本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种蓝莓花发酵原浆及其制备方法和应用。
背景技术：
蓝莓(vacciniumspp.)属杜鹃花科(rhododendron)越橘属(vacciniuml.)多年生落叶浆果小乔木。蓝莓富含维生素、微量元素、花青素等，尤其是花青素含量明显高于其他水果，有很强的抗氧化性，可延缓衰老、有效预防动脉硬化、增强心脑功能等功用，是联合国粮农组织录入的人类五大健康食品之一。蓝莓一般在3月上、中旬开花，而北方则是4-5月，花期一般为15-20d，最长可达40d。蓝莓花中富含黄酮等营养物质。目前，国内外常见对蓝莓果、皮的成分分析及综合开发利用，而忽略了蓝莓花的综合利用，大量的蓝莓花被浪费，也是对蓝莓附加效益的浪费。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种蓝莓花发酵原浆及其制备方法，使得所制备的蓝莓花发酵原浆具备更高的抗氧化能力；
本发明的另外一个目的在于提供一种蓝莓花发酵原浆及其制备方法，使得所制备的蓝莓花发酵原浆含有更多的总黄酮和总酚；
本发明的另外一个目的在于提供上述蓝莓花发酵原浆在制备化妆品或保健品中的应用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种蓝莓花发酵原浆，以蓝莓花为发酵原料，采用葡萄酒果酒专用酵母sy和丹尼斯克yo-mix300乳酸菌共同发酵后获得。
针对目前缺少适合于蓝莓花的发酵工艺的问题，本发明主要从发酵菌种的选择上出发，以特定的酵母菌和乳酸菌联合发酵，能够获得较高抗氧化能力以及较高含量的总黄酮和总酚的发酵原浆。
同时，本发明还提供了所述蓝莓花发酵原浆的制备方法，将葡萄酒果酒专用酵母sy和丹尼斯克yo-mix300乳酸菌进行第一次活化后，菌体分别接种至蓝莓花培养基中再次活化，活化后同时接种于蓝莓花培养基中发酵，发酵后灭活获得蓝莓花发酵原浆；所述蓝莓花培养基为包含蓝莓花和葡萄糖的液体培养基。
作为优选，所述葡萄酒果酒专用酵母sy第一次活化采用yepd培养基进行活化；在本发明具体实施方式，所述yepd培养基配方为每升培养基含酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，余量水，自然ph值。在本发明中，葡萄酒果酒专用酵母sy第一次活化时进行两次yepd培养活化：
挑取适量(一般为0.1％接种量)葡萄酒果酒专用酵母sy接种到10mlyepd液体培养液，30℃恒温培养箱中摇床培养18h进行一级培养，再将一级培养的全部菌体加入到10mlyepd液体培养基进行二级培养，30℃恒温培养箱摇床培养24h；活化后取8-10ml用于第二次活化。
作为优选，所述丹尼斯克yo-mix300乳酸菌第一次活化采用mrs培养基进行活化；在本发明具体实施方式中，所述mrs培养基的配方为每升培养基含葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母提取物5g，无水乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，硫酸锰0.25g，硫酸镁0.5g，吐温-801ml，余量水，ph值6.2。在本发明中，丹尼斯克yo-mix300乳酸菌第一次活化时进行两次mrs培养活化：
挑取适量(一般为0.1％接种量)丹尼斯克yo-mix300乳酸菌接种到10mlmrs液体培养液，37℃恒温培养箱中静置培养20h进行一级培养，再将一级培养的全部菌体加入到90mlmrs液体培养基进行二级培养，37℃恒温培养箱静置培养24h；活化后取8-10ml用于第二次活化。
作为优选，两个菌的第二次活化条件均参照第一次活化的条件。
作为优选，所述发酵时的接种量为每个菌种5％接种量，所述发酵为20-30℃下恒温静置发酵2-7d。
作为优选，所述蓝莓花培养基为每100ml中含有蓝莓花2-4g，葡萄糖3g，余量水。
按照本发明制备方法获得的蓝莓花发酵原浆，其稀释20倍后的ddph清除率在88％左右，发酵原浆的超氧阴离子清除率达到了30％以上，而其他各对照组的效果均明显低于本发明的蓝莓发酵原浆；同时，在总黄酮和总酚含量上，各对照组也明显低于本发明发酵原浆。上述结果表明本发明蓝莓花发酵原浆具备较高的抗氧化能力，同时由于高含量的总黄酮和总酚，使其具备除抗氧化能力之外的其他多种保健功效。基于上述的技术效果，本发明提出了所述蓝莓花发酵原浆在制备化妆品或保健品中的应用。
由以上技术方案可知，本发明选择葡萄酒果酒专用酵母sy和丹尼斯克yo-mix300乳酸菌共同作用于蓝莓花的发酵中，所制备的发酵原浆具备较高的清除dpph自由基活性和清除超氧阴根离子活性，以及含有更多的总黄酮和总酚，可以作为抗氧化保健品和化妆品的有效成分。
具体实施方式
本发明公开了一种蓝莓花发酵原浆及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述蓝莓花发酵原浆及其制备方法和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的蓝莓花发酵原浆及其制备方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
在具体实施例中，对比试验中除应有的技术区别外，其余所用原料、试剂等试验环境保持一致；
本发明所用蓝莓花购自湖南星城明月生物科技发展有限公司，粉碎后过50-80筛网。本发明所用酿酒酵母(葡萄酒果酒专用酵母sy)购自安琪酵母有限公司。所用丹尼斯克yo-mix300乳酸菌购自于丹尼斯克。
