本发明涉及一种赤茯苓提取物冻干粉的制备及其用途，属于天然药物化学领域。
背景技术：
：茯苓为多孔菌科真菌茯苓poriacocos(schw.)wolf的干燥菌核，具有利水渗湿，健脾和胃，宁心安神等功效。茯苓在药品、食品、保健品中均有广泛应用，素有“十方九苓”，“餐桌上的中药”之称。茯苓干燥菌核近外皮部的淡红色部分称为“赤茯苓”，其性味甘、淡、平，归心、脾、膀胱经，具有行水、破气、润肺益心和利湿热等功效。赤茯苓富含多糖及三萜酸等成分。植物多糖以及三萜在美白、提高免疫力都具有非常好的效果。但在茯苓加工过程中，赤茯苓常因为产量少、价格低廉被当作废料弃去，造成大量的资源浪费且没有充分发挥其价值。目前，白茯苓相关的美白产品已经开发出来，例如茯苓面膜等。尚未见有关于赤茯苓在护肤品方面，尤其是美白抗衰老方面的研究和应用。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种赤茯苓提取物冻干粉及其用途，旨在将赤茯苓中的活性提取物应用于护肤品中，以起到美白抗衰老的作用。本发明赤茯苓提取物，是以赤茯苓为原料提取后获得，包括如下步骤：（1）将干燥过的赤茯苓进行粉碎并过筛，得到粒度均匀的赤茯苓粉末；（2）将赤茯苓粉末浸渍入纯水中，超声提取后过滤，蒸发浓缩后获得赤茯苓粗提物;（3）将所述赤茯苓粗提物经过吸附树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物；（4）在-20℃~-60℃进行冷冻干燥12~56h，即为赤茯苓提取物冻干粉。将提取所得赤茯苓提取物冻干粉分别进行抗衰老作用的实验研究。此方法与现有的提取方法相比，本发明方法工艺简单，提取物纯度高，操作简便。本发明赤茯苓提取物冻干粉在美白抗衰老方面具有良好的功效。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1：粉碎粒度的选取。1、取过60目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水800ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。2、取过80目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水800ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。3、取过100目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水800ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。4、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水800ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。将上述得到的赤茯苓提取物冻干粉用去离子水配制成0.05mg/ml分别进行自由基清除作用及酪氨酸酶活性的试验：自由基清除试验：试验方法：将不同待测样品溶液2.0ml于试管中,加入2.0ml2×10-4mol/l的dpph溶液,，混合均匀，避光反应30min，在波长513nm处测定其吸光度值。每个浓度重复三次，取平均值作为拟合数据，以保证实验结果的准确性。清除率i（%）=[1-（t-t0）/（c-c0）]×100%式中：t0：2ml水或dmso加2mldpph溶液的吸光度；t：2ml样品溶液加2mldpph溶液的吸光度；c0：2ml水或dmso加2ml水的吸光度；c：2ml样品溶液加2ml水的吸光度。按照上面公式计算清除率，试验结果如表1所示：表1：粉碎粒度6080100300浓度（mg/ml）0.050.050.050.05清除率（%）7.19.913.222.1酪氨酸酶抑制活性研究：试验方法：在96孔酶标板上加入l-酪氨酸（0.5mmol/l）50μl，样品液25μl，混匀后37℃孵育5min，加入酪氨酸酶50μl（250u/ml），混匀后37℃孵育25min，于490nm处测定吸光度值；样品对照组（a2）使用50μlpbs替代50μl酪氨酸酶；空白组（a3）使用25μlpbs替代25μl样品液；空白对照组（a4）使用25μlpbs替代25μl样品液，并使用50μlpbs（0.2mmol/l，ph=6.8）替代50μl酪氨酸酶。使用10μg/ml曲酸作为阳性对照。抑制率(%)=[1-(a1-a2)/(a3-a4)]×100按照上面公式计算抑制率。试验结果如表2所示：表2：粉碎粒度6080100300浓度（mg/ml）0.050.050.050.05抑制率（%）23.829.936.360.1由上表可知，当采用300目为赤茯苓粉末的粉碎粒度时，赤茯苓提取物冻干粉的清除自由基活性及酪氨酸酶抑制活性最佳。实施例2：料液比的选取。1、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。2、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水600ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。3、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水800ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。4、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水1000ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。将上述得到的赤茯苓提取物冻干粉用去离子水配制成0.05mg/ml分别进行自由基清除作用及酪氨酸酶活性的试验，方法同上。实验结果如表3、表4所示：表3：料液比1：201：401：601：80浓度（mg/ml）0.050.050.050.05清除率（%）19.821.920.118.7表4：料液比1：201：401：601：80浓度（mg/ml）0.050.050.050.05抑制率（%）58.761.356.457.1由上表可知，当采用1：40为赤茯苓粉末的料液比时，茯苓提取物冻干粉的清除自由基活性及酪氨酸酶抑制活性最佳。实施例3：吸附树脂型号的选取。1、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。2、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过d101型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。3、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过nka-9型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。将上述得到的赤茯苓提取物冻干粉用去离子水配制成0.05mg/ml分别进行自由基清除作用及酪氨酸酶活性的试验，方法同上。实验结果如表5、表6所示：表5：吸附树脂型号ab-8d101nka-9浓度（mg/ml）0.050.050.05清除率（%）20.918.820.1表6：吸附树脂型号ab-8d101nka-9浓度（mg/ml）0.050.050.05抑制率（%）60.949.954.8由上表可知，当采用ab-8为吸附树脂型号时，茯苓提取物冻干粉的清除自由基活性及酪氨酸酶抑制活性最佳。实施例4：冻干条件的选取。1、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-25℃进行冷冻干燥12h，即得赤茯苓提取物冻干粉。2、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-35℃进行冷冻干燥30h，即得赤茯苓提取物冻干粉。3、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-45℃进行冷冻干燥48h，即得赤茯苓提取物冻干粉。4、取过300目筛的赤茯苓粉末20g，60℃下以纯水400ml浸渍并进行超声提取（240w），超声时间10分钟，过滤后合并滤液，蒸发浓缩至粘稠的膏状并真空干燥，获得赤茯苓粗提物。将赤茯苓粗提物经过ab-8型大孔树脂吸附和纯水洗脱，干燥后获得赤茯苓活性富集提取物。在-55℃进行冷冻干燥56h，即得赤茯苓提取物冻干粉。将上述得到的赤茯苓提取物冻干粉用去离子水配制成0.05mg/ml分别进行自由基清除作用及酪氨酸酶活性的试验，方法同上。实验结果如表7、表8所示：表7：冻干条件-25℃，12h-35℃，30h-45℃，48h-55℃，56h浓度（mg/ml）0.050.050.050.05清除率（%）20.220.122.219.8表8：冻干条件-25℃，12h-35℃，30h-45℃，48h-55℃，56h浓度（mg/ml）0.050.050.050.05抑制率（%）51.355.660.554.2由上表可知，当在-45℃进行冷冻干燥48h时，茯苓提取物冻干粉的清除自由基活性及酪氨酸酶抑制活性最佳。当前第1页12