榴莲心皮萃取物于改善肌肉疲劳的用途的制作方法

本发明是关于一种榴莲心皮萃取物的用途，尤其是关于一种榴莲心皮萃取物用于改善肌肉疲劳，与调控相关基因表现的用途。

背景技术：

处于现代多元社会中，每个人都汲汲营营在工作岗位上努力，为了达成良好工作绩效，除须拥有优秀的专业能力外，更需具备健康的身体。因此，如何维持健康的体魄，已成为现代人所追求的重要目标。为维持身体健康，除了运动之外，最重要者莫过于饮食的选择，因此若能寻得具有多种营养成分，又能提升体力的食品，对于民众将是一大福祉。

在一般营养品市场，有诸多标榜提神成分的食品或饮品，但其中可能含有诸多不为人知的成分，或许有短暂提升体力、振奋精神的效果，但也可能存在着许多伤害身体的物质，所以选择一具有提升体力的有效成分但不会产生其他伤害效果的食品或组成分是一重要的选择课题。

榴莲(学名：duriozibethinus)，主要原产地在泰国、马来西亚、印度等，在东南亚被誉为「水果之王」，其独特的气味常让许多消费者无法接受品尝。榴莲的果实多是长椭圆形或圆形，颜色为绿色带棕色，果肉呈浅黄色，外壳遍布凸刺。榴莲果肉的营养成分相当多，除了含有多种维生素、脂肪、钙、铁、磷和醣等成分外，亦含有多种胺基酸以及膳食纤维，因此普遍认为具有增强免疫力、促进肠胃蠕动等功效。然而，榴莲除了果肉与坚硬的外壳之外，尚有将果肉区隔所形成的心皮部分，也就是榴莲白瓤，此部分目前尚未有任何成分或功效上的研究，其一般都会于取出果肉后随着外壳丢弃，因此，若能加以回收利用，或更进一步发现有利身体健康的成分，也可为环保与人类健康带来双重的获益。

技术实现要素：

本发明目的之一在于提供一种榴莲心皮萃取物于改善肌肉疲劳的应用，藉由榴莲心皮萃取物的作用，促进骨骼肌细胞的增生，并增加骨骼肌细胞的活性，提升体力与精力。

在本发明的一实施例中，该榴莲心皮萃取物可以水萃取所获得。在实施的一态样中，该榴莲心皮萃取物可于50～100℃下萃取所获得。

在本发明的一实施例中，该榴莲心皮萃取物的剂量可约为0.2～0.3mg/ml，较佳约为0.25mg/ml。

在本发明的一实施例中，该榴莲心皮萃取物可用以促进基因sod3或nadsyn1的表现。

在本发明的另一实施例中，该榴莲心皮萃取物可用以抑制基因parp1或parp2的表现。

在本发明的再一实施例中，该榴莲心皮萃取物可进一步添加于食品、保健食品或膳食补充品中。此外，该榴莲心皮萃取物亦可进一步用于医药组成物的制备。

以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1是本发明实施例的榴莲心皮萃取物对于骨骼肌细胞增生影响的结果比较图；

图2是本发明实施例的榴莲心皮萃取物对于骨骼肌细胞的细胞活性的影响结果比较图；

图3是本发明实施例的榴莲心皮萃取物对于parp1、parp2基因表现影响的结果图；

图4是本发明实施例的榴莲心皮萃取物对于sod3、nadsyn1基因表现影响的结果图。

具体实施方式

实施例1榴莲心皮萃取物的制备

取出适量榴莲心皮，加以清洗后备用。将榴莲心皮以2～10∶1～5的液固比，以水混合后加以均质化，之后于50～100℃下进行0.5至3小时的萃取反应。反应后，冷却至室温，再以400目筛网过滤。之后将过滤液于45～70℃下进行减压浓缩，浓缩后即可获得榴莲心皮萃取物(萃取液)。

实施例2骨骼肌细胞增生测试

准备小鼠骨骼肌肉细胞(c2c12，atcccrl-1772)，培养于细胞培养液[dulbecco′smodifiedeagle′smedium(dmem)、1％青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin，gibco)、10％胎牛血清(gibco)]中。准备96孔盘，于每孔中植入5000个细胞，之后于37℃下，培养2小时。

将测试分为四组进行，其中a组为空白组，b组为控制组，加入10％胎牛血清，c、d组则为加入浓度分别0.25mg/ml以及0.125mg/ml由实施例1所制备的榴莲心皮萃取物的试验组。本测试是以细胞增生elisa套组(roche，11647229001)进行试验。首先。每组于每孔中加入100μl的试验成分，并加上100μl浓度为100μm的brdu标记溶液(含5-bromo-2’-deoxyuridine)，于室温下反应24小时。