本发明按照dpph法检测dpph自由基的清除率，具体方法如下：
吸取不同浓度的待测溶液2.0ml，加入0.2mol/ldpph溶液2.0ml，摇匀，放置30min。以无水乙醇调零，在517nm处测定试样的吸光度(aj)。同时，在517nm处测定对照组(样品溶液2.0ml+无水乙醇2.0ml)混合液的吸光度(ai)，在517nm处再测定2.0mldpph溶液与2.0ml无水乙醇的吸光度(a0)，dpph清除率(％)＝[1-(aj-ai)/a0]×100％，式中:aj为1ml的dpph+1ml样品的吸光度；ai为1ml溶剂+1ml样品的吸光度；a0为1mldpph+1ml溶剂的吸光度。
超氧阴离子自由基的清除检测方法如下：
取5.7ml的50mmol/lph8.2的tris-hcl缓冲液于10mlep管中，向其中加入0.2ml样液，混匀后于25℃保温10min，然后加入于25℃预热的10mmol/l的邻苯三酚溶液0.1ml，总体积为6ml，迅速摇匀后用紫外-可见分光光度计记录其在320nm波长处1min内吸光度的增加值(as)。计算线性范围内每分钟吸光度的增加值。另取试剂同上，将样液用等体积水替代，同样测定其在320nm波长下，1min内吸光度的增加值(a0)。则
超氧阴离子自由基清除率(％)＝(a0-as)/a0×100％
以下就本发明所提供的一种蓝莓花发酵原浆及其制备方法和应用做进一步说明。
实施例1：制备本发明蓝莓花发酵原浆
1、菌种活化
mrs培养基：葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母提取物5g，无水乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，硫酸锰0.25g，硫酸镁0.5g，吐温-801ml，(固体培养基加入琼脂20g)蒸馏水1000ml，ph值调整到6.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。
yepd培养基：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，(固体培养基加入琼脂20g)蒸馏水1000ml，自然ph值，115℃高压蒸汽灭菌30min。
挑取0.01g葡萄酒果酒专用酵母sy接种到10mlyepd液体培养液，30℃恒温培养箱中摇床培养18h进行一级培养，再将一级培养的全部菌体加入到10mlyepd液体培养基进行二级培养，30℃恒温培养箱摇床培养24h。
挑取0.01g丹尼斯克yo-mix300乳酸菌接种到10mlmrs液体培养液，37℃恒温培养箱中静置培养20h进行一级培养，再将一级培养的全部菌体加入到90mlmrs液体培养基进行二级培养，37℃恒温培养箱静置培养24h。
2、发酵原浆的制备
各取8-10ml活化好的葡萄酒果酒专用酵母sy菌液或丹尼斯克yo-mix300乳酸菌菌液，7000rpm/min离心5min，弃上清液，无菌生理盐水清洗2次后，将菌体沉淀全部接种到蓝莓花培养基(蓝莓花2-4g，葡萄糖3g，水100毫升)中，将酵母菌和乳酸菌进行活化，活化后各按照,5％的比例同时接种于制备好的蓝莓花培养基中，后置于30℃恒温培养箱中进行发酵7d，取出。发酵第7d对发酵液进行取样，对发酵液的ph值、可溶性固形物含量、菌落总数、蛋白质、粗多糖、总黄酮和总酚进行测定。
本发明所制备的蓝莓花发酵原浆为粘稠液体，ph值3.2-3.7，可溶性固形物含量为2-4.5％，离心过滤后菌落总数小于10cfu/ml，无致病菌检出。本发明所获得的蓝莓花发酵原浆含蛋白质2.5-3g/kg，粗多糖4-4.5g/kg，总黄酮0.086g/kg(以芦丁计)、总酚0.316g/kg。
实施例2：dpph自由基和超氧阴离子自由基的清除率对比试验
1、试验分组
(1)实施例1发酵原浆组；
(2)蓝莓果发酵组；将新鲜的蓝莓洗净，与水1:1等比例混合放入到榨汁机内打碎，灌装入无菌的收三角瓶中，巴氏杀菌后冷却，以其为发酵原料按照实施例1发酵方法进行同样的发酵；
(3)蓝莓花自然发酵组；10g晒干的蓝莓花(水分含量8％以下)，加入200毫升的水，用打浆机打浆后，加入8％蔗糖，密封后自然发酵，发酵7天后取样检测。
(4)葡萄酒果酒专用酵母sy+丹尼斯克howarutmdophilus－嗜酸乳杆菌(ncfm)发酵组；以该两种菌按照实施例1发酵工艺进行发酵，简称为对照菌种组；
2、试验结果
表1
由表1可以清楚看到，蓝莓花的发酵有其适合的菌种选择，自然发酵以及替换其中的乳酸菌都不能实现较高的ddph清除率和超氧阴离子清除率；同时，葡萄酒果酒专用酵母sy和丹尼斯克yo-mix300乳酸菌比较适合用于蓝莓花的发酵，而不适用于蓝莓果的发酵，用于蓝莓果的发酵中会降低ddph清除率和超氧阴离子清除率，这说明蓝莓的各个部位的发酵菌种并不通用。
实施例3：发酵原浆生化指标的测定
参照实施例2的分组，在相同的测定方法下对各组的发酵液的ph值、可溶性固形物含量、菌落总数、蛋白质、粗多糖、总黄酮和总酚进行测定，结果见表2。
表2
由表2可以清楚看到，按照本发明的发酵工艺能够获得含量较高的总黄酮和总酚的发酵液，而更换发酵原料、发酵菌种都不能达到预期的目的，两者的含量均显著低于本发明的发酵原浆，这与实施例2中的结论一致，蓝莓花有其适合的发酵菌种，蓝莓的各个部位的发酵菌种并不通用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。