本发明涉及水性组合物，其在人的体温附近的温度下增稠，但通过对增稠后的组合物施加力，流动性提高。更详细地说，本发明涉及以甲基纤维素为主药的、用于治疗干眼症等的热凝胶化人工泪液。
背景技术：
：：泪液在位于上眼睑外侧的泪腺形成，给眼睛表面带来湿润，从位于内眼角的泪点排出到鼻后部。以前认为泪液的结构从眼睛的表面向角膜为油层、水层、黏蛋白层这三层结构。但是，近年来取而代之的概念是在水层与黏蛋白层之间没有隔断，在水层中以浓度梯度混杂有黏蛋白。目前，形成油层和混杂有黏蛋白的水层的二层结构这样的概念。该二层结构的任何一层出现异常时，形成干眼症。在由于泪液的油层异常而产生的“蒸发过强型干眼症”中，有睑板腺功能障碍、眼睑炎。在由于泪液的水层异常而产生的“泪液减少型干眼症”中，有舍格伦综合征(syndrome)、史蒂文斯约翰逊综合征(stevens-johnsonsyndrome)等。2016年，干眼症研究会定义了“干眼症是由于各种原因导致泪液层的稳定性降低的疾病，有时产生眼不适感、视觉异常，伴随眼表面的障碍”。干眼症治疗的最大目的是使泪液的结构恢复正常，改善角结膜上皮障碍、自觉症状。实际上，在用于治疗干眼症的滴眼药中，有含有人工泪液、透明质酸钠、软骨素硫酸钠、黄素腺嘌呤二核苷酸的水性滴眼液、血清滴眼药和油性滴眼药等，近年来地夸磷索钠、瑞巴派特等干眼症治疗剂也在售卖。对于微恙的干眼症的情况，在日本国内，作为人工泪液，容易获得以泪液的补充(眼干)为功能、效果的otc的眼科用药。人工泪液的作用是从外部补充不足的泪液而谋求增加泪液的方法。据报道，正常人的泪液量为6.5±0.3μl、干眼症患者的泪液量为4.8±0.4μl，结膜囊的容量被认为是20～30μl，滴眼液1滴被认为是约50μl，因此在正常人、干眼症患者的任一者的情况下，对于一只眼滴加1滴人工泪液时，结膜囊内都被水分填满。作为人工泪液，列举了添加有无机盐类的水性滴眼剂。但是，这样的水性滴眼剂产生下述现象：在滴眼后通过鼻泪管迅速被排出，或者从眼表面蒸发。因此，为了维持眼表面的水分、或者为了减轻自觉症状，必须以1次2～3滴、1天5～6次的频次进行滴眼(非专利文献1～3)。出于延迟这样的人工泪液从眼表面排出、和进一步补给大量水分的目的，配合有水溶性高分子的高粘度滴眼剂被销售。添加作为水溶性高分子的、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、羟乙基纤维素(hec)或者透明质酸和其药学上可接受的盐等作为粘稠剂。然而，已知这样的滴眼剂由于粘性高，因此在施与时难以调节滴加量，或者伴随有以滴眼后的视力模糊为首的不适感。已知在水溶性高分子中，即使在纤维素衍生物中，甲基纤维素也是角膜表层保护药，含有0.5％甲基纤维素的生理盐水对于角膜表面赋予保水性，形成具有与泪液类似的性质的薄膜(非专利文献4)。另外，已知利用含有0.6％和1.2％甲基纤维素的生理盐水，在猪的眼球中确认有角膜上皮创伤治愈效果(非专利文献5)。但是，对于这些含有甲基纤维素的生理盐水，在溶液上没有确认甲基纤维素特有的由热导致凝胶化的性质，完全没有考虑凝胶化引起的效果。作为含有甲基纤维素的水性药物组合物，记载了含有甲基纤维素和透明质酸和其药学上可接受的盐的热凝胶化制剂或者含有甲基纤维素、macrogol4000和柠檬酸钠的热凝胶化人工泪液，出于在体温附近凝胶化而使泪液量增大、在眼表面补给水分、保护泪液油层的目的而被使用(专利文献1、2)。另一方面，公开了以新型喹诺酮系抗菌剂作为有效成分、凝胶化温度充分低的热凝胶化水性药物组合物。另外，作为上述组合物，报道了氧氟沙星凝胶化滴眼液0.3％“wakamoto”对角膜上皮障碍是有效的(专利文献3、非专利文献6)。上述在含有抗菌剂的凝胶化滴眼液中，只不过确认了含有1种甲基纤维素、进而凝胶化的滴眼液的效果。这些专利文献公开的上述水性药物组合物通常设想在室温保存时，组合物渐渐凝胶化，在滴眼前失去易于以液体施与的特征，因此，在低温下保存。对于人工泪液的情况，一般来说如上述那样频繁地滴眼，但是可逆性热凝胶化水性组合物需要在低温下保存，因此不便随身携带。作为含有甲基纤维素、聚乙二醇和柠檬酸钠以及糖醇、乳糖、羧甲基纤维素或者环糊精的任一者的水性药物组合物，公开了即使在室温下凝胶化，轻轻振摇等施加弱的力时，粘度急剧降低而恢复为液体的组合物、即具有摇变性的水性组合物(专利文献4)。对于由含有羟乙基纤维素以及甲基纤维素或者羟丙基甲基纤维素的水溶液形成的水性组合物，公开了在人的体温附近瞬间增稠而不凝胶化、轻轻振摇等施加弱的力时粘度急剧降低、流动性升高的组合物(专利文献5)。由于是这样能够携带的热凝胶化制剂、或不产生施与后的异物感的水性组合物，从而进行了着眼于产品流通、qol的改进。但是，对于通过反复进行溶胶-凝胶相转变，摇变性可再现的水性组合物没有公开。如上所述，完全不知道以特定的比率将不同规格的甲基纤维素组合的水性组合物，其虽然在体温附近凝胶化，但通过施加物理性的刺激而转变成溶胶，显示再现性。另外，完全不知道以特定的比率将不同规格的甲基纤维素组合的水性组合物，其通过在体温附近凝胶化而具有角膜保护作用或者具有减轻角膜上皮障碍的作用。