7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯在制备治疗肝病药物的应用的制作方法

本发明属于单体化合物的用途技术领域，具体涉及一种7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯在制备治疗肝病药物中的用途。

背景技术

肝脏是人体中重要的代谢器官、解毒器官、消化器官和免疫防御器官，具有复杂多样的生理生化功能，是人体新陈代谢的枢纽。肝病是在肝脏中发生的急、慢性病变，是一种对机体危害性很大的疾病。常见的肝病包括：酒精肝、脂肪肝、病毒性肝炎、肝硬化、肝脓肿等，各类肝病是肝癌发生发展的使动因素。近年来各种肝脏疾病发病率呈逐年递增的趋势，保护肝脏健康备受大众关注。

临床常见的肝病多数属于慢性疾病，治疗周期长，存在反复性，需要长期服药。随着现代科学技术的不断发展，缩减了治疗肝脏疾病的化学合成药物的研发和上市周期，但由于肝病临床多样性和病理机制复杂性，化学合成药物易产生耐药性、药物失效及毒副作用等负面影响。中药天然化合物疗效确切，来源丰富，无明显毒副作用，疗程短见效快不易产生药物耐受性。目前，由中药天然单体化合物制备而成的保肝护肝药物较少，寻找开发一种保肝中药化合物，具有广阔的应用前景。

7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-2,4-二甲基-5-氧代-1,2,3,4,4a,5,6,10b-八氢苯并[f]-1-喹啉基-乙酸酯，[7-(2,2-dimethylbut-3-enamido)-2,4-dimethyl-5-oxo-1,2,3,4,4a,5,6,10b-octahydrobenzo[f]quinolin-1-ylacetate,dqa]，分子式为c23h30n2o4，相对分子量为398，分子结构如下所示。主要从药用植物红海榄气生根内生菌中提取分离制备。

目前尚无7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯用于保肝护肝方面的相关研究报道。

技术实现要素：

本发明的目的是解决上述现有技术中的问题，提供一种7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯在制备治疗肝病药物中的用途。7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对体外肝细胞损伤具有显著的保护作用，可用于制备保肝护肝的药物、食品或保健品；对体内肝脏组织器官损伤具有显著的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病的药物、食品或保健品，适于大规模推广，具有广阔的开发应用前景。

为了实现上述目的，本发明的有益效果具体如下：

1、本发明通过研究发现，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对体外肝细胞损伤具有显著的保护作用，能够显著降低alt值，可用于制备保肝护肝的药物、食品或保健品，还可用于制备肝细胞损伤保护的药物、食品或保健品；

2、本发明通过研究发现，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对体内肝脏组织器官损伤具有显著的修复作用，能够显著降低alt和ast值，改善肝脏组织病变，可用于制备治疗或预防肝脏疾病的药物、食品或保健品。

附图说明

图1是7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对ccl4诱导小鼠急性肝脏损伤病理组织切片图，其中a：正常对照组；b：ccl4模型对照组；c：联苯双酯阳性对照组；d：dqa高剂量组；e：dqa中剂量组；f：dqa低剂量组。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。

实施例17-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-2,4-二甲基-5-氧代-1,2,3,4,4a,5,6,10b-八氢苯并[f]-1-喹啉基-乙酸酯对ccl4诱导急性肝细胞损伤的保护作用实验。

试剂和药物：

联苯双酯（bdp）（北京协和药厂）；alt（谷丙转氨酶）检测试剂盒（南京建成生物技术有限公司）；ccl4（西陇科学股份有限公司、分析纯）；二甲基亚砜（西陇科学股份有限公司、分析纯）；dqa，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，由实验室从药用植物红海榄气生根内生菌中提取分离得到，纯度>98%(hplc)。

实验方法与结果：

1.肝细胞培养

取雄性昆明种小鼠，禁食24h，断头放血，无菌分离肝脏，称重，使用pbs缓冲液灌注冲洗肝脏至灰白色。将肝脏剪成组织碎块，使用玻璃组织匀浆器轻轻研碎，加入pbs缓冲液，1000rpm离心5min，去上清，加入10ml细胞培养液，制成肝细胞悬液。

2.建立ccl4诱导肝细胞损伤模型

取50μl上述肝细胞悬液接种于96孔板中，每个孔中加入30μl细胞培养液，以二甲基亚砜为助溶剂，分别加入不同浓度ccl4（1~16mmol/l），控制二甲基亚砜的终浓度为0.1%（体积分数），37℃条件分别诱导1h、2h、3h、4h，收集96孔板中的上清液检测alt值。根据检测结果，绘制ccl4诱导肝细胞损伤的量效和时效曲线，选择最优损伤浓度和损伤时间建立肝细胞损伤模型。

