压成片得片状物；d、称取1000g丙烯酸树脂2号，50ml苯二甲酸二乙酯，100ml蓖麻油，50ml吐温-80，150g滑石粉，用无水乙醇加至5000ml，得混合物ⅲ；e、用混合物ⅲ对片状物进行包衣后采用真空干燥后包装保存备用。本发明第三个目的是提供一种铁皮石斛多糖和黄芪多糖的制备方法，其步骤包括：(1)粉碎干燥铁皮石斛或黄芪，加入80-90％乙醇水溶液，搅拌提取30～80min后，静置50～140min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀ⅰ。(2)向沉淀ⅰ中加入一定量的水，搅拌加热至70-85℃，保温30～80min后，5000rpm离心10～20min，得上清液，去沉淀ⅱ。(3)将上清液在50-65℃下减压浓缩至一定体积，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉10-20h，进行过滤，得滤渣即为铁皮石斛或黄芪多糖。在一个实施方案中，步骤(1)中所述80-90％乙醇水溶液的体积l与铁皮石斛或黄芪重量kg比为2～5：1。在一个实施方案中，步骤(2)中所述加入水量的体积l与铁皮石斛或黄芪重量kg比为2～6：1。在一个实施方案中，步骤(3)中所述一定体积是指原有体积的1/10-1/40。在一个实施方案中，步骤(3)中所述过滤：膜孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤一次。上述获得二氢杨梅素组合物产品可以直接用于抗酒精性肝氧化损伤或护肝中的应用。技术效果1、铁皮石斛多糖与黄芪多糖在乙醇的作用下，形成大量的孔状结构将二氢杨梅素和葛根素进行有效包埋，提高了二氢杨梅素和葛根素等黄酮类物质的利用率。2、通过肠溶片进行包埋，有效地防止了二氢杨梅素和葛根素在胃中发生反应，便于在小肠中的释放，通过铁皮石斛多糖与黄芪多糖作用不仅降低了对小肠的刺激，又增强了其产品的护肝效果。具体实施方式下面用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。实施例1：铁皮石斛多糖的制备粉碎干燥铁皮石斛100kg，加入90％乙醇水溶液250l，搅拌提取60min后，静置100min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀ⅰ。向沉淀ⅰ中加入350l水，搅拌加热至85℃，保温60min后，5000rpm离心20min，得上清液，去沉淀ⅱ。将上清液在55℃下减压浓缩至10l，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉16h，进行过滤，得滤渣即为铁皮石斛多糖。实施例2：黄芪多糖的制备粉碎干燥黄芪100kg，加入90％乙醇水溶液250l，搅拌提取60min后，静置100min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀ⅰ。向沉淀ⅰ中加入350l水，搅拌加热至85℃，保温60min后，5000rpm离心20min，得上清液，去沉淀ⅱ。将上清液在55℃下减压浓缩至10l，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉16h，进行过滤，得滤渣即为黄芪多糖。实施例3取铁皮石斛多糖4.5kg加入45kg水，加入葛根素1.5kg得混合物ⅰ。取3kg二氢杨梅素，用5l乙醇进行溶解后，加入到混合物ⅰ中，在搅拌混合时采用超声波去氧10min，真空干燥30min后，再加入黄芪多糖3.5kg，超声波处理25min后，真空干燥后压片，得片状物。称取1000g丙烯酸树脂2号，50ml苯二甲酸二乙酯，100ml蓖麻油，50ml吐温-80，150g滑石粉，用无水乙醇加至5000ml，得混合物ⅲ；用混合物ⅲ对片状物进行包衣后后采用真空干燥后包装保存备用。经检测，所获得片状物中二氢杨梅素包埋率达到86.56％，葛根素包埋率达到88.62％。对照实施例1取铁皮石斛多糖4.5kg加入45kg水，加入葛根素1.5kg，直接加入3kg二氢杨梅素粉末，在搅拌混合后再加入黄芪多糖3.5kg，超声波处理25min后，真空干燥后压片，得片状物。称取1000g丙烯酸树脂2号，50ml苯二甲酸二乙酯，100ml蓖麻油，50ml吐温-80，150g滑石粉，用无水乙醇加至5000ml，得混合物ⅲ；用混合物ⅲ对片状物进行包衣后后采用真空干燥后包装保存备用。经检测，所获得片状物中二氢杨梅素包埋率达到32.88％，葛根素包埋率达到60.27％。对照实施例2取铁皮石斛多糖4.5kg加入45kg水，加入葛根素1.5kg，直接加入3kg二氢杨梅素粉末，在搅拌混合时采用超声波去氧10min，真空干燥30min后，再加入黄芪多糖3.5kg，超声波处理25min后，真空干燥后压片，得片状物。称取1000g丙烯酸树脂2号，50ml苯二甲酸二乙酯，100ml蓖麻油，50ml吐温-80，150g滑石粉，用无水乙醇加至5000ml，得混合物ⅲ；用混合物ⅲ对片状物进行包衣后后采用真空干燥后包装保存备用。经检测，所获得片状物中二氢杨梅素包埋率达到43.71％，葛根素包埋率达到78.48％。对照实施例3取铁皮石斛多糖4.5kg加入45kg水，加入葛根素1.5kg得混合物ⅰ。取3kg二氢杨梅素，用5l乙醇进行溶解后，加入到混合物ⅰ中，放置10min后，再加入黄芪多糖3.5kg，超声波处理25min后，真空干燥后压片，得片状物。称取1000g丙烯酸树脂2号，50ml苯二甲酸二乙酯，100ml蓖麻油，50ml吐温-80，150g滑石粉，用无水乙醇加至5000ml，得混合物ⅲ；用混合物ⅲ对片状物进行包衣后后采用真空干燥后包装保存备用。经检测，所获得片状物中二氢杨梅素包埋率达到67.93％，葛根素包埋率达到83.47％。实施例4取各种产品1克，加入模拟小肠消化液30ml后进行室温放置实验，采用hplc法检测其溶液中二氢杨梅素和葛根素含量变化，其结果见表1和表2。表1.各种产品在不同时间内二氢杨梅素含量变化表表2.各种产品在不同时间内葛根素含量变化表实施例5：各种产品对小鼠酒精肝性肝损伤的修复效果nih小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，由湖南省动物实验中心提供，合格证号为湘动字第20163026号。实验动物环境：清洁级环境。实验室温度22-25℃，湿度55-65％。nih小鼠随机分成8组，每组10只。将用50度白酒持续灌胃，每次2ml/kg/只一个月，抽血化验检测是否达到中度酒精肝损伤程度，再用各种产品持续灌胃，以水为对照，每次1ml/kg/只一个月，取血化验检测，再杀死后取肝脏镜检，其结果情况见表3。表3.各种产品对肝损伤的修复效果表产品肝损伤的修复率％实施例111.53％实施例224.26％实施例385.68％对照实施例135.72％对照实施例250.45％对照实施例367.27当前第1页12