本发明涉及医药领域，具体涉及一种钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合。
背景技术：
慢性肾病(ckd)，也称为慢性肾脏疾病，临床中，诊断为肾小球肾炎、隐匿性肾炎、肾盂肾炎、过敏性紫癜肾炎、红斑狼疮肾炎、痛风肾、肾病综合征、膜性肾病、肾病综合征、糖尿病肾病、高血压肾病、多囊肾，等等，当这些肾病的发病迁延难愈，时间超过三个月，病人尿液和相关的血液指标出现异常，肾脏病理学、影像学发现异常，或肾脏的肾小球有效滤过率低于60％，都可统称为“慢性肾病”。慢性肾病的诊断经常是筛查已知存在肾脏问题风险的人群的结果。
慢性肾病的鉴定可通过血液检查，例如肌酐。较高浓度的肌酐指示较低的肾小球滤过率，且因此指示降低的肾脏排泄废物的能力。
单位时间内两肾生成滤液的量称为肾小球滤过率(egfr)，肾小球滤过率与肾血浆流量的比值称为滤过分数。
临床中，ckd被分为5期，其中1期是具有≥90的正常gfr(ml/min/1.73m2)的肾损伤；2期是具有轻度gfr降低(gfr60–89)的肾损伤；3期是gfr中度降低(gfr30–59)；4期是gfr重度降低(gfr15–29)；且5期是肾衰竭(gfr<15或透析)。5期ckd通常称作终末期肾病(esrd)且与现已过时的术语慢性肾衰竭(ckf)或慢性肾功能衰竭(crf)同义。
蛋白尿也可为肾脏疾病的标志。白蛋白尿是尿液中存在白蛋白的病症。健康个体的肾能过滤白蛋白。当肾无法正常地从尿液中过滤大分子(诸如白蛋白)时，白蛋白会分泌到尿液中，并通常是肾损伤或盐摄入量过多的病征。在临床中，尿白蛋白可通过试纸条测量，或作为在24小时期间采集的总尿液体积中分泌的蛋白量而直接测量。
蛋白尿已被分为3类，其中a1类反映无蛋白尿，白蛋白正常至轻度增加；a2类反映微量蛋白尿，白蛋白中度增加；a3类反映大量蛋白尿，白蛋白重度增加。
糖尿病是对于存在血液葡萄糖升高的医学术语。患有糖尿病的人要么不能产生胰岛素，产生太少的胰岛素，要么不能响应胰岛素，从而导致葡萄糖在血液中积累。糖尿病的最常见形式是2型糖尿病。糖尿病也可涉及妊娠期糖尿病、1型糖尿病或自体免疫糖尿病。
ii型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病或niddm)是一种涉及葡萄糖代谢异常和胰岛素抵抗以及长期并发症的代谢紊乱，所述长期并发症涉及眼睛、肾脏、神经和血管。
ii型糖尿病的特征在于以下临床病征或症状：血浆葡萄糖浓度持续升高或高血糖；多尿症；多渴症和/或多食症；慢性微血管并发症诸如视网膜病、肾病和神经病变；和大血管并发症，诸如高脂血和高血压，这可导致失明、终末期肾病、截肢和心肌梗塞。
白蛋白尿还可在患有长期糖尿病(i(1)型或ii(2)型糖尿病)的患者中发生。
当肾小球对白蛋白有异常高的渗透性，因而肾渗漏少量白蛋白到尿液中时，会出现微量白蛋白尿。当患者24小时期间的尿白蛋白水平在30mg至300mg的范围内时，则会指示作为糖尿病性肾病病症的微量白蛋白尿。
微量白蛋白尿的替代指标是血清中的肌酸酐水平及白蛋白与肌酸酐的比率。白蛋白/肌酸酐比率(acr)和微量白蛋白尿被定义为acr≥3.5mg/mmol(女性)或≥2.5mg/mmol(男性)，或在两种物质均按质量测量的情况下，被定义为acr在30μg白蛋白/mg肌酸酐与300μg白蛋白/mg肌酸酐之间。
微量白蛋白尿可为肾病的发展及进程的重要预后标志，对于患有糖尿病或高血压的患者而言尤为如此。微量白蛋白尿也是亚临床心血管疾病的指标、血管内皮功能不全的标志以及形成静脉血栓的风险因素。
糖尿病性肾病(dn)是糖尿病的微血管并发症之一，并且其特征在于白蛋白尿持续存在以及肾功能逐渐衰退。高血糖是糖尿病性肾病发作及进程推进的重要因素。
人们已充分了解患有t1dm(1型糖尿病)的患者中糖尿病性肾病的临床进程的特征。起初，可以观察到过度滤过并伴有肾小球滤过率(gfr)增加以及肾血浆流量升高。分析发现，患有t1dm的患者若存在过度滤过的病症，则会使微量白蛋白尿或大量白蛋白尿发生的风险增加到两倍以上。该阶段之后出现gfr下降并发生微量白蛋白尿(被定义为≥30mg/天(或20μg/min)且＜300mg/24h(或＜200μg/min)的尿白蛋白分泌)，这可伴随血压的升高。之后在疾病进程中，随着gfr继续下降，接着会出现明显的蛋白尿(即，大量白蛋白尿)(被定义为＞300mg/天的尿白蛋白分泌)，这与高血压加重相关联。最后，eskd(终末期肾病)进程推进，从而需要肾替代疗法。