[现有技术文献][专利文献][专利文献1]日本特开2003-342197号公报[专利文献2]日本特开2003-95924号公报[专利文献3]wo02/011734[专利文献4]wo2005/042026[专利文献5]wo2009/001899[非专利文献][非专利文献1]眼科ケア2010年冬季增刊(通巻148号)，株式会社メディカ出版，木下茂等编辑，145-147[非专利文献2]ocularsurface的诊断和治疗-干眼症-，メディカル葵出版，小口芳久监修[非专利文献3]干眼症研究会web页(http://www.dryeye.ne.jp/)[非专利文献4]第十七修正版日本药典解说书，东京广川书店发行[非专利文献5]journalofocularpharmacologyandtherapeutics,volume15,number1,1999,59-63[非专利文献6]眼科临床纪要4(2)，2011，132-137技术实现要素：本发明所要解决的课题是提供眼科用水性组合物，其在室温附近(例如25℃附近)维持低粘度，但粘度由于体温附近的热而急剧增加，由此能够保持眼表面的泪液。另外，本发明的课题是提供角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或者角膜损伤恢复用眼科用水性组合物。另外，本发明的课题是提供甲基纤维素在制备角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或者角膜损伤恢复用眼科用水性组合物中的用途。本发明是基于以下见解而完成的，即，对于含有甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、和柠檬酸或其药学上可接受的盐的水溶液，通过将两种以上不同规格(例如粘度)的甲基纤维素组合，能够解决上述课题。也就是说，根据本发明，提供以下的眼科用水性组合物；角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或角膜障碍恢复用眼科用水性组合物；和甲基纤维素在制备角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或角膜障碍恢复用眼科用水性组合物中的用途。1.眼科用水性组合物，其特征在于，含有(a)至少两种甲基纤维素、(b)聚乙二醇、(c)聚乙烯基吡咯烷酮、和(d)柠檬酸或其药学上可接受的盐，并凝胶化。2.根据上述1所述的眼科用水性组合物，其中，(a)成分为两种甲基纤维素。3.根据上述2所述的眼科用水性组合物，其中，以1:30～30:1的质量比含有两种甲基纤维素。4.根据上述1～3中任一项所述的眼科用水性组合物，其中，(a)成分是20℃下2w/v％水溶液的粘度为4～400mpa·s的甲基纤维素。5.根据上述1～3中任一项所述的眼科用水性组合物，其中，(a)成分是选自20℃下2w/v％水溶液的粘度为4mpa·s、15mpa·s、25mpa·s、100mpa·s、400mpa·s、1500mpa·s或4000mpa·s的甲基纤维素中的两种。6.根据上述1～5中任一项所述的眼科用水性组合物，其中，(b)成分是选自peg8000、peg4000、peg800、peg400和peg300中的至少一种。7.根据上述1～6中任一项所述的眼科用水性组合物，其中，(c)成分是选自pvpk17、pvpk25、pvpk30和pvpk90中的至少一种。8.根据上述1～7所述的眼科用水性组合物，其为热凝胶化人工泪液。9.角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或角膜障碍恢复用眼科用水性组合物，其中，含有(a)至少两种甲基纤维素、(b)聚乙二醇、(c)聚乙烯基吡咯烷酮、和(d)柠檬酸或其药学上可接受的盐。10.至少两种甲基纤维素在制备角膜保护用、角膜上皮障碍减轻用或角膜障碍恢复用眼科用水性组合物中的用途，其与聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、和柠檬酸或其药学上可接受的盐组合。本发明的眼科用水性组合物可以作为干眼症等的角膜上皮障碍治疗药或用于补充泪液的人工泪液使用，该情况下，可以作为适用于哺乳类、特别是人的眼睛的滴眼剂使用。该组合物在施与人等生物体时，在其体温下容易增稠。另外，本发明的组合物即使放置于因地域、季节等而温度高的环境中也增稠，但具有摇变性，因而通过轻轻地振摇混合，组合物的流动性变高(即，变为溶胶)，能够反复进行溶胶-凝胶相转变，因此可容易地施与生物体。附图说明[图1]是表示在本发明的实施例和比较例中凝胶化温度的曲线图。[图2]是表示在本发明的实施例和比较例中摇变性的曲线图。[图3]是表示在本发明的实施例和比较例中对热的应答性的曲线图。[图4]是表示在本发明的实施例中对热的应答性的曲线图。[图5]是表示在本发明的实施例和比较例中凝胶化行为(第一次)的曲线图。[图6]是表示在本发明的实施例和比较例中对凝胶化的再现性(第五次)的曲线图。[图7]是表示在本发明的实施例和比较例中对凝胶化的再现性(第十次)的曲线图。[图8]是表示在本发明的实施例和比较例中对于角膜保护作用进行评价的结果的曲线图。[图9]是表示在本发明的实施例和比较例中对于角膜保护作用进行评价的结果的曲线图。[图10]是表示在本发明的实施例和比较例中对于角膜保护作用进行评价的结果的曲线图。[图11]是表示在本发明的实施例和比较例中对于眼表面滞留性进行评价的结果的曲线图。[图12]是表示在本发明的实施例和比较例中泪液量测定结果的曲线图。[图13]是表示在本发明的实施例和比较例中对于角膜障碍恢复作用进行评价的结果的曲线图。