之后将上清液移除，于每孔中加入200μl的fixdenat溶液，于室温下作用30分钟。接着将fixdenat溶液移除，并以1xpbs(gibco)清洗一次，再于每孔中加入100μl的anti-brdu-pod作用溶液，置于室温下作用90分钟。之后将抗体共轭物移除后，以200～300μl清洗溶液清洗每孔，共三次。接着将清洗溶液移除后，于每孔中加入100μl的受质溶液，于室温下作用5～30分钟。最后，在每孔中加入25μl的1m硫酸，于300rpm震动下作用约1分钟。接着将反应后的溶液于450nm波长下测量其吸光值。量测出的数值以微软excel软件，利用studentt检定分析二数值间的统计显著性，其结果如图1所示。其中，与空白组相对照，*表示p值＜0.05，**表示p值＜0.01，***表示p值＜0.001。

由图1的结果可知，在含有本发明实施例0.25mg/ml浓度的榴莲心皮萃取物的作用下，所侦测的brdu量相较于控制组增加了32％，也就是骨骼肌细胞的数目增加了32％，因此可证明本发明实施例的榴莲心皮萃取物的确具有促进骨骼肌细胞增生的效果。

实施例3骨骼肌细胞粒线体活性测试

准备小鼠骨骼肌肉细胞(c2c12，atcccrl-1772)，培养于细胞培养液[dulbecco′smodifiedeagle′smedium(dmem)、1％青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin，gibco)、10％胎牛血清(gibco)]中。准备96孔盘，于每孔中植入5000个细胞，之后于37℃下，培养2小时。

将测试分为三组进行，其中a组为空白组，b、c组为加入0.25mg/ml由实施例1所制备的榴莲心皮萃取物的试验组，分别作用2与24小时。本测试的粒线体活性测试的实施方法，是将贴附于培养盘的细胞以胰蛋白酶(trypsin)切下，用培养基中和后离心去除上清液，以bd^tmmitoscreen(jc-1)粒线体特异性试剂进行染色15min，再以试剂所附的分析缓冲液(assaybuffer)清洗二次，用bdaccuric6plus流式细胞仪进行粒线体活性分析。

由图2的结果可知，在含有本发明实施例0.25mg/ml浓度的榴莲心皮萃取物的作用下，无论是作用2或24小时，粒线体活性相较于空白组皆大幅增加了约51至66％，显示本发明实施例的榴莲心皮萃取物可提升骨骼肌细胞的细胞活性，而具有提升肌耐力及精力的效果。

实施例4粒线体活性相关基因表现的测试

准备小鼠骨骼肌肉细胞(c2c12，atcccrl-1772)，培养于细胞培养液[dulbecco′smodifiedeagle′smedium(dmem)、1％青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin，gibco)、10％胎牛血清(gibco)]中。将测试分为控制组以及试验组，试验组中是加入作用浓度为0.125mg/ml的实施例1所制备的榴莲心皮萃取物，并分别于37℃下培养6、24小时后进行检测，以分析与粒线体活性相关基因的表现状况，特别是关于调控nad+的基因。

将上述各组反应后的细胞回收，以rna萃取套组(geneaid)萃取其rna，并以反转录酶(superscriptiiireversetranscripatase，invitrogen)将该些rna反转录为cdna。之后利用实时聚合酶链锁反应系统(abisteponeplusreal-timepcrsystem)，分别利用表1所列引物进行qpcr(kapacybrfastqpcrkits，kapabiosystems)，以定量以下基因的表现：parp1、parp2、sod3与nadsyn1(以actb基因的表现做为内部控制组)。基因表现相对定量分析是采用2^-δδct法，并利用excel软件以studentt检定分析数值间的统计显著性。关于基因表现的结果如图3与图4所示。其中，*表示p值＜0.05，**表示p值＜0.01，***表示p值＜0.001。

表1

由图3的结果可知，在含有本发明实施例榴莲心皮萃取物的作用下，可降低约30～50％的parp1基因表现量，以及降低约40％的parp2基因表现量。由于parp1与parp2基因是在抑制nad+的产生，因此降低该些基因的表现，可使nad+的产生增加，使粒线体保持较佳的活性，因而具有增加体力的效用。

另一方面，如图4所示，在含有本发明实施例的榴莲心皮萃取物的作用下，可使sod3基因的表现大幅增加约60％～270％，特别是在榴莲心皮萃取物作用24小时后，sod3基因的表现竟可高达将近原来的4倍。此外，在含有本发明实施例的榴莲心皮萃取物的作用下，也可使nadsyn1基因的表现增加约40％，不但增加了nad+的产生，也活化了相关的下游基因，同样可达到提升粒线体活性，并同时具有抗老与提升精力的功效。

藉由上述试验可知，本发明实施例的榴莲心皮萃取物可促进骨骼肌细胞的增生，并提升该些细胞的活性，同时具有调控nad+基因的表现，使nad+的生成增加，因而具有提升肌耐力、体力与精力的效果。

此外，本发明实施例的榴莲心皮萃取物，亦可进一步添加于食品、保健食品或膳食补充品中，或进一步应用于美容或保养品等产品中。同时亦可将本发明实施例的榴莲心皮萃取物制备为医药组成物，而该医药组成物亦可进一步加入所属技术领域所熟知的载剂或其他辅剂。医药组成物的剂型，可为但不限于溶液、胶囊、或锭剂。