对于患有2型糖尿病(t2dm)的患者，临床进程是多变的，主要原因是多发性肾损伤，这不仅包括高血糖，而且包括血管病理，从而导致缺血性肾损伤。然而，其他常见特征可能促使患有t2dm的患者发生肾损伤，包括单个肾单位水平的过度滤过、近端肾小管葡萄糖毒性，以及因钠葡萄糖向肾小管细胞中的增强共转运而对肾小管细胞生长的刺激。
研究已证实，白蛋白尿是用于预测糖尿病性肾病进程的生物标志，也是心血管(cv)风险因素。尿白蛋白分泌升高和gfr降低也独立地与患有t2dm的患者中的心血管预后和肾预后两者的风险相关联，但尚无这些风险因素之间相互作用的证据。白蛋白尿适度升高也与肾病进程的加快相关联。
没有特定治疗明确显示出减缓慢性肾病恶化且重度ckd需要肾替代疗法，其可涉及透析形式，但理想形式为肾移植。
黄蜀葵花为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵abelmoschusmanihot(l.)medic的干燥花，黄蜀葵花最早记载于《嘉佑本草》，分布广泛、资源丰富，《本草纲目》记载：其花气味甘、寒、滑、无毒，主治小便淋及催生，治诸恶疮脓水久不瘥者，作末敷之即愈，为疮家要药，消疽肿，浸油涂汤火伤等。现代医学中，黄蜀葵花的主要有效成分是黄酮类成分，目前对化学成分的研究也集中于黄蜀葵花总黄酮(totalflavoneofa，tfa)及其单体。研究证明具有降低蛋白尿，减轻红细胞尿，减轻肾小管间质病变，消除氧自由基，提高红细胞免疫粘附力，促进人循环免疫复合物(cic)的转运与清除，调节细胞免疫功能，抑制体液免疫反应程度，从而减轻人循环免疫复合物(cic)介导性肾损伤，改善肾功能，达到治疗慢性肾炎(ckd)的目的。
黄葵胶囊已上市销售近二十年，其主要活性成分为黄蜀葵花乙醇提取物，用于ckd临床应用，黄葵胶囊为每粒0.5g(相当于饮片2g)，口服，一次5粒，一日3次。对于黄蜀葵花提取物与钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂的联合使用，尚缺乏相关研究。
因此，具有对于可在患者中，尤其是在存在肾脏疾病风险的患者(例如患有1型或2型糖尿病的患者)中减缓慢性肾病恶化或进展的方法、药物和药物组合物的未满足的医学需求。
技术实现要素：
本发明涉及一种钠-葡萄糖共转运蛋白-2(sglt-2)抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，用于治疗(慢性)肾病，特别是糖尿病肾病。
本发明还涉及一种sglt-2抑制剂在制备与黄蜀葵花提取物联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物中的应用。
所述sglt-2抑制剂是一种降糖药物，包括但不限于canagliflozin(卡格列净)、dapagliflozin(达格列净)、empagliflozin(恩格列净)、ipragliflozin(依格列净)、luseogliflozin(鲁格列净)以及tofogliflozin(托格列净)等，优选为卡格列净。
本发明所述sglt2抑制剂(优选卡格列净)与黄蜀葵花提取物的组合，用于ckd(慢性肾病)患者，所述患者是具有以gfr衡量的3期、4期或者5期的ckd，其任选地可与一种或多种其它活性物质组合使用。
本发明涉及包含某种sglt2抑制剂(优选卡格列净)与黄蜀葵花提取物的组合或药物组合物的某些医疗用途，例如用于治疗和/或预防代谢性疾病、特别是2型糖尿病和/或与其相关的病症(例如糖尿病并发症)，包括具有(慢性)肾病、肾功能不全或肾功能损害的患者，特别是具有以gfr衡量的3期、4期或者5期的(慢性)肾功能损害患者；其任选地与一种或多种其它活性物质组合使用。所述其它活性物质包括抗糖尿病治疗剂和/或血管紧张素转换酶(ace)抑制剂或血管紧张素ii受体阻滞剂(arb))
此外，本发明涉及某种sglt2抑制剂(优选卡格列净)，其用于与黄蜀葵花提取物的组合，例如用于治疗具有2型糖尿病和微量清蛋白尿或大量清蛋白尿，有或无肾功能损害的患者的2型糖尿病，和治疗、减少如下疾病，延迟如下疾病的发病和/或延迟如下疾病的进展：糖尿病肾病，慢性肾病，清蛋白尿，例如微量清蛋白尿或大量清蛋白尿，肾功能损害，视网膜病，神经病，学习或记忆或认知障碍或衰退，神经退行性或认知障碍例如痴呆，和/或大血管并发症例如心或脑血管事件例如中风或心肌梗塞，例如具有ckd(慢性肾病)的患者，特别是具有3期、4期或者5期的(慢性)肾功能损害患者，其任选地与一种或多种其它活性物质组合使用。