[图14]是从本发明的实施例和比较例开始施与起第12天观察角膜障碍的照片。具体实施方式(a)至少两种甲基纤维素本发明中使用的甲基纤维素(以下也称为mc)可以适当使用作为药品添加物市售的物质。例如，若以粘度表示，2w/v％水溶液的20℃下的粘度为12000mpa·s(毫帕秒)以下即可，更优选为120mpa·s以下。甲氧基的含有率优选为26～33％的范围。进而，mc可根据其水溶液的粘度区分，例如，在市售品的品种中有示出粘度4、15、25、100、400、1500、4000(数字表示2w/v％水溶液的20℃下的粘度(单位为毫帕·秒)。以下，简单地称为“粘度”或“示出粘度”的情况也同样。例如，“示出粘度为4”是指2w/v％水溶液的20℃下的粘度为4毫帕·秒)的mc，可以容易获得。示出粘度4～400的mc易于操作，因此是优选的。更优选示出粘度选自4、15、25、100、400、1500和4000中的两种mc。进一步优选示出粘度为4的mc、示出粘度为15的mc、示出粘度为400的mc，特别优选示出粘度为4的mc和示出粘度为15的mc的组合、示出粘度为4的mc和示出粘度为400的mc的组合、以及示出粘度为15的mc和示出粘度为400的mc的组合。尤其优选示出粘度为4的mc和示出粘度为15的mc的组合。对于mc的概要、规格、用途、使用量和商品名等，详细记载于医药品添加物辞典(日本医药品添加物协会编辑，药事日报社发行)中。另外，mc作为基于日本、美国、欧州的三个药典中的调查协议而规定的药品各条款刊登于第十七修正版日本药典中。mc的规格的大部分在三个药典中是共同的。应予说明，mc的粘度可以按照第十七修正版日本药典中记载的方法进行测定。(b)聚乙二醇本发明中使用的聚乙二醇(以下也称为peg)作为医药品添加物有市售，例如以peg-200、-300、-400、-600、-1000、-1500、-1540、-2000、-4000、-6000、-8000、-20000、-50000、-500000、-2000000和-4000000的商品名由和光纯药工业(株)售卖，以macrogol-200、-400、-1500、-4000、-6000或-20000的商品名由三洋化成工业(株)售卖，还有以carbowax(注册商标)peg200、300、400、540、600、1000、1450、3350、4000、4600、8000的商品名由dowchemicalcompany售卖。在本发明的基剂中使用的peg的重均分子量优选为300～50000，特别优选为300～8000。重均分子量为300以上时，易于引起由体温导致的溶胶-凝胶相转变，重均分子量为50000以下时，液体状态下的粘度不过于变高，因此是优选的。尤其优选重均分子量为4000或8000的peg。另外，也可以将2种以上的peg混合而将重均分子量调节至上述合适的范围内。对于peg的概要、规格、用途、使用量和商品名等，详细记载于医药品添加物辞典(日本医药品添加物协会编辑，药事日报社发行)中。另外，peg的概要、规格详细记载于美国药典(2018u.s.pharmacopeianationalformulary,usp41nf36、以下称为usp41(nf36))中。应予说明，peg-400、-4000、-6000和-20000的重均分子量可以按照第十七修正版日本药典中记载的方法进行测定。重均分子量为200至8000的peg可以按照usp41(nf36)测定粘度，限定粘度范围。·聚丙二醇可以使用聚丙二醇代替peg，或者可以在peg中追加使用聚丙二醇。通过含有聚丙二醇，可以将本发明的组合物的粘度调节至适当的范围。可在本发明中使用的聚丙二醇优选重均分子量为200～40000，更优选为200～1200，200～700的由于在水中的溶解性高，因此进一步优选，特别优选为200～400。应予说明，聚丙二醇2000的重均分子量可以按照医药品添加物规格2013(药事日报社发行)中记载的方法进行测定。聚丙二醇例如以ユニオール(注册商标)d-200、d-250、d-400、d-700、d-1000、d-1200、d-2000、d-4000的商品名由日油株式会社售卖。上述ユニオールd系列的重均分子量、运动粘度记载于油化产品综合目录(日油株式会社油化事业部)中。(c)聚乙烯基吡咯烷酮本发明中使用的聚乙烯基吡咯烷酮(以下也称为pvp)可以适当使用作为药品添加物市售的产品。具体地，可以列举pvpk17、pvpk25、pvpk30、pvpk90等。本发明中使用的pvp的重均分子量优选为2500～250000，特别优选为20000～150000。优选为选自pvpk17、pvpk25、pvpk30、pvpk90中的至少一种。尤其优选为pvpk25。对于pvp的概要、规格、用途、使用量和商品名等，详细记载于医药品添加物辞典(日本医药品添加物协会编辑，药事日报社发行)中。pvpk25、pvpk30和pvpk90作为聚维酮收载于第十七修正版日本药典中。聚维酮作为基于日本、美国、欧州的三个药典中的调查协议而规定的药品各条款刊登于第十七修正版日本药典中。聚维酮的规格的大部分在三个药典中是共同的。应予说明，在本说明书中，有时将pvpk25以pvpk25的方式表述。(d)柠檬酸或其药理学上可接受的盐作为在本发明中使用的柠檬酸，可以列举柠檬酸水合物和柠檬酸的药学上可接受的盐。作为上述柠檬酸的药学上可接受的盐，可以列出钠盐、钾盐等。