3.dqa对ccl4诱导肝细胞损伤的保护作用

取上述肝细胞悬液，设置为正常对照组、ccl4模型对照组、bdp阳性对照组、不同dqa给药剂量组，每组设置5个平行孔。ccl4模型组和给药剂量组加入4mmol/lccl4，同时向给药剂量组中加入不同浓度的dqa药物。37℃条件下孵育3h，2000rpm冷冻离心5min，收集肝细胞上清液检测alt值。结果如下：

与正常对照组比较：###表示p<0.001；与ccl4模型对照组比较：**表示p<0.01，***表示p<0.001。

表1结果表明，体外ccl4诱导肝细胞损伤后，细胞上清液中alt的活性显著升高，加入不同剂量dqa的实验组，上清液中alt值与ccl4模型对照组相比较，不同给药剂量均出现降低alt值的现象，高剂量组降低alt值效果最好。上述结果说明，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对ccl4诱导急性肝细胞损伤具有保护作用，可用于保肝护肝。

实施例27-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-2,4-二甲基-5-氧代-1,2,3,4,4a,5,6,10b-八氢苯并[f]-1-喹啉基-乙酸酯对体内ccl4诱导小鼠急性肝脏损伤的保护作用实验。

试剂和药物：

联苯双酯（bdp）（北京协和药厂）；alt（谷丙转氨酶）检测试剂盒和ast（谷草转氨酶）检测试剂盒（南京建成生物技术有限公司）；ccl4（西陇科学股份有限公司、分析纯）；羧甲基纤维素钠（西陇科学股份有限公司、分析纯）；橄榄油（金龙鱼牌特级橄榄油）；dqa，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，由实验室从药用植物红海榄气生根内生菌中提取分离得到，纯度>98%(hplc)。

昆明种小鼠，体重（25±2）g，雌雄兼用，湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

实验方法与结果：

取60只昆明种小鼠，随机分成6组，每组雌雄各半。分别设置为正常对照组、ccl4模型对照组、bdp阳性对照组、不同dqa给药剂量组。药品均使用0.8%的羧甲基纤维素钠制成混悬液，各给药剂量组按0.1ml/10g/d剂量灌胃给药，正常对照组和ccl4模型对照组给以相同体积的羧甲基纤维素钠，每天灌胃一次，连续7天。末次给药2h后，正常对照组腹腔注射橄榄油0.1ml/10g，其余5组注射0.1%ccl40.1ml/10g。禁食不禁水16h后，摘眼球取血，3500rpm离心分离15min，测定血清中alt和ast的活性，并摘取肝脏左叶同一部位，固定，包埋，切片，he染色，显微镜下观察组织形态学变化。结果如下：

与正常对照组比较：###表示p<0.001；与ccl4模型对照组比较：**表示p<0.01，***表示p<0.001。

表2结果表明，小鼠腹腔注射ccl4诱导急性肝损伤后，血清中alt和ast的活性显著升高，而小鼠预先给药dqa后，血清中alt和ast值与ccl4模型对照组相比较，不同给药剂量均出现降低血清中alt和ast值的现象，高剂量组降低alt和ast值效果最好。上述结果说明，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对ccl4诱导小鼠急性肝脏损伤具有保护作用。

肝脏病理组织形态学检查结果见图1，正常对照组小鼠肝脏细胞结构正常，大小均匀，排列整齐，分界清楚，细胞核完整，间质连接紧密，未见病理性变化；ccl4模型对照组小鼠肝脏体积增大，细胞呈现灶状坏死和点状坏死，排列紊乱，细胞变形，细胞核萎缩扭曲，细胞间隔增大，出现明显的空洞；bdp阳性对照组小鼠肝脏细胞出现明显的坏死细胞与新生细胞的分界线；dqa高剂量组小鼠肝脏细胞同样出现明显的坏死细胞与新生细胞的分界线，与阳性药物效果相同；dqa中剂量组和低剂量组小鼠肝脏细胞坏死程度均有不同程度的减轻。上述结果说明，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯对体内肝脏组织器官损伤具有显著的修复作用，可用于治疗或预防肝脏疾病。

从以上实施例可以看出，7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯在体内和体外实验中，均表现出良好的保肝护肝效果，可用于制备保肝药物、食品或保健品，还可用于制备肝细胞损伤保护的药物、食品或保健品；对肝脏组织器官损伤具有显著的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病的药物、食品或保健品。

本发明涉及的7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯来源于天然药用植物红海榄气生根内生菌，属于纯天然来源，安全可靠，毒副作用小，对多种原因引起的肝脏损伤均具有保护和防治作用。

综上，本发明涉及的7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-八氢苯喹啉乙酸酯，即7-(2,2-二甲基-3-丁烯酰胺基)-2,4-二甲基-5-氧代-1,2,3,4,4a,5,6,10b-八氢苯并[f]-1-喹啉基-乙酸酯对体外肝细胞损伤具有显著的保护作用，可用于制备保肝护肝的药物、食品或保健品；对体内肝脏组织器官损伤具有显著的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病的药物、食品或保健品，适于大规模推广，具有广阔的开发应用前景。

在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。