本发明涉及sglt2抑制剂(优选卡格列净)，其与黄蜀葵花提取物组合用于治疗和/或预防代谢性疾病(包括延缓代谢性疾病进展或延迟代谢性疾病发病)，特别是糖尿病(特别是2型糖尿病)和/或与其相关的病症(例如糖尿病并发症，特别是糖尿病慢性肾病)；包括(慢性)肾病、肾功能不全或肾功能损害(肾功能损害)患者，特别是具有3期、4期或者5期的(慢性)肾功能损害患者，其任选地与一种或多种其它活性物质组合使用。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物中的应用，其中sglt-2抑制剂优选为卡格列净。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，其中sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的质量比为1:1～200,优选为1:10～150，优选1:15～100，优选1:20～60，更优选为1:30～60可以为1:20、1:30或1:60，其中sglt-2抑制剂优选为卡格列净。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，其中sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物含有的金丝桃苷质量比为100:1.5～225，优选100:15～150，优选100:20～120。可以为100:40、100:75、100:120。100:40、100:75、100:120，其中sglt-2抑制剂优选为卡格列净。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物中或药包的应用，其中sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物质量比为50mg～200mg:0.1～10g，优选50mg～100mg:1～7.5g，优选50mg～100mg:2.0～6.0g，可以为50mg:0.6g,50mg:1.6g,50mg:2.0g；或者100mg:1.2g,100mg:3g，100mg:4g,100mg:6g，其中sglt-2抑制剂优选为卡格列净。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，其中sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物中含有的金丝桃苷质量比为50mg～100mg:1～250mg，优选50mg～100mg:15～150mg优选50mg～100mg:20～120mg，优选50mg～100mg:40～120mg，可以为50mg:20mg,50mg:37mg,50mg:60mg；或者100mg:45mg,100mg:90mg,100mg:120mg。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，可以是sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物形成组合物，进一步可包括药学上可接受的辅料，制成药学可用的药物制剂。所述药物制剂包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂等。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，，也可以是sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物各自独立包装后组合在一起，其中，glt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物独立包装前一步可包括药学上可接受的辅料，制成药学可用的药物制剂。
本本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，或者所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合在制备联合治疗ckd(慢性肾病)特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，或者一种黄蜀葵花提取物在制备与sglt-2抑制剂联合治疗慢性肾病特别是糖尿病肾病的药物或药包中的应用，，还可以进一步包括其他一种或多种其它活性物质，如血管紧张素转换酶(ace)抑制剂氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦等。