作为钠盐，可以列举柠檬酸钠水合物(別名：柠檬酸钠(日本药典)，以下称为柠檬酸钠)、柠檬酸二氢钠、柠檬酸二钠等。作为钾盐，可以列举柠檬酸钾(柠檬酸钾一水合物)。对于本说明书中所说的柠檬酸钠，在第十七修正版日本药典中详细记载了作为柠檬酸钠水合物的概要、规格和用途。另外，作为柠檬酸钠，柠檬酸钠二水合物的概要和规格详细记载于usp41(nf36)中。本发明的眼科用水性组合物中的mc的合计浓度优选为0.2～5w/v％。mc的合计浓度为0.2w/v％以上时，在眼表面的温度下，本发明的组合物易于凝胶化，因此是优选的。另外，mc的合计浓度为5w/v％以下时，粘度能够调节至易于操作的范围，因此是优选的。更优选为0.5w/v％以上，进一步优选为1w/v％以上。另外，更优选为4w/v％以下，进一步优选为3w/v％以下。作为本发明的眼科用组合物的实施方式，也可以将3种以上不同规格的mc混合。混合有3种以上mc的组合物与由1种mc得到的组合物相比，在人的体温附近(34～38℃)的增稠较为迅速，因此是优选的。混合有2种mc的组合物易于调节粘性，使之可在室温(1～30℃)下以液体(溶胶)状态保存，因此进一步优选。mc的组合为两种时，优选在上述组合物中，一种mc的浓度为0.1～3w/v％。mc的浓度为0.1w/v％以上时，在人的体温附近(34～38℃)增稠，因此是优选的。另外，mc的浓度为3w/v％以下时，在室温(1～30℃)下易于制备粘性低的水溶液，因此是优选的。更优选为0.1w/v％以上，进一步优选为0.2w/v％以上。更优选为2.5w/v％以上。mc的组合为两种时，优选将不同规格(优选粘度)的mc以质量比1：30～30：1的比例混合，更优选1：24～24：1的比例，进一步优选1:4～4:1。特别优选将示出粘度为4的mc和示出粘度为15的mc的组合、示出粘度为4的mc和示出粘度为400的mc的组合、或示出粘度为15的mc和示出粘度为400的mc的组合以上述质量比并用。尤其优选将示出粘度为4的mc和示出粘度为15的mc的组合以上述质量比并用，其中尤其优选以1：4～4：1的质量比并用。作为本发明的眼科用水性组合物的实施方式，mc以外的成分更优选以下的浓度范围。peg的浓度为0.5～4.0w/v％的范围，浓度低于0.5w/v％时，局部的凝胶难以生成，因此缺乏实用性，另外，高于4w/v％时，凝胶化温度变低，不优选。聚丙二醇的浓度为0.1～4w/v％的范围，浓度高于4w/v％时，在眼刺激方面不优选。pvp的浓度为0.5～4.0w/v％的范围，浓度低于0.5w/v％时，局部的凝胶难以生成，因此缺乏实用性，另外，高于4w/v％时，溶胶的粘度变高，不优选。柠檬酸的浓度为1.0～4.0w/v％的范围，浓度低于1.0w/v％时，局部的凝胶难以生成，因此缺乏实用性，另外，高于4w/v％时，在眼刺激方面不优选。本发明的组合物最优选含有：(a)质量比为1：4～4：1、合计浓度为0.2～5w/v％的量的、示出粘度为4的mc和示出粘度为15的mc，(b)0.5～4.0w/v％的、重均分子量为4000或8000的peg，(c)0.5～4.0w/v％的pvpk25，(d)1.0～4.0w/v％的柠檬酸或其钠盐。该组合物的ph调节剂可以是氢氧化钠或硫酸。本发明的眼科用水性组合物期望在哺乳类的体温附近的温度下凝胶化，因此，本发明的眼科用水性组合物的凝胶化温度(引起从溶胶向凝胶的相变的温度)优选为约30℃～40℃，更优选为34℃至40℃。本发明的眼科用水性组合物能够作为室温(1～30℃)下可即刻施与的液体制剂在室温下保存。通过调节上述(b)～(d)成分的浓度，能够精密地调节凝胶化温度。本发明的眼科用组合物可以用作干眼症等的角膜上皮障碍治疗药。本发明的眼科用水性组合物另外可以作为干燥性角结膜炎、泪液减少症中用于泪液补充的人工泪液、伴随泪液不足的、隐形眼镜佩戴时的不适感、眼干、眼疲劳、眼睛模糊中用于泪液补充的人工泪液、由眼睛干燥引起的刺痛症状、刺激中用于泪液补充的人工泪液使用。本发明的眼科用水性组合物另外可以作为用于抑制角膜干燥、保护角膜的人工泪液或使泪液量增大的人工泪液使用。本发明的眼科用水性组合物另外可以作为在眼表面滞留、减轻角膜上皮障碍的人工泪液使用。本发明的眼科用水性组合物另外可以作为通过使角膜损伤在早期恢复而能够恢复角膜障碍的人工泪液使用。在本发明的眼科用水性组合物中，作为针对干眼症的有效成分或作为人工泪液的有效成分，除了氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠、碳酸钠、干燥碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等无机盐类以外，也可以配合葡萄糖等糖类、l-天冬氨酸钾、l-天冬氨酸镁、l-天冬氨酸镁/钾[等量混合物]、氨基乙磺酸(以下也称为牛磺酸)、软骨素硫酸钠等氨基酸类或其药学上可接受的盐、聚乙烯醇、透明质酸和其药学上可接受的盐、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(羟基丙基甲基纤维素)等高分子化合物。这些有效成分的配合量只要是可得到期待药效的浓度即可，没有特别限制。本发明的眼科用水性组合物通常调节为ph3～10，特别从眼刺激这方面考虑，优选调节为ph5～8。为了调节本发明的人工泪液的ph，可以使用通常添加的各种ph调节剂。可以列举例如酸类、碱类、氨基酸类等。