鲁斯可皂苷元防治PM2.5导致的机体器官损伤的医药用途的制作方法

本发明涉及天然药物领域，具体涉及鲁斯可皂苷元在预防和/或治疗pm2.5导致的机体器官损伤方面的用途。

背景技术：

空气污染被列为全球第五大死亡风险，每年大约导致全球500万人死亡，我国每年大约一百多万人死于空气污染((1)2017年《中国生态环境状况公报》(摘录一)[j].环境保护,2018,46(11):31-38.(2)collaboratorsgrf.global,regional,andnationalcomparativeriskassessmentof84behavioural,environmentalandoccupational,andmetabolicrisksorclustersofrisksfor195countriesandterritories,1990-2017:asystematicanalysisfortheglobalburdenofdiseasestudy2017[j].lancet,2018,392:1923-1994.(3)chenyy,ebensteinbavraham,greenstonecmichael,etal.evidenceontheimpactofsustainedexposuretoairpollutiononlifeexpectancyfromchina’shuairiverpolicy[j].pnas,2013,110(32):12936-12941.)。细颗粒物，又称pm2.5，是指环境空气中空气动力学当量直径≤2.5μm的颗粒物。它能够长时间悬浮于大气中，输送距离远，粒径小，比表面积大，易吸附重金属、微生物、多环芳烃等有害物质，对人体健康危害极大((4)陈冬梅,苑红宇.pm2.5对人体呼吸系统及心血管系统影响的研究[j].沈阳医学院学报,2014,16(1):39-41.(5)lizs,wenqm,zhangrl.sources,healtheffectsandcontrolstrategiesofindoorfineparticulatematter(pm2.5):areview[j].scienceofthetotalenvironment,2017,586:610-622.)。细颗粒物吸入至肺后，顺利通过阻隔进入肺深部，主要沉积于肺泡((6)kulkarnin,piersen,rushtonl,etal.carboninairwaymacrophagesandlungfunctioninchildren[j].thenewenglandandjournalofmedicine,2006,355(1):21-30.)。沉积于肺泡的细颗粒物能够透过血气屏障，随着血液循环作用于全身，除呼吸系统外，细颗粒物与心、肝、脾、肾脏的病变也有明显相关性((7)lid,liy,lig,etal.fluorescentreconstitutionondepositionofpm2.5inlungandextrapulmonaryorgans[j].pnas,2019,116(7):2488-2493.(8)schraufnagelde,balmesjr,cowlct,etal.airpollutionandnoncommunicablediseases:areviewbytheforumofinternationalrespiratorysocieties'environmentalcommittee,part2:airpollutionandorgansystems[j].chest,2019,155(2):417-426.)。因此，寻找能够针对防治细颗粒物空气污染所致机体多器官损伤，特别是肺损伤的药物具有深远的意义。

技术实现要素：

本发明公开了鲁斯可皂苷元防治pm2.5导致的机体器官损伤的医药用途。

或者，本发明公开了鲁斯可皂苷元在用于制备防治pm2.5导致的机体器官损伤的药物中的用途。

本发明所述的鲁斯可皂苷元为中药麦冬(ophiopogonjaponicus(thunb.)kergawl.)的甾体皂苷类有效成分。

本发明所述的鲁斯可皂苷元可以按照本领域公开的方法从中药麦冬中提取、分离、纯化获得。

在一种实施例中，本发明所述的机体器官损伤包括急性肺损伤、肝损伤、肾损伤或脾损伤中的一种或多种。

在一种具体的实施方式中，本发明所述的机体器官损伤包括急性肺损伤、肝损伤、肾损伤和脾损伤。

在一种具体实施方式中，本发明所述的机体多器官损伤为急性肺损伤。

本发明通过脏器指数测定、病理形态学观察及血清谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)测定证实鲁斯可皂苷元显著改善细颗粒物诱导的多器官损伤，具有广阔的应用前景，特别是应用于细颗粒物导致的诱导急性肺损伤的治疗。采用颗粒物导致的诱导小鼠急性肺损伤模型，通过病理形态学观察，测定肺干湿比、肺泡灌洗液中炎细胞数目和炎症因子的表达以及髓过氧化物酶活力、肺微血管蛋白渗漏等指标证实鲁斯可皂苷元具有显著改善细颗粒物诱导的急性肺损伤活性，作用与同剂量地塞米松注射液效果相当，提示鲁斯可皂苷元可用于防治急性肺损伤。

附图说明

图1为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠脾组织损伤(n＝6)。^##p<0.01vs.假手术组；^**p<0.01vs.模型组；

