本发明涉及中药有效成分香草酸作为金黄色葡萄球菌的抑制剂的研究开发和应用，具体涉及香草酸在抑制多重耐药金黄色葡萄球菌生长中的应用。
背景技术：
金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)是引起人类感染性疾病的主要致病菌，可引起许多严重感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等。抗生素的广泛使用、过度使用使细菌耐药性不断增加，导致细菌耐药性在全球不断扩散，“超级细菌”不断出现，成为全球关注的焦点。多重耐药菌的产生给临床治疗带来了巨大挑战，例如，无效的治疗不仅促使病情延迟，而且消耗社会资源、加重国家公共财政负担。
在面对细菌耐药性增强的问题上，中草药显示出得天独厚的优势，例如，具有毒副作用小、药源广泛、价格便宜的优点及特性。因而，安全有效的中草药成为人们寻找高效低毒的细菌抑制剂的新来源。
香草酸作为香荚兰豆、香子兰荚，及胡黄连等植物的有效成分之一，国内外对其在抗菌消炎、抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、化感作用、调节神经及促凝血活性方面都有一定的研究，但是关于香草酸抑制细菌生长方面报道较少。
文献(黄玉茜,杨劲峰,梁春浩,陈堔平一,刘欣宇,耿坷睿,姚玉晨,张宇,韩晓日.香草酸对花生种子萌发、幼苗生长及根际微生物区系的影响[j].中国农业科学,2018,51(09):1735-1745.)报道了不同浓度的香草酸溶液均会使花生根际细菌和放线菌的数量降低，抑制根际土壤中细菌和放线菌的生长繁殖，而对土壤真菌的影响呈现低促高抑的现象，即低浓度的香草酸溶液促进花生根际土壤中真菌的生长，而高浓度的香草酸溶液则对真菌生长具有一定的抑制作用。关于将香草酸作为抑制多重耐药金黄色葡萄球菌活性成分的报道尚未发现。
技术实现要素：
本发明针对上述阐述的临床耐药难题，从现存的药用植物资源库入手，挖掘潜在的耐药菌抑制剂，目的在于提供香草酸在抑制多重耐药金黄色葡萄球菌生长中的应用，为开发新型抗生素替代物和解决耐药金黄色葡萄球菌的多重耐药困境提供实践基础。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
香草酸在抑制多重耐药金黄色葡萄球菌生长中的应用。
优选的，所述耐药金黄色葡萄球菌为人源耐利奈唑胺、甲氧苄啶、庆大霉素、环丙沙星、青霉素、头孢唑啉、克林霉素、万古霉素、苯唑西林、哌拉西林中多种抗生素的金黄色葡萄球菌。
优选的，所述香草酸最低杀菌浓度为2.4mg/ml，最小抑菌浓度为0.3mg/ml。
本发明的有益效果体现在：
本发明基于香草酸对人源多重耐药金黄色葡萄球菌的作用的研究，利用香草酸抑制多重耐药金黄色葡萄球菌的生长，为多重耐药金黄色葡萄球菌抑制剂的研究开发和应用提供新的思路，在食品、药品等领域具有广泛的应用价值。
本发明进一步明确了香草酸对耐抗生素利奈唑胺、甲氧苄啶、庆大霉素、环丙沙星、青霉素、头孢唑啉、克林霉素、万古霉素、苯唑西林、哌拉西林的人源金黄色葡萄球菌耐药性的抑制作用，有效缓解或解决多重耐药金黄色葡萄球菌的耐药感染问题，降低病死率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。所述实施例仅用于解释本发明，并非对本发明保护范围的限制。
1、人源金黄色葡萄球菌的药敏实验
本发明以10株人源金黄色葡萄球菌(菌株样本取自疾病预防控制中心)为出发菌株，选用利奈唑胺、甲氧苄啶、庆大霉素、环丙沙星、青霉素、头孢唑啉、克林霉素、万古霉素、苯唑西林、哌拉西林10种常用抗生素的药敏试纸片进行药敏试验。
挑取培养18～24h的纯菌落均匀溶解于2～5ml无菌生理盐水中，调节其浊度与0.5麦氏比浊管等浊。无菌吸取50～200μl菌液，均匀涂布平板，室温下放置3～5min。用无菌镊子按要求将药敏纸片(直径为6mm)紧贴于平板表面，每种药敏片三个平行。将接种好的平板放置于36～37℃孵育16～24h。用0.02mm精度的游标卡尺测定抑菌圈直径，以抑菌圈的直径来判断药物的敏感性，抑菌结果根据美国临床试验室国家标准化管理委员会(clsl2017)标准判定，判定标准见表1。实验结果见表2，结果显示，2#人源金黄色葡萄球菌可以耐受8种临床上常见的抗生素，因此将其作为下一步实验的研究对象。
表1.美国临床试验室国家标准化管理委员会(clsl2017)标准判定结果
表2.人源金黄色葡萄球菌的药敏实验中抑菌圈直径结果
注：表2中抑菌圈直径的单位为mm，数值均为三个平行的平均值；
2、香草酸对多重耐药菌株的抑制作用
为了充分考虑用药安全，本发明以香草酸单一活性成分为研究对象，以万古霉素作为阳性对照，进行耐药性抑制作用的研究。挑取培养18～24h的纯菌落均匀溶解于2～5mllb液体培养基中，调节其浊度与0.5麦氏比浊管等浊，并用酶标仪测定其od600值。用二甲基亚砜配制浓度为30mg/ml的香草酸作为药液，利用试管二倍稀释法将药液、菌液及lb液体培养基加入96孔培养板中过夜培养，不同浓度的药液组别均为三个平行，确保实验数据的可信度。
利用酶标仪测定香草酸对多重耐药金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(mic)。并将mic浓度下的培养液置于无菌的lb液体培养基中继续培养，利用酶标仪测定香草酸对多重耐药金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度(mbc)，实验结果见表3。
表3.香草酸和万古霉素对人源多重耐药金黄色葡萄球菌的抑制结果
由表3可知，香草酸对耐甲氧苄啶、庆大霉素、环丙沙星、青霉素、头孢唑啉、克林霉素、苯唑西林、哌拉西林的多重耐药金黄色葡萄球菌的抑制作用较好，其mic为300μg/ml，mbc为2400μg/ml。
根据以上实验结果，结合中草药解决耐药病原菌的耐药性特点，可通过获得活性单品成分香草酸，直接针对临床主要的多重耐药金黄色葡萄球菌发挥抑制作用，可有效缓解或解决多重耐药金黄色葡萄球菌的耐药感染问题，降低病死率，为抑制人源多重耐药金黄色葡萄球菌提出新的思路，具有重要的实践意义。