作为酸类，可以列举例如盐酸、硫酸、磷酸、硼酸、醋酸、乳酸、葡糖酸、抗坏血酸等。作为碱类，可以列举例如氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化镁、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。作为氨基酸类，可以列举甘氨酸、组氨酸、ε-氨基己酸等。本发明的眼科用水性组合物根据需要也可以含有药学上可接受的等渗剂、增溶剂、防腐剂和抗菌剂等。作为等渗剂，可以列举木糖醇、甘露醇、葡萄糖等糖类、丙二醇、甘油、氯化钠、氯化钾等。作为增溶剂，可以列举吐温80、聚氧乙烯氢化蓖麻油和环糊精。作为防腐剂，可以使用苯扎氯铵(以下也称为bac)、苄索氯铵、西吡氯铵等离子系防腐剂，葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定、1,1-二甲双胍盐酸盐、聚六亚甲基双胍、阿来西定、海克替啶、n-烷基-2-吡咯烷酮等双胍系防腐剂，泊利氯铵等聚季铵盐系防腐剂，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等对羟基苯甲酸酯类，氯丁醇、苯基乙基醇、溴硝丙二醇和苯甲醇等醇类，脱氢醋酸钠、山梨酸和山梨酸钾等有机酸和其盐类。作为在滴眼液中通用性高的防腐剂苯扎氯铵由通式：[c6h5ch2n(ch3)2r]cl表示。应予说明，在上述通式中，r表示烷基。在本发明的组合物中，苯扎氯铵使用由冈见化学工业株式会社售卖的产品。另外，作为其他添加剂，可以列举羟乙基纤维素、聚乙烯醇、丙二醇、二甘醇、透明质酸和其药学上可接受的盐、软骨素硫酸钠或聚丙烯酸钠等增稠剂、edta(乙二胺四乙酸)和它们的药学上可接受的盐、生育酚和其衍生物、亚硫酸钠等稳定剂。作为本发明的眼科用水性组合物的制法，没有特别限定，例如使甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮和柠檬酸分散在约60～70℃的热水中，冷却至10℃以下。根据需要，向其中添加溶解无机盐类、其他有效成分、添加剂等，充分进行混合。根据需要用ph调节剂调节所得溶液的ph，用灭菌纯化水定容，制备本发明的眼科用水性组合物。将上述组合物灭菌后，填充到塑料制滴眼瓶中，可以供于使用。本发明的眼科用水性组合物可作为适用于哺乳类、特别是人的眼睛的滴眼剂来使用。以下列举实施例更详细地说明本发明，但本发明不仅仅限定于这些实施例。＜试验例1a＞以规定量将甲基纤维素(信越化学工业(株)制、メトローズ(注册商标)sm-4和sm-15)、聚乙二醇(carbowax(注册商标)peg8000、dowchemicalcompany制)、聚乙烯基吡咯烷酮(pvpk25)和柠檬酸钠混合，添加到加热至60～70℃的灭菌纯化水中，进行搅拌，由此使其分散。确认均匀分散后，一边搅拌一边冷却至10℃以下。确认整体呈现澄清，添加规定量的苯扎氯铵，并溶解。进而，用1m氢氧化钠水溶液或1m硫酸水溶液将ph调节至7.0后，用灭菌纯化水定容至规定的容量，制备本发明的眼科用水性组合物(实施例1、2)。配方内容示于表1。应予说明，在表中，各成分的配合量全部用w/v％表示。[表1](w/v％)实施例1实施例2甲基纤维素(sm-4)1.31.3甲基纤维素(sm-15)1.21.2柠檬酸钠水合物2.22.2pvpk252.52.0聚乙二醇80002.02.0苯扎氯铵0.0050.005ph调节剂适量适量ph7.07.0作为比较例，将专利文献1的实施例-3和4以及专利文献4的实施例-7、专利文献3的实施例-5利用各专利文献记载的方法进行制备(比较例1～4)。配方内容示于表2。[表2]为了研究表1、2中所示的实施例或比较例的温度与粘度的关系，观察了各水性组合物的粘度行为。测定实施例1、2和比较例1～4的组合物在20℃～40℃的粘度，评价温度与粘度的关系。利用安东帕公司(anton-paar)制流变仪(modularcompactrheometer102)测定粘度。将制备的本发明的组合物约1ml设置于直径约50mm的平行板与温控器用珀耳帖元件(peltier)之间。珀耳帖元件与平行板的间隙设定为0.5mm。测定开始前，将试样在5℃保持冷却5分钟。从测定开始起缓慢升温至各测定温度。在各测定温度保持240秒，测定粘度。结果示于图1。作为本发明组合物的实施例1、2在直至32℃的温度下维持低粘度，从34℃至40℃之间粘度急剧升高。对于比较例1而言，从34℃至40℃之间粘度稍微升高，但整体上以低粘度变化。对于比较例2、3而言，从32℃起粘度升高，对于比较例4而言，在25℃附近粘度突然升高。比较例2、3的凝胶化温度与本发明组合物相比更接近于室温，比较例4中，在室温下大幅增稠，因此显示在室温下的贮存困难。另一方面，本发明的眼科用水性组合物显示能够作为在室温(1～30℃)下可即刻施与的液体制剂保存。＜试验例1b＞与前述实施例1、2同样，如下制备实施例4～39。以规定量将甲基纤维素(sm-4、sm-15和sm-400)、聚乙二醇(peg8000、peg4000、peg400和peg300)、聚乙烯基吡咯烷酮(pvpk25、pvpk30和pvpk90)和柠檬酸钠混合，制备表6的实施例时，进一步以规定量混合硼酸或者透明质酸，添加到加热至60～70℃的灭菌纯化水中，进行搅拌，由此使其分散。