图2为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠肾、脾病理结构损伤；

图3为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠肝功能损伤(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^**p<0.01vs.模型组；

图4为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺组织形态和水肿(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^**p<0.01vs.模型组；

图5为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺组织病理结构损伤(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^**p<0.01vs.模型组；

图6为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎细胞数目(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^*p<0.05，^**p<0.01vs.模型组；

图7为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子表达(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^*p<0.05，^**p<0.01vs.模型组；

图8为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠mpo活力(n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^*p<0.05，^**p<0.01vs.模型组；

图9为鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺血管蛋白渗漏(x±sd，n＝6)；^##p<0.01vs.假手术组；^**p<0.01vs.模型组。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，凡在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明的保护范围之内。下面实施例未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的公知手段。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

若无特别说明，本发明实施例采用如下造模和分组方法：

将icr小鼠随机分为6组，即假手术组、模型组、模型组+低剂量鲁斯可皂苷元(0.1mg/kg)、模型+中剂量鲁斯可皂苷元(0.3mg/kg)，模型+高剂量鲁斯可皂苷元(1mg/kg)，模型+地塞米松(1mg/kg)组。鲁斯可皂苷元提前1h灌胃给药，地塞米松组进行尾静脉注射。除假手术组外，其他五组气管滴注细颗粒物混悬液(50mg/kg)，假手术组气管滴注等体积生理盐水，气管滴注均为24h。

若无特别说明，本发明实施例所采用的鲁斯可皂苷元为按照本领域公开的常规提取方法从中药麦冬中提取、分离、纯化获得，例如按照以下方法获得：短葶山麦冬以75％乙醇提取，并通过大孔树脂富集得到总皂苷。进而用10％硫酸水溶液热回流水解，水解液用氯仿进行萃取，再反复采用硅胶、mci、rp-18等柱层析进行分离，并利用重结晶以及制备薄层结合制备液相等分离技术进行分离、纯化，得到鲁斯可皂苷元，其为25r和25s鲁斯可皂苷元异构体混合物。

实施例1鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导多器官损伤的改善作用

实验方法：

a)器官脏器指数测定

小鼠造模后24h称重，记为小鼠体重，取下全肝、肾、脾，精准测定脏器湿重，记为各脏器重量，计算各脏器重量/体重比值。

b)组织病理观察

取小鼠肝、肾、脾，经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片厚约4μm，he染色，病理专业人员阅片。

实验结果：

a)鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠脾组织损伤

如图1所示，细颗粒物诱导下小鼠脾组织出现显著萎缩，不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)干预后均抑制脾萎缩，且高剂量(1mg/kg)对细颗粒物诱导脾萎缩改善效果最显著。表明鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导脾组织损伤具有一定的改善作用。

b)鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠肾、脾病理结构损伤

如图2(a)所示，模型组小鼠肾脏有轻微炎性浸润，如图2(b)所示，脾脏存在巨核细胞增多，髓窦扩张，中度髓外造血现象，充有多量红细胞等现象。不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)干预后，肾、脾损伤得到改善。高剂量鲁斯可皂苷元对肾、脾损伤改善效果最显著。

c)鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导小鼠肝脏功能损伤

如图3所示，模型组alt、ast有轻微升高，表明细颗粒物即使短期暴露也能诱导alt、ast等肝功能炎性指标轻微上升，提示肝脏存在轻微炎症反应。不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)干预后均抑制肝组织alt、ast水平。高剂量鲁斯可皂苷元对肝损伤改善效果最显著。

实施例2鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺病理损伤的改善作用实验方法：

a)肺组织湿重/干重比值的测定

将icr小鼠随机分为6组，即假手术组、模型组、模型组+低剂量鲁斯可皂苷元(0.1mg/kg)、模型+中剂量鲁斯可皂苷元(0.3mg/kg)，模型+高剂量鲁斯可皂苷元(1mg/kg)，模型+地塞米松(1mg/kg)组。鲁斯可皂苷元提前1h灌胃给药，地塞米松组进行尾静脉注射。除假手术组外，其他五组气管滴注细颗粒物混悬液(50mg/kg)，假手术组气管滴注等体积生理盐水。气管滴注24h后处死小鼠，进行下列指标检测。

小鼠造模后24h称重，记为小鼠体重，取下全肺，精准测定全肺重量，记为肺组织湿重，将肺组织置于120℃的烘箱中烘干48h至恒重记为肺组织干重。计算肺组织湿重/肺组织干重比值记为肺湿重/干重。

b)肺组织病理观察

取小鼠右肺上叶，经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片厚约4μm，he染色，病理专业人员阅片并评分。评分标准：根据病变轻重程度评分，分别评为0.5分(轻微)，1分(轻度)，2分(中度)，3分(重度)，4分(极重度)，无明显病变为0分。累加所有分数，计算出每组每只动物的均分(x±sd)。

