一种党参枸杞组合物在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用的制作方法

本发明属于中药
技术领域：
，提供一种党参枸杞组合物在制备治疗阿尔兹海默症药物中应用。
背景技术：
：阿尔茨海默症(alzheimer'sdisease,ad)，是一种以进行性认知障碍和记忆损伤为主的神经系统退行性疾病，是老年痴呆症最常见的一种形式。临床上以记忆障碍、失语、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。有数据显示，每7秒钟世界上就增加一位ad患者。随着我国老龄化程度的加剧，ad会成为影响老年人健康的主要疾病之一，有效预防和治疗ad成为摆在我们面前的一个重大课题。淀粉样蛋白沉积(aβ蛋白)和神经纤维缠结是ad的两大主要病理学特征。现代医学对ad的发病机制进行了多年的研究，但是由于其病因复杂，该病的发病机制至今仍不明确，“aβ级联假说”是当前被广为接受的发病机制之一。该学说认为患者大脑中异常沉积的aβ通过自由基反应、线粒体氧化损伤和炎症反应等一系列级联反应，直接或者间接作用于神经元和神经胶质细胞，最终导致神经元功能异常或者死亡，引发认知损伤及记忆衰退，最终引起痴呆。在阿尔茨海默病症患者的淀粉样前体蛋白(app)基因和早老素基因常发生突变，导致aβ在大脑的过度表达成为该学说最为有力的证据。因此，β淀粉样蛋白已成为公认的筛选抗ad药物靶标。ad病因复杂、病程漫长、且发病环节较多，需要长期服药，目前主要的抗阿尔茨海默病药物乙酰胆碱酯酶抑制剂(如加兰他敏)和n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmda受体)拮抗剂(如美金刚)，但上述药物价格昂贵，服药后幻觉、意识混沌、头晕、头痛和疲倦等副作用显著，且只能控制却不能逆转患者病情。目前西药针对ad的某一特定病理环节进行干预往往会出现耐药及严重不良反应。中药组合物具有多种活性组分、多靶点的特征，使得从中药组合物宝库中筛选用于治疗ad的药物候选物前景广阔。党参为我国常用的传统补益药，其性甘、平，健脾益肺，养血生津，主要用于脾肺气虚，食少倦怠，咳嗽虚喘，气血不足等。现代研究表明，党参中含有多糖、炔苷、生物碱、三萜类、苯丙素类、甾醇等化学成分，具有调节免疫、调节肠胃功能、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用(刘美霞等，2018)。枸杞是生活中常见的一种药食两用的食材，其味甘、平；归肝、肾经；滋补肝肾，益精明目，润肺。现代医学研究发现，枸杞在降糖、降脂、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、增强免疫力方面均有显著效果(赵明宇，2018)。含有党参和枸杞的中药参杞片能够补气健脾，滋补肝肾；用于气血不足，倦怠无力，虚劳精亏，肝肾不足，腰膝酸软。秀丽隐杆线虫(caenorhabditiselegans)是一个多功能药物筛选和药物作用机制研究工具。它廉价、易培养；世代周期短、后代数目多，同时可获得大量背景一致的个体，保证实验重复性和采用大样本量进行实验，从而排除个体差异的影响；与高等生物在基因和分子信号通路方面高度保守(kalettaandhengartner，2006)。它作为一个从细胞体外水平药物初筛到小鼠体内水平药物复筛的一个桥梁，在药学研究领域被广泛应用。人源化秀丽隐杆线虫ad病理模型的建立是将人源aβ1-42基因转入线虫肌球蛋白myo-3启动子下游，aβ1-42基因同时融合有3’端长非翻译区序列(utr)，这一序列受具有mrna质量监控作用的smg-1基因产物的调控，而smg-1受温度控制，该基因在15℃许可温度下正常表达，表达产物结合于aβ1-42的3’端utr，使表达的aβ1-42的mrna降解，因此，线虫正常生长。当转移至25℃限制条件时，smg-1失活，aβ1-42得以表达并在其肌肉内累积，导致线虫失去运动能力而麻痹，加入受试药物可延缓线虫肌肉麻痹表型的ad样病理特征。受试药物减缓肌肉麻痹的线虫数量占受试线虫群体数量的比例越高，其抗ad效果越显著。这一模型早已被用于抗ad疾病发生机制和抗ad药物候选物的筛选及其作用机制研究(link,1995；2001)。本发明现提供一种党参枸杞组合物，该党参枸杞组合物可发挥协同作用显著延缓ad秀丽隐杆线虫的麻痹表型，提示本发明所述党参枸杞组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可在制备治疗阿尔茨海默症药物中应用。参考文献kalettat,hengartnermo.findingfunctioninnoveltargets:c.elegansasamodelorganism.natrevdrugdiscov2006,5:387e398.linkcd.expressionofhumanbeta-amyloidpeptideintransgeniccaenorhabditiselegans.procnatlacadsciusa1995,92:9368e9372.linkcd.transgenicinvertebratemodelsofage-associatedneurodegenerativediseases.mechageingdev2001,122:1639e1649.赵明宇.枸杞的药理作用及临床应用研究[j].