确认均匀分散后，一边搅拌一边冷却至10℃以下。确认整体变得澄清，添加规定量的表3～7中所示的其他成分，并溶解。进而，用1m氢氧化钠水溶液或1m硫酸水溶液调节ph后，用灭菌纯化水定容至规定的容量，制备本发明的眼科用水性组合物。用与实施例同样的步骤制备比较例a。配方内容示于表3～7。测定实施例4～39和比较例a的组合物在20℃～40℃时的粘度，评价温度与粘度的关系。利用安东帕公司制流变仪(modularcompactrheometer102)测定粘度。将制备的本发明的组合物约1ml设置于直径约50mm的平行板与温控器用珀耳帖元件之间。珀耳帖元件与平行板的间隙设定为0.5mm。测定开始前，将试样在5℃保持冷却5分钟。从测定开始起缓慢升温至各测定温度。在各测定温度保持240秒，测定粘度。结果示于表3～7。[表3][表4][表5][表6][表7]由表3～7可知，作为本发明组合物的实施例4～39在直至32℃的温度下维持低粘度，从34℃至40℃之间粘度急剧升高。表3表明本发明的组合物无论mc的种类都可制备，均具有热凝胶的特性。将表3的实施例8与实施例9比较可知，示出粘度大的mc的比例越是增加，低温下的粘度越变大。表4表明无论pvp的种类或者重均分子量，都可制备本发明的组合物，均具有热凝胶的特性。将表4的实施例13与实施例14比较可知，柠檬酸钠的浓度低的组合物在34～40℃的温度下粘度的升高缓慢。将表4的实施例12与实施例13比较可知，聚乙二醇的浓度低的组合物在34～40℃的温度下粘度的升高缓慢。将表4的实施例13与实施例15比较可知，pvp的浓度低的组合物在34～40℃的温度下粘度的升高缓慢。由表5可知，在本发明的组合物中可添加各种防腐剂，不会影响热凝胶的特性。由表6可知，在本发明的组合物中可添加硼酸这样的酸类、透明质酸这样的增稠剂、氨丁三醇这样的碱类，牛磺酸等氨基酸，不会影响热凝胶的特性。表6表明无论聚乙二醇的种类或重均分子量，都可制备本发明的组合物，均具有热凝胶的特性。由表7可知，在本发明的组合物中可添加各种无机盐类，不会影响热凝胶的特性。由表4可知，柠檬酸钠和聚乙二醇影响本发明组合物由热引起的粘度升高。由表4可知，尽管没有到上述柠檬酸钠或聚乙二醇的程度，但pvp也影响本发明组合物由热引起的粘度升高。表5表明可不限定于防腐剂的种类而添加，由此表明本发明作为水性药物用组合物是适合的。表6和表7表明本发明的组合物适合作为人工泪液用组合物。表3～7表明本发明的组合物能够作为在室温(1～30℃)下可即刻施与的液体制剂保存。表3～7暗示本发明的组合物适于眼科用水性组合物，在施与后的眼表面的温度下反应，即刻增稠，具有滞留性。＜试验例1c＞利用与前述实施例1、2同样的步骤制备实施例40～52，测定20℃～40℃下的粘度。配方内容和测定结果示于表8。[表8]实施例40、42、46虽然在20～32℃附近的粘度低，但是在36～40℃的体温附近，粘度升高。实施例49、51、52、53虽然在30～34℃粘度低，但是在38、40℃，粘度急剧升高。基于通过本试验的粘度测定观察到的粘度行为，表明即使对于实施例40～52，由于具有与本发明的其它实施例同样的粘度变迁，因此也具备本发明的特征。＜试验例2＞对于表1所示的实施例2和表2所示的比较例2～4，研究了凝胶化时的摇变性。对于实施例2和比较例2～4的组合物，使用安东帕公司制流变仪(modularcompactrheometer102)对凝胶化后的组合物求出剪切应力与变形的关系。如果具有在使剪切应力增加时与变形不是呈比例的关系的点，则评价为具有摇变性。将制备的本发明和比较例的组合物约1ml设置于直径约50mm的平行板与温控器用珀耳帖元件之间。珀耳帖元件与平行板的间隙设定为0.5mm。在测定开始前将测定试样在5℃保持冷却5分钟。从测定开始起在36℃保持约10分钟。接着在25℃保持240秒后，通过振动测定求出频率为1(hz)、剪切应力变化为0.01～10pa时的变形。结果示于图2。作为本发明组合物的实施例和比较例2、3均显示下述结果：存在应力与变形不呈比例的关系的点(屈服应力)，因此具有摇变性。在比较例4中，在本试验条件下不存在屈服应力，因此表明没有摇变性。＜试验例3a＞对于表1所示的实施例1、2和表2所示的比较例1～3，在一定期间反复进行加热和冷却，测定粘度，评价再现性。对于本发明组合物实施例2，评价反复进行向20℃和36℃进行温度调节时的粘度变化。利用安东帕公司制流变仪(modularcompactrheometer102)测定粘度。将制备的本发明的组合物约1ml设置于直径约50mm的平行板与温控器用珀耳帖元件之间。珀耳帖元件与平行板的间隙设定为0.5mm。测定试样在测定开始前在5℃保持冷却10分钟。从测定开始起，升温至36℃保持240秒后，测定粘度，接着冷却至20℃保持240秒后，测定粘度。反复进行该36℃和20℃的操作4次半。比较例4在36℃的粘度非常高，在与其他试样相同的条件下无法测定。因此，实施例1、2和比较例1～3的结果示于图3。本发明的组合物、实施例1、2在第2～5次的操作中，在36℃粘度升高，显示为300～600mpa·s，在20℃粘度显示为100mpa·s以下。即使反复进行4次以上的加热和冷却的操作，也维持对热的应答性。表明本发明组合物在36℃时的增稠性与比较例1～3相比维持较强的状态。＜试验例3b＞对于表3所示的实施例9、10，在一定期间反复进行加热和冷却，测定粘度，评价再现性。试验操作与试验例3a同样。