CYT387用于制备治疗神经胶质瘤的药物的应用的制作方法

本发明涉及cyt387用于制备治疗神经胶质瘤的药物的应用，属于医药领域。
背景技术：
胶质瘤亦称神经胶质细胞瘤，为中枢神经系统常见、发生于神经外胚层的肿瘤，是神经外科中最常见的神经肿瘤，包括多种发生于神经外胚层细胞的肿瘤，国内报告约占颅内肿的40～50％。根据瘤细胞的分化情况又分为：星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤等。其生长特点为浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，多数不局限于一个脑叶，向肭组织外呈指状深入破坏脑组织。janus激酶(jak)家族是一组酪氨酸激酶，且包括jak1、jak2、jak3、和tyk2。jak家族通过jak-stat(信号转导与转录活化因子)通路将细胞因子介导的信号传递至细胞中。janus激酶(jak)家族分别参与调控人类许多生理作用，包括先天性与适应性免疫功能，炎症反应，造血细胞分化与生长，组织生长以及胚胎发育等。momelotinib(cyt-387)是一个jak1/2抑制剂，对jak1和jak2的ic50分别达到llnm和18nm。有研究显示在细胞试验中，momelotinib(cyt-387)可以抑制红细胞集落和红白血细胞的生长，同时也可以有效抑制stat5的磷酸化。在小鼠模型中，momelotinib可以使小鼠的红细胞计数、白细胞计数和脾脏大小恢复正常。目前尚未有cyt387治疗神经胶质瘤的研究和报道。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供cyt387的新的医药用途。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：cyt387用于制备治疗神经胶质瘤的药物的应用。所述cyt387的cas编号为casno：1056634-68-4，化学结构式如下：所述的治疗包括但不限于抑制神经胶质瘤细胞的克隆形成、抑制神经胶质瘤细胞的增殖、抑制神经胶质瘤细胞的转移、或抑制神经胶质瘤细胞的迁移。所述神经胶质瘤包括但不限于星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤。一种用于治疗神经胶质瘤的药物组合物，其中含有有效量的cyt387和药学上可接受的载体或与其他抗癌药物的组合物。本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂或与其他抗癌药物联合用药。本发明的组合物可以制备成注射液、片剂和胶囊等。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射和口服两种形式给药，注射如静脉注射和肌肉注射，口服的剂型可以是片剂和胶囊剂。本发明的优点是：本发明首次发现cyt387能够有效抑制神经胶质瘤细胞的克隆形成、抑制胶质瘤细胞增殖、转移和细胞迁移，并提供了一种具有治疗神经胶质瘤潜力的药物。下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限定。凡依照本发明公开内容所进行的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。附图说明图1细胞克隆形成实验结果图2a为u251细胞mtt实验结果图2b为ln299细胞mtt实验结果图3a为细胞穿膜实验的结果照片图3b为u251细胞穿膜实验结果图3c为ln299细胞穿膜实验结果图4a为u251细胞划痕实验的结果照片图4b为为u251细胞划痕实验结果图4c为ln299细胞划痕实验的结果照片图4d为ln299细胞划痕实验结果具体实施方式试验材料u251细胞株：中国科学院上海细胞生物学研究所中国科学院细胞库ln229细胞株：中国科学院上海细胞生物学研究所中国科学院细胞库cyt387：mce公司购买，货号hy10961，10mm*1mlindmsomtt溶液：sigmadmso：二甲基亚砜transwell：天根生物公司完全培养基：购自gibco(mem培养基90％，普通血清10％，双抗100x，l-g100x，丙酮酸钠100x，非必需氨基酸100x。)dmem培养基：北京天润善达生物科技公司实施例1：细胞克隆形成实验一、方法将对数生长期的u251和ln229用0.25％胰酶消化成单细胞，并计数。种至6孔板，2×103个细胞/孔，每孔中加入相应药物，37℃孵箱培养，每隔3天加一次药物。分别加入cyt387浓度分别为1μmol/l、2.5μmol/l，对照组不加药物。培养7天后，弃去培养基(dmem培养基)，pbs洗3次，加入4％多聚甲醛固定10min。pbs洗3次，加入0.1％的结晶紫染液染色15min。pbs洗去多余染液，待干燥后拍照。二、结果图1细胞克隆形成实验显示了cyt387可有效抑制胶质瘤细胞的克隆形成能力。实施例2：细胞mtt实验一、方法第一天：将对数生长期的u251和ln229用0.25％胰酶消化成单细胞，调整细胞悬液浓度至3×104/ml，向96孔板的每孔中加入100μl，晃匀，37℃孵箱培养。