北方药学,2018,15(04):156.刘美霞,戚进,余伯阳.党参药理作用研究进展[j].海峡药学,2018(11):36-39.技术实现要素：本发明目的是提供一种党参枸杞组合物及其在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。本发明所述的党参枸杞组合物含有下述重量比的原料药：党参1份－9份，枸杞9份－1份。优选重量比为1：1的党参和枸杞。将所述党参枸杞组合物加入适宜的辅料即可制备成为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂及其他任一种剂型，这是本领域研究人员可以理解的。本发明以秀丽隐杆线虫作为阿尔兹海默症病理模型进行实验，结果表明：党参枸杞组合物对罹患阿尔茨海默症的秀丽隐杆线虫具有显著的治疗作用。表现在对ad秀丽隐杆线虫肌肉内aβ过度表达引起的麻痹表型具有显著的抑制作用，即可以显著延缓阿尔茨海默症秀丽隐杆线虫的麻痹表型，提示党参枸杞组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可在制备治疗阿尔茨海默症的药物及保健品中应用。党参和枸杞单用时，均对ad线虫具有显著的治疗作用。在本发明中，当将党参和枸杞联合使用时，具有更为显著的抗ad效果。本发明提供的党参枸杞组合物中党参与枸杞发挥协同作用抗ad。下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。说明书附图图1党参枸杞组合物剂量依赖地延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹图2党参和枸杞发挥协同作用延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹图3党参枸杞按照不同重量配比的组合物显著延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹具体实施方式实施例一党参枸杞组合物剂量依赖地延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹1.生物材料(1)秀丽隐杆线虫cl4176购自caenorhabditisgeneticscenter(cgc)；为转基因品系，在25℃温度诱导下肌肉特异性表达人类aβ1-42，aβ1-42在肌肉组织聚集，最终导致线虫麻痹，本实施例采用秀丽线虫cl4176株系作为筛选抗ad药物的病理模型。(2)大肠杆菌op50(尿嘧啶渗漏突变株)，购自caenorhabditisgeneticscenter(cgc)，作为秀丽隐杆线虫的食物。2.试剂(1)固体ngm(nematodegrowthmedium)培养基成分与制作(以1升为例)：成分含量nacl3.00gk2hpo42.34gkh2po417.23g蛋白胨2.50g琼脂17.00g补充h2o至1000ml固体ngm培养基配制好后，121℃下高压恒温灭菌20min，在无菌操作台下加入5mg/ml胆固醇1ml，1mmgso41ml,1mcacl21ml摇匀，趁热倒入已灭菌的9cm培养板，约20ml/板。静置等待培养基凝固，备用。(2)m9液配方(3)裂解液的配制：6.4％naclo溶液和1mnaoh溶液按体积比1:1混合。3.配制含有党参枸杞组合物的ngm平板党参枸杞组合物水煎液的制备：党参12g，枸杞12g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后电陶炉煮沸，并保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。配置含有药水煎液的ngm平板：取适宜稀释度的党参水煎液，枸杞水煎液或党参枸杞组合物水煎液，分别加入ngm培养基中，倒板。含药的ngm板党参枸杞组合物终浓度分别为10倍稀释，20倍稀释，40倍稀释，80倍稀释。静置等待培养基凝固。在培养基上均匀涂布大肠杆菌op50作为线虫的食物。4.实施步骤(1)线虫的培养：将线虫接在涂有大肠杆菌op50的固体ngm板上，然后置于16℃的培养箱中培养，当线虫长到成虫时进行同步化处理。(2)线虫同步化：挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的ngm培养基，用m9液将线虫从培养基上冲下，转移到离心管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离心管中加入裂解液，在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋,并分装于1.5ml离心管中，用m9溶液洗线虫卵三次。(3)党参枸杞组合物对秀丽隐杆线虫cl4176的作用将同步化后分装于离心管中的线虫卵转移到涂布有op50并混合不同浓度的党参枸杞组合物的ngm培养皿和空白对照为涂布有op50并加有与党参枸杞组合物等体积无菌水的ngm培养皿中，每个培养皿60条线虫，每个药物浓度三个培养皿作为平行，16℃培养3天至l3期。为了使线虫表达aβ，将l3期线虫转在25℃下进行诱导，34h后开始计数线虫麻痹条数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻痹(麻痹是指机械刺激线虫身体时，线虫不能运动或者只有头部运动)。结果见图1。