结果示于图4。试验例3b的试验结果表明：本发明的实施例即使反复进行加热和冷却的操作，也维持对热的应答性。＜试验例4＞研究表1所示的实施例2和表2所示的比较例1～4的温度与溶液状态(溶胶和凝胶)的关系，求出各水性组合物的凝胶化再现性。对实施例2和比较例1～4的组合物从30℃向36℃升温时的溶液状态(溶胶和凝胶)的关系、以及在30℃破坏凝胶结构后的凝胶化再现性进行评价。使用安东帕公司制流变仪(modularcompactrheometer102)，利用振动测定对作为凝胶化指标的储能弹性模量(g’)和损耗弹性模量(g”)进行测定，求出利用g”/g’求出的损耗角正切(tan(δ))的值。一般而言，认为显示tan(δ)＞1的物质是溶胶，显示tan(δ)＜1的物质是凝胶(ゲルコントロール-ゲルの上手な作り方のゲル化の抑制-，2009年6月，株式会社信息机构发行)。将制备的本发明的实施例和比较例约1ml分别设置于直径约50mm的平行板与温控器用珀耳帖元件之间。珀耳帖元件与平行板的间隙设定为0.5mm。测定试样在测定开始前在5℃保持冷却10分钟。从测定开始起用约1分钟升温至30℃并保持30秒左右。在频率1(hz)、变形5％的试验条件下进行振动测定，接着用约30秒将测定试样升温至36℃，在该状态下维持温度150秒左右。然后，通过在30℃、剪切应力10pa的条件下使平行板旋转，将凝胶结构破坏。再次一边升温至36℃一边进行测定，将这些操作重复10次。第1次的凝胶化行为、和在凝胶化再现性的评价中第5次和第10次的结果示于图5～7。在第1次的凝胶化测定中，比较例4最快实现tan(δ)＜1，凝胶化。然后，按照比较例3、实施例2、比较例2的顺序凝胶化，比较例1不产生在该时间内的凝胶化。凝胶化的顺序与试验例1中36℃下的粘度大致一致。在凝胶化再现性的评价中，比较例1～4随着每次重复操作，向溶胶的转变变差。实施例2虽然向溶胶的转变弱，但即便在第10次的操作中，也维持比比较例长时间的溶胶状态。该结果表明根据本发明的实施例，通过将2种甲基纤维素以适当的比例混合，凝胶化再现性变得良好。试验例3a、3b和4的结果表明本发明的特征通过将各种示出粘度不同的mc混合、配制而得到。＜试验例5a角膜保护作用的评价＞(1)试样溶液与试验例1同样地制备表9的实施例3、比较例5和比较例6。作为对照，添加生理食盐液(光制药)(以下也称为生理盐水)。[表9](2)试验方法将有色家兔(血统；kbt：dutch，搬入时体重1.5～2.0kg，biotech)安乐死，采集角膜(n＝3)。然后，将采集的角膜在35℃、于恒温箱内干燥40分钟。从刚刚开始干燥后起，将在室温下保存的实施例3以及生理盐水和在5℃保存后、在刚要使用前恢复至室温的比较例5和比较例6在采集的角膜上以1分钟的间隔各自滴加10μl×6次(总计60μl)。干燥后，用生理盐水洗涤角膜，使用1％亚甲蓝(nacalaitesque)染色，在400μl的提取液(丙酮(和光纯药工业)：饱和硫酸钠(和光纯药工业)水溶液＝7：3，体积比)中浸渍一昼夜以上，提取残留于角膜上的亚甲蓝，测定各提取液在660nm处的吸光度。结果示于图8。本发明实施例3的吸光度是与比较例5和比较例6或生理食盐液相比较低的结果。试验例5a的结果表明，与生理盐水或比较例5和比较例6这样已有的热凝胶化制剂相比，本发明的实施例3具有抑制角膜干燥的特征。因此，暗示本发明的组合物具有角膜保护作用。＜试验例5b角膜保护作用的评价2＞(1)试样溶液与试验例1同样地制备表9的比较例5、表4的实施例17和表6的实施例32。作为对照，添加生理食盐液(光制药)。(2)试验方法将有色家兔(血统；kbt：dutch，搬入时体重1.5～2.0kg，biotech)安乐死，采集角膜。然后，在采集的角膜上滴加实施例17、实施例32和比较例5各150μl，在35℃、于恒温箱内干燥40分钟。干燥后，用生理盐水洗涤角膜，使用1％亚甲蓝(nacalaitesque)染色，在400μl的提取液(丙酮(和光纯药工业)：饱和硫酸钠(和光纯药工业)水溶液＝7：3，体积比)中浸渍一昼夜以上，提取残留于角膜上的亚甲蓝，测定各提取液在660nm处的吸光度。结果示于图9。本发明的实施例17和实施例32显示比比较例5或生理食盐液低的吸光度。试验例5b的结果表明，与生理盐水或比较例5这样已有的热凝胶化制剂相比，本发明的实施例具有抑制角膜干燥的特征。因此，暗示本发明的组合物具有角膜保护作用。＜试验例6本发明和已有制品的角膜保护作用的比较＞(1)试样溶液作为实施例，与试验例1同样地制备表9的实施例3。作为比较例，将novartispharma株式会社制的systane(注册商标)ultra作为比较例a。另外，将novartispharma株式会社制的systane(注册商标)geldrops作为比较例b使用。作为对照，添加生理食盐液(光制药)。(2)试验方法将白色家兔(血统；kbs：jw，体重3.5kg以上，kitayamalabesco.,ltd.)安乐死，采集角膜(n＝3～7)后，在角膜上分别滴加生理食盐液、实施例3、比较例a和比较例b各150μl。滴加后，将角膜在35℃、于恒温箱内干燥40～50分钟。干燥后，用生理食盐液洗涤角膜，使用1％亚甲蓝(nacalaitesque)染色，在400μl的提取液(丙酮(和光纯药工业)：饱和硫酸钠(和光纯药工业)水溶液＝7：3，体积比)中浸渍一昼夜以上，提取残留于角膜上的亚甲蓝，测定各提取液在660nm处的吸光度。