第二天：(1)细胞贴壁后，加入不同浓度的药物作为实验组，cyt387浓度分别为2.5μmol/l、5μmol/l，对照组(control)不加药物，使每孔终体积为150μl，每组设置3个复孔，记为0h。(2)称取0.025gmtt，溶于5mlpbs中，用0.22μm滤膜过滤，放4℃避光保存。(3)向0h的对照组细胞中，加入20μl/孔的mtt溶液，混匀后放入37℃孵箱孵育4h。(4)吸去孔内培养液，每孔加入150μldmso，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。利用酶标仪于490nm处测量各孔的吸光值。第3-5天：分别于24h、48h、72h，按步骤(3)(4)检测细胞增殖。二、结果表1：u251细胞mtt实验结果0h24h48h72hcontrol11.2514604351.7199654452.131709475cyt3872.5um11.2533985721.074090471.181806172cyt3875um11.282407981.0491739090.961202057表2：ln299细胞mtt试验结果0h24h48h72hcontrol11.408197132.0157047654.571721788cyt3872.5um11.3148600421.7780900092.278961619cyt3875um11.2787877651.3645228181.703004382图2a-图2b(纵坐标为相对增殖)细胞mtt实验显示了2.5μm和5μm的cyt387均可引起胶质瘤细胞死亡。cyt387抑制胶质瘤细胞增殖，在高浓度长时间作用下可能引起细胞死亡。实施例3：细胞穿膜实验一.方法将对数生长期的u251和ln229用0.25％胰酶消化成单细胞，并计数。取5×104个细胞/孔，加入200μl细胞悬浮液，轻弹离心管底，细胞重悬，加至transwell上室。在下室中加入500μl完全培养基，并在transwell上室和下室中加入相应药物，cyt387浓度分别为1.0μmol/l、2.5μmol/l，对照组不加药物，37℃孵箱培养。培养20h后，小心吸去上下室中的培养基，将tranwell小室以pbs洗1次，加入4％多聚甲醛固定10min。pbs洗3次，在上下小室中加0.1％的结晶紫染液染色15min。pbs清洗小室3次，用湿棉签小心擦拭小室内部，将未穿膜的细胞去除干净。待小室干燥后，显微镜下拍照并计数。每种细胞均分为对照组(control，不加药物)、cyt3871μm组和cyt3872.5μm组，每组做做3个平行试验，结果取三组的平均值。二.结果表3：u251细胞穿膜实验结果123meancontrol1279124910421190cyt3871μm1244100711161122.33cyt3872.5μm529442589520表4：ln299细胞穿膜实验结果123meancontrol1021119910811100.33cyt3871μm654589409550.67cyt3872.5μm14995108117.33图3a-图3c细胞穿膜实验显示了cyt387对胶质瘤细胞的转移能力具有抑制作用，并且具有浓度梯度依赖性。u251和ln229细胞系对cyt387的敏感性稍有不同，cyt387在1μm时即可抑制ln229细胞的转移，但此浓度对u251细胞的转移能力无明显影响；在2.5μm时对两种细胞的转移能力均有抑制作用。图3b和图3c的纵坐标为穿过细胞数(个)。实施例4：细胞划痕实验一.方法将对数生长期的u251和ln229用0.25％胰酶消化成单细胞，按90％的密度接种至6孔板，37℃孵箱培养。细胞贴壁并铺满孔板后，用200μl无菌枪头在每个孔中长满的单层细胞上迅速而轻轻地划1-2道痕，生理盐水冲洗2-3次，去掉脱落的细胞，更换无血清的培养基，并在不同孔中分别给予药物处理，cyt387浓度分别为1.0μmol/l、2.5μmol/l，对照组不加药物，显微镜观察并拍照，记为0h(0小时)。24h时观察并拍照记录划痕迁移情况，分析不同药物对细胞迁移能力的影响。每种细胞均分为空白对照组(control)、cyt3871μm组和cyt3872.5μm组，每组做做3个平行试验，结果取三组的平均值。二.结果表5：u251细胞划痕试验结果123meancontrol57.3244.0350.0750.47cyt3871μm39.4745.4350.2045.03cyt3872.5μm28.4830.0736.4231.66表6：ln299细胞划痕试验结果123meancontrol58.1059.2351.7556.36cyt3871μm46.2236.3439.6340.73cyt3872.5μm35.8735.8729.1033.61图4a-图4d细胞划痕实验显示了cyt387可有效抑制胶质瘤细胞迁移，并且具有浓度梯度依赖性。cyt387在低浓度(1μm)时对轻微抑制胶质瘤细胞的迁移，但并不是十分显著，随着浓度升高，cyt387抑制胶质瘤细胞迁移。图4b和图4d的纵坐标为侵袭范围。当前第1页12