图1的纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越大，表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻痹的作用越强。其中，c表示无菌水空白对照；ll表示超低浓度党参枸杞组合物组(80倍稀释)，l表示低浓度党参枸杞组合物组(40倍稀释)，m表示中浓度党参枸杞组合物组(20倍稀释)，h表示高浓度党参枸杞组合物组(10倍稀释)。实验结果表明，党参枸杞组合物剂量依赖地延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹。通过以上实施例证明，本发明提供的党参枸杞组合物具有抗阿尔茨海默症的潜力，可在制备防治阿尔茨海默症药物中应用。实施例二党参和枸杞发挥协同作用延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹含有不同重量单味药的党参及枸杞水煎液的制备：党参12g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后电陶炉煮沸，并保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。党参24g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后高档电陶炉煮沸，低档位文火保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。枸杞12g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后高档电陶炉煮沸，低档位文火保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。枸杞24g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后高档电陶炉煮沸，低档位文火保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。两组党参水煎液的终浓度为最初制备水煎液的10倍稀释；两组枸杞水煎液的终浓度为最初制备水煎液的10倍稀释。其它操作同实施例一。其中，c表示无菌水空白对照；dl表示低浓度党参组(12g党参水煎液组)，dh表示高浓度党参组(24g党参水煎液组)；gl表示低浓度枸杞组(12g枸杞水煎液组)，gh表示高浓度枸杞组(24g枸杞水煎液组)；h表示党参枸杞组合物组(同实施例1)。图2的纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越大，表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻痹的作用越强。通过以上实施例证明，在本实施例中单用党参或枸杞(重量与党参枸杞组合物中对应原料药重量相同或重量与党参枸杞组合物总重量相同)，对ad线虫肌肉麻痹的延缓作用均不如党参枸杞组合物。这表明党参和枸杞可发挥协同作用抗ad。实施例三党参枸杞按照不同重量配比的组合物显著延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹含按不同重量比原料药的党参和枸杞组合物水煎液的制备：含党参1份、枸杞9份的中药组合物水煎剂的制备：党参2.4g，枸杞21.6g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后高档电陶炉煮沸，低档位文火保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。含党参9份、枸杞1份的中药组合物水煎剂的制备：党参21.6g，枸杞2.4g，加蒸馏水100ml，浸泡20min，然后高档电陶炉煮沸，低档位文火保持沸腾30min，停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第一次煎煮液。将所得药渣再加蒸馏水100ml，煮沸30min。停止加热，冷却后，多层纱布过滤即得第二次煎煮液。合并两次所得煎煮液，定容至55ml。上述两组不同重量配比的水煎液的终浓度分别为最初制备水煎液的10倍稀释；党参枸杞组合物浓度为最初制备水煎液的10倍稀释，c表示无菌水空白对照。其它操作同实施例一。其中，g表示党参1份、枸杞9份组合物组(10倍稀释)，d表示党参9份、枸杞1份组合物组(10倍稀释)，h表示党参枸杞组合物组(10倍稀释)。图3的纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越大，表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻痹的作用越强。通过以上实施例证明，在总重量与党参枸杞组合药相同的情况下，含有党参1份、枸杞9份和党参9份、枸杞1份的党参枸杞组合物显著延缓ad秀丽隐杆线虫的肌肉麻痹，对ad秀丽隐杆线虫发挥显著治疗作用。提示本发明提供的含有党参1份－9份，枸杞1份－9份重量比的党参枸杞组合物具有抗阿尔茨海默症潜力，可在制备防治阿尔茨海默症的药物中应用。其中，含有党参和枸杞为1：1的中药组合物具有最显著的延缓ad秀丽隐杆线虫肌肉麻痹的作用，对ad秀丽隐杆线虫发挥最为显著的治疗作用，为优选重量比的党参枸杞组合物。当前第1页12