实验结果：

a)鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺组织形态和水肿

如图4(a)所示，假手术组肺色泽粉润，光滑且弹性较好，无明显异常损伤，而模型组肺组织有黑色细颗粒物大量存在，色泽暗黑，伴有出血现象发生，血管周围可见炎性浸润，不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松给药后，肺组织损伤有不同程度减轻，且具有剂量依赖性，高剂量组改善作用最显著。如图4(b)所示不同剂量鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺水肿均有显著的改善作用。

b)鲁斯可皂苷元改善细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺组织病理结构损伤

如图5(a)所示，假手术组结构清晰，肺泡壁无充血，无炎细胞浸润，上皮细胞内杯状细胞未见增多，腔内无炎性渗出物。而模型组肺组织结构消失，呈实变状，肺泡腔内充有大量中性粒细胞为主的渗出物。肺组织支气管和血管周围可见轻微或轻度纤维组织增生，并有细颗粒物沉积于肺间质。给予不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)后，损伤均有显著减轻。由图5(b)肺组织病理评分结果可见不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松对模型下病理损伤均有显著抑制作用，且高剂量改善效果最佳。

实施例3鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺部炎症的改善作用

实验方法：

a)肺泡灌洗液中炎细胞和炎症因子的表达

造模24h后处死小鼠，随后立即剥离出气管，用4号针头注射器进行肺泡灌洗，500μlpbs反复灌洗3次，回收的肺泡灌洗液4℃2500rpm离心10min，分离上清液和沉淀，进行下一步操作。上清液用于检测肺泡灌洗液中il-1β、il-6、no等炎症因子的表达。沉淀重悬于400μlpbs，用血球细胞分析仪进行常规细胞分类统计混悬液白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数。

b)血清中炎症因子的检测

造模后24h，眼眶取血于1.5mlep管中，静置30min，3500rpm离心10min，取上清，即为血清，于-70℃保存。按elisa试剂盒检测血清炎症因子的表达。

c)mpo的测定

小鼠处死后取肺，放入5mlep管中。剪碎组织，组织与生理盐水按1:9，用电动匀浆器匀浆，10000rpm，10s，重复3次。将匀浆液转移入ep管中，4℃3500rpm离心15min。取上清，于-70℃保存。按mpo试剂盒检测匀浆液mpo活力。

实验结果：

a)鲁斯可皂苷元降低细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎细胞数目

如图6所示，与假手术组相比，模型组肺泡灌洗液中白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数量升高，不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)给药后均对上述炎细胞数量有抑制作用，且低剂量(0.1mg/kg)和高剂量组(1mg/kg)效果更显著。

b)鲁斯可皂苷元降低细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子表达

如图7所示，与假手术组相比，模型组肺泡灌洗液中炎症因子il-1β、il-6、no水平升高，不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)给药后均对上述炎症因子表达有明显抑制作用，且高剂量组(1mg/kg)效果更显著。

c)鲁斯可皂苷元降低细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠mpo活力

如图8所示，与假手术组相比，模型组小鼠肺组织、肺泡灌洗液及血清中mpo活力显著增大，而不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)给药均抑制细颗粒物诱导的mpo活化，高剂量组(1mg/kg)对mpo活化抑制作用最显著。

实施例4鲁斯可皂苷元对细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺血管蛋白渗漏的改善作用

实验方法：

伊文思蓝方法检测肺血管通透性

造模22h后，尾静脉注射伊文思蓝(50mg/kg)，2h后处死小鼠，解剖，用生理盐水进行心脏灌洗，取肺，拍照。吸除多余水分，称重，液氮速冻，按100mg肺组织：1ml甲酰胺进行匀浆，转移至2mlep管中，60℃孵育18h，5000rpm，离心30min，取上清，620nm波长测定，按evans标曲计算含量。

实验结果：

鲁斯可皂苷元抑制细颗粒物诱导急性肺损伤小鼠肺血管蛋白渗漏

如图9所示，模型组小鼠肺组织中白蛋白渗漏及肺泡灌洗液总蛋白含量显著增加，而不同剂量鲁斯可皂苷元(0.1，0.3，1mg/kg)及地塞米松(1mg/kg)给药均可抑制肺血管白蛋白渗漏及肺泡灌洗液总蛋白含量，改善肺泡和微血管结构的完整性，高剂量鲁斯可皂苷元改善作用最佳。