本发明另外还提供一种治疗有需要的哺乳动物的与肾病特别是糖尿病肾病相关的方法，该方法包括为所述哺乳动物提供有效量的包括sglt2抑制剂(优选卡格列净)与黄蜀葵花提取物的组合；所述组合进一步可包括与其他任一种一种或多种其它活性物质组合使用，例如acr抑制剂。
所述黄蜀葵花提取物，优选为黄蜀葵花黄酮提取物，主要成分为黄酮类物质，含有金丝桃苷不少于11.5mg/g，进一步的不少于12.5mg/g，进一步优选为1.5-1.9％；更进一步的，所述黄蜀葵花提取物中总黄酮含金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素-3’-葡萄糖苷、棉皮素-8-o-β-d-葡萄糖醛酸苷、杨梅素、槲皮素等成分，提取物中总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
本发明所述黄蜀葵花提取物，优选黄酮含量在15％以上，包括25％以上，优选30％以上，进一步优选50％以上。
所述黄蜀葵花提取物为乙醇提取物，优选为50-95％乙醇回流提取的提取物，进一步优选为80-95％乙醇回流提取的提取物，更进一步优选为955乙醇回流提取的提取物。所述黄蜀葵花提取物由如下方法制备：取黄蜀葵花药材，乙醇加热回流提取，滤过，滤液浓缩，干燥。该乙醇提取物为黄蜀葵花黄酮提取物，主要成分为黄酮类物质，含有金丝桃苷不少于11.5mg/g，进一步的不少于12.5mg/g，进一步优选为1.5-1.9％；。
本发明所述黄蜀葵花提取物可以由如下方法制备：取黄蜀葵花药材，乙醇加热回流提取，滤过，滤液浓缩，干燥。进一步的，优选为由如下方法制备：黄蜀葵花用85％～95％的乙醇，回流提取1～3次，每次1～2小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.20～1.35，浓缩液在0℃～4℃静置24～48小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.0～7.0，浓缩，薄层快速干燥或真空干燥，即得黄蜀葵花提取物。
本发明所述的黄蜀葵花提取物的制备方法可以为：黄蜀葵花用95％的乙醇，回流提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.20，浓缩液在0℃～4℃静置24～48小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.0，将冷藏液缓慢加入薄层快速干燥滚筒槽内，使滚筒槽内冷藏液液面与滚筒体表面刚接触为止，预热滚筒体表面温度至140℃～150℃，气压为0.4～0.5mpa，打开滚筒滚动启动按钮，筒体转速为3～3.5分钟/转，将滚下的浸膏液体涂布在聚四氟乙烯板上降温，待烘干物料冷却变脆，敲碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物。
上述薄层快速干燥操作的条件为：预热薄层快速干燥滚筒体表面温度至135℃～160℃，气压为0.3～0.6mpa，滚筒转速为2～4.5分钟/转，涂布板为塑料板或不锈钢板，塑料板选自聚乙烯版、pvc塑料板、pp塑料板、pe塑料板、聚四氟乙烯板，优选聚四氟乙烯板。
本发明所述的黄蜀葵花提取物的优选制备方法为：黄蜀葵花用95％的乙醇，回流提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.20，浓缩液在0℃～4℃静置24～48小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.0，浓缩后干燥，优选缓慢加入真空带式干燥机内进行真空带式干燥。
本发明所使用的真空带式干燥机具有优点：1.干燥速率快；2.操作简便易控：便于连续生产及实现大生产自动化，由于功率可调整及无惯性的特点，易于及时控制，便于工艺参数的调整和确定；3.干燥时间短；4.产品质量好：与常规干燥方法相比，如常规真空干燥，由于在真空场合下，热量通过对流传递十分困难，只能传导进行，加热速度慢，能耗大，干燥周期长，易出现焦化现象，影响产品质量；减压干燥，由于药液里外不是同时干燥，药液里外温差大，出现里外加热不均匀，易结块，影响产品质量，而本干燥方式克服了常规干燥方法的缺陷，快速干燥，产品质量有较大幅度的提高。