结果示于图10。本发明的实施例3的吸光度与比较例a低，与比较例b相比为同等以上。试验例6的结果暗示，本发明的眼科用水性组合物与非粘性水性制剂比较，具有同等或其以上的障碍防止效果。＜试验例7本发明和市售品的眼表面滞留性的比较＞(1)试样溶液作为实施例，与试验例1同样制备表1的实施例2，填充于滴眼瓶中。作为比较例，与试验例6同样使用比较例a和比较例b。在这些试样溶液中加入fluorescite(注册商标)静注(500mg)，使其浓度为1mg/ml。(2)试验方法将白色家兔(血统；kbs:jw，kitayamalabesco.,ltd.)的眼睑缓慢从眼球上拉开，在角膜上分别滴加30μl的实施例2、比较例a和比较例b后，轻轻地捏上下两个眼睑，强制使其闭眼30秒。滴眼30分钟后，用生理食盐液100μl充分洗涤眼表面后，回收洗涤液，作为检查材料。同时，对于滴眼后强制眨眼下的眼表面的洗涤液的回收，按照以下步骤进行。将眼睑缓慢从眼球上拉开，在角膜上滴加30μl后，轻轻地捏上下两个眼睑，强制使其闭眼30秒，以10秒1次的频率强制使其眨眼。滴眼30分钟后，用生理食盐液100μl充分洗涤眼表面后，回收洗涤液，作为检查材料。测定各检查材料的480nm(激发波长)和520nm(吸收波长)，计算荧光色素浓度。结果示于图11。将眼表面洗涤液中的荧光色素浓度进行比较，结果，不论眨眼与否，本发明的实施例2显示与比较例a同等的荧光色素浓度，显示比比较例b高的荧光色素浓度。试验例7的结果暗示，本发明的组合物在眼表面的滞留性方面比水溶液制剂优异。＜试验例8泪液量的测定＞(1)试样溶液作为实施例，与试验例1同样地制备表1的实施例2，填充到滴眼瓶中。作为对照，使用磷酸缓冲生理盐水(gibco(注册商标)pbsbuffers，lifetechnologiescorporation)。将规定量的苯扎氯铵[烷基的碳原子数：14](苄基二甲基十四烷基氯化铵水合物，东京化成工业株式会社)溶解于微量的乙醇中后，用生理盐水定容，制备0.1(w/v)％bac溶液。(2)试验方法在白色家兔(血统；kbs:jw，kitayamalabesco.,ltd.)的两眼用微管施与0.1(w/v)％bac溶液各20μl，1天2次(早、晚)，连续施与2周。与上述施与时间错开，以在早、晚之间每3个小时施与1次的方式在两眼施与实施例2或磷酸缓冲生理盐水各30μl，1天3次，连续施与2周。实施例2用滴眼瓶施与。磷酸缓冲生理盐水用微量移液器施与。在试验开始前和1周后以及2周后，使用schirmer试纸(あゆみ制药株式会社)采集泪液。结果示于图12和表10。[表10]*平均值±标准偏差对于没有施与实施例和对照的未施与受试物质组，在2周后确认泪液量降低。对于施与磷酸缓冲生理盐水组，在2周后确认泪液量少许增加。另一方面，对于施与本发明实施例2组，确认随着时间推移泪液量增加。由试验例8的结果可知，通过连日施与实施例2，抑制了伴随bac水溶液滴眼的泪液量降低，进而使泪液量增加。＜试验例9对于角膜损伤的效果＞(1)试样溶液作为实施例，与试验例1同样地制备表9的实施例3。作为对照，使用生理盐水(otsukanormalsaline(500ml)(注册商标)、大塚制药株式会社)。作为比较例，将novartispharma公司制的systane(注册商标)ultra作为比较例a。将规定量的苯扎氯铵(东京化成株式会社)溶解于微量的乙醇中后，用生理盐水定容，制备0.1(w/v)％bac溶液。(2)试验方法本试验方法参考yuqiuzhang等的方法(drugandchemicaltoxicology2016.39(4)455-460)。用微量移液器向白色家兔(血统；kbs：jw，kitayamalabesco.,ltd.)的两眼连日施与0.1(w/v)％bac溶液各20μl，1天3次(从早到晚每4小时1次)。施与期间包括施与日为42天。在施与前和施与42天后，使用portableslitlampkowasl-17(兴和株式会社制，以下称为sl-17)观察角膜表面的障碍程度。在施与42天0.1(w/v)％bac溶液后，用微量移液器向白色家兔的两眼(1组各5只，n＝10只眼睛)分别连日施与实施例3、比较例a和生理盐水各30μl，1天4次(从早到晚每2.5～3小时1次)。施与期间包括施与日为12天。将角膜进行荧光素染色后，经过3分钟后用生理盐水洗涤。使用sl-17观察角膜表面的障碍程度。对于各组，计算角膜损伤分数。结果示于图13、14。图14表示未处置(control)、生理盐水、实施例3或者比较例a从开始施与起第12天观察角膜障碍的照片。通过反复施与0.1％bac溶液，确认有重度的角膜障碍。在施与bac溶液结束后，在未处理(control)组和施与生理盐水组中，显示角膜障碍缓慢恢复。另外，施与比较例a组与未处理和施与生理盐水组相比，显示角膜障碍的恢复程度良好。进而，在施与本发明实施例3组中，显示角膜障碍的恢复比任何组都良好。试验例9的结果暗示，通过反复施与实施例3，角膜障碍早期恢复。在体温附近的温度下急剧增稠的本发明眼科用水性组合物在施与生物体时，在施与部位迅速凝胶化而保留，因此能够保持眼表面的泪液。另外，即便在地域、季节等30℃以上的温度下增稠时，仅仅给组合物施加弱的力就容易变化为流动性高的组合物，因此不需要在冷的地方保存，能够携带。当前第1页1 2 3 当前第1页1 2 3