本发明所述的sglt2抑制剂(优选卡格列净)的制备，可参考现有技术进行制备，另外，这些抑制剂，如canagliflozin(卡格列净)、dapagliflozin(达格列净)、empagliflozin(恩格列净)、ipragliflozin(依格列净)、luseogliflozin(鲁格列净)以及tofogliflozin(托格列净)等，在全球范围内均已有上市，可以选择这些抑制剂现有的剂型与黄蜀葵花提取物(例如，苏中药业的独家品种黄葵胶囊)进行组合。
本发明所述的sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合物，可以显著降低尿白蛋白。
本发明所述的sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，可以有效治疗慢性肾脏疾病，尤其是糖尿病肾病。
本发明所述的sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合，可以在较低剂量下有效治疗慢性肾脏疾病，尤其是糖尿病肾病。
本发明所述sglt-2抑制剂与黄蜀葵花提取物的组合的优点：
dn其发病过程渐进、机制复杂，基础是糖脂代谢紊乱，有氧化说、炎症说、血管说等，但dn发病诊断的基本标准是出现蛋白尿，临床上，诊断肾病(肾损害)的金标准是患者尿液中尿蛋白呈阳性，其次，血肌酐与尿素氮也是反映肾功能的必要指标。
因此，本发明以尿蛋白、血肌酐与尿素氮为核心指标，同时观察黄蜀葵花提取物对模型动物糖脂代谢、抗氧化、炎症、纤维化及其它与肾功能相关指标的影响。
通过本发明的研究，发现黄蜀葵花提取物的药理作用可能与其抗炎、抗氧化、降脂、抗纤维化等有关。而由于钠-葡萄糖共转运蛋白-2(sglt-2)抑制剂例如卡格列净、达格列净、恩格列净、依格列净、鲁格列净、托格列净等的治疗肾病效果跟钠-葡萄糖共转运蛋白-2有关，当黄蜀葵提取物在与钠-葡萄糖共转运蛋白-2(sglt-2)抑制剂联治疗糖尿病肾病时，通过多种途径共同作用，起到了协同增效的作用，例如在降低尿蛋白和改善肾病理方面起到了显著的治疗效果，为临床治疗糖尿病肾病提供了一种新的治疗手段。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例1黄蜀葵花提取物的制备
取药材黄蜀葵花4000g，用15倍(质量/体积比)95％的乙醇，回流提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.20，浓缩液在0℃～4℃静置24小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.0，浓缩后缓慢加入真空带式干燥机内，干燥，粉碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物。
提取物按重量百分比金丝桃苷含量不低于1.3％。经多次验证，金丝桃苷含量在1.5-1.9％左右。水分不超过10％。
实施例2黄蜀葵花提取物的制备
取药材黄蜀葵花3000g，用18倍(质量/体积比)85％的乙醇，回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.35，浓缩液在0℃～4℃静置30小时，去除冷藏液的油层，调ph值7.0，浓缩后缓慢加入真空带式干燥机内，干燥，粉碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物。
提取物按重量百分比金丝桃苷的含量在1.3-1.8％左右。水分不超过10％。
实施例3黄蜀葵花提取物的制备
本发明原料药材黄蜀葵花2000g，黄蜀葵花用20倍的90％乙醇，回流提取2次，每次2.5小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.30，浓缩液在0℃～4℃静置48小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.5，将冷藏液缓慢加入薄层快速干燥滚筒槽内，使槽内液面与滚筒体表面刚接触为止，预热滚筒体表面温度至150℃，气压为0.5mpa，打开滚筒滚动启动按钮，筒体转速为3.5分钟/转，将滚下的浸膏液体涂布在聚四氟乙烯板上降温，待烘干物料冷却变脆，粉碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物。
提取物按重量百分比金丝桃苷的含量在1.3-1.8％左右。水分不超过10％。
实施例4黄蜀葵花提取物的制备
取药材黄蜀葵花3000g，黄蜀葵花用19倍95％的乙醇，回流提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液回收乙醇，浓缩滤液至比重1.20，浓缩液在0℃～4℃静置48小时，去除冷藏液的油层，调ph值6.0，浓缩后缓慢加入真空带式干燥机内，100℃下干燥，粉碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物。
提取物按重量百分比金丝桃苷的含量在1.5-1.9％左右。水分不超过10％。
实施例5黄蜀葵花提取物对dn大鼠的影响
sd大鼠，雄性，spf级，80只。10只作为正常组，其余70只以高脂高糖饲料联合stz(链脲佐菌素)复制大鼠糖尿病肾病模型，造模成功的大鼠随机分成7组，每组10只，分组与给药设计如下：
模型组：造模后灌胃给予体积蒸馏水；
模型+卡格列净卡格列净5mg/kg组：造模后灌胃给予卡格列净5mg/kg；
模型+卡格列净卡格列净10mg/kg组：造模后灌胃给予卡格列净10mg/kg；
模型+黄蜀葵花提取物0.3g/kg组：造模后灌胃给予黄蜀葵花提取物0.3g/kg；
模型+黄蜀葵花提取物0.6g/kg组：造模后灌胃给予黄蜀葵花提取物0.6g/kg；
模型+卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.3g/kg组：造模后灌胃给予卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.3g/kg；
模型+卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.6g/kg组：造模后灌胃给予卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.6g/kg；
同时设预留的正常对照组(简称正常组)：等体积蒸馏水灌胃；
分组后各组大鼠每天上午灌胃给药一次，连续12周。给药期间，大鼠自由进食饮水；对照组大鼠饲以普通饲料，其余各组大鼠均以高脂饲料饲养。其中黄蜀葵花提取物为按实施例1制备得到，金丝桃苷含量在1.5％。
给药结束后，应用代谢笼收集每个大鼠的24h尿液，进行24h尿蛋白定量检测；大鼠二氧化碳麻醉后，腹主动脉放血，解剖采集左肾，10％中性福尔马林固定，he染色后进行病理检测。
5.1对dn大鼠24h尿蛋白定量的影响
结果表明，经12周给药后，模型组大鼠24h尿蛋白定量明显高于对照组，且有统计学意义(p＜0.01)；各给药组24h尿蛋白定量明显下降且具有统计学意义；卡格列净和黄蜀葵花提取物高剂量的24h尿蛋白定量分别比低剂量组效果与模型组低，且有统计学意义；两个联合给药组与单独给药组比较，24h尿蛋白定量均明显下降且具有统计学意义，详见表1。
表1给药12周对dn大鼠24h尿蛋白定量的影响
*：与对照组比较，p＜0.05；#：与模型组比较，p＜0.05；★：与模型+卡格列净10mg/kg组比较，p＜0.05；☆：与模型+黄蜀葵花提取物0.6g/kg组比较，p＜0.05；◇：与模型+卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.3g/kg组，p＜0.05。
5.2对dn大鼠肾脏的影响
结果表明：与正常组比较，模型组和各给药组，大鼠肾脏出现不同程度明显系膜细胞增生及基质增多，间质炎症细胞浸润及萎缩，肾小球硬化或纤维化，肾小管上皮细胞变性和脱落；经药物干预后，卡格列净组系膜细胞增生及基质增多得到明显改善，且10g/kg组优于5g/kg组；黄蜀葵花提取物组均得到明显改善，且0.6g/kg组优于0.3g/kg组；联合用药组表现为有或不明显的病理变化，优于卡格列净和黄蜀葵花提取物组，且模型+卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.6g/kg组优于模型+卡格列净10mg/kg+黄蜀葵花提取物0.3g/kg组详，见表2。
表2dn大鼠肾脏病理学检查
注：a系膜细胞增生及基质增多；b间质炎症细胞浸润、萎缩；c肾小球硬化或纤维化；d肾小管上皮细胞变性、脱落；“/”无；“+/”不明显；“+”有；“++”较明显；“+++”很明显。
综上所述：与卡格列净，黄蜀葵花提取物单独应用相比，卡格列净和黄蜀葵花提取物联合应用对能更有效降低糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白定量，减轻肾脏损伤。