抗TIM-3抗体的制作方法

抗tim-3抗体
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年6月21日提交的第62/864,835号美国临时申请的优先权，并通过引用将其整体纳入本文用于所有目的。
3.序列表的并入
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背景技术：

5.含t细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3(tim-3)，也称为甲型肝炎病毒细胞受体2(havcr2)，是一种i型跨膜蛋白，其作为免疫反应的关键调节剂起作用。tim-3最初是在活化的ifn-γ产生型的t细胞(例如，1型辅助cd4
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t细胞和细胞毒性cd8
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t细胞)上识别的，并显示在与半乳凝素-9结合后诱导t细胞死亡或耗竭(monney等，2002)。最近的研究表明，tim-3表达在调节许多先天免疫细胞(例如，巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、肥大细胞和自然杀伤细胞)的活性中也很重要(han等，2013)。
6.与许多抑制性受体(例如，pd-1和ctla-4)一样，tim-3的表达与许多类型的慢性疾病相关，包括癌症。已在晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌或滤泡性b细胞非霍奇金淋巴瘤患者中检测到tim-3
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t细胞。并且tim-3
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调节性t细胞的存在已被认为是肺癌进展的有效指标(anderson，2014)。
7.已经识别了tim-3的几种潜在配体：半乳凝素-9、hmgb1、脑信号蛋白-4a、ceacam-1、ilt-4和磷脂酰丝氨酸(ptdser或ps)。ps是一种重要的细胞膜成分，通常位于细胞膜的内叶。但随着细胞发生凋亡，ps会重新分布并暴露于外膜。在许多肿瘤细胞系中也观察到这种重新分布(riedl等，2011)。tim-3与ps的结合可能对吞噬作用和交叉呈递至关重要(nakayama等，2009)。
8.研究显示tim-3与抑制性受体pd-1之间的密切关系。例如，许多肿瘤特异性t细胞同时表达pd-1和tim-3，与仅表达pd-1或tim-3的t细胞相比，这些t细胞的功能更失调(fourcade等，2010)。
9.因此，需要改进的治疗癌症的方法，例如治疗性单克隆抗体。用于这种改进的治疗方法的药物可包含特异性结合至tim-3并逆转或部分逆转tim-3介导的抗肿瘤免疫反应抑制的抗体或抗体片段。


技术实现要素：

10.提供了识别和特异性结合人tim-3的抗体。在一个实施方式中，本公开提供了一种结合至seq id no:1的抗体。
11.序列简要说明
12.表1
13.14.15.16.17.18.19.20.21.22.23.24.25.26.具体实施方式
27.本公开提供了能够结合至tim-3的抗体。在一个实施方式中，本公开提供了一种能结合至seq id no:1的分离的抗体。
28.抗体
29.本公开提供了能特异性结合至seq id no:1的抗体。如本文所用，术语“抗体”包括能与相同抗原结合的全长免疫球蛋白和抗体片段两者。抗体可以是例如单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。如本文所用，术语“抗原结合片段”、“片段”和“抗体片段”可互换使用，指包含全长抗体的部分的任何片段，通常至少是其抗原结合部分或可变区。抗体片段的示例包括但不限于双抗体、单链抗体分子、多特异性抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv或scfv。
30.短语“治疗有效”旨在限定用于治疗疾病或病症或影响临床终点的活性成分的量。
31.术语“治疗上可接受的”是指适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激和过敏反应的那些化合物(或盐、前药、互变异构体、两性离子形式等)，其与合理的益处/风险比相称，并且有效于其预期用途。
32.如本文所用，术语“治疗”、“治疗性”等是指改善疾病，以减少、改善或消除其原因、其进展、其严重性或其一种或多种症状，或以其它方式有益地改变对象的疾病。对患者的“治疗”或“治疗性”意在包括预防。治疗在本质上也可以是占先的，即它可以包括预防暴露
no:110，seq id no:111，seq id no:112，seq id no:113，seq id no:114，seq id no:115，seq id no:116，seq id no:117，seq id no:118，seq id no:119，seq id no:120，seq id no:121，seq id no:122，seq id no:123，seq id no:124，seq id no:125，seq id no:126，seq id no:127，seq id no:128，seq id no:129，seq id no:130，seq id no:131，seq id no:132，seq id no:133，seq id no:134，seq id no:135，seq id no:136，seq id no:137，seq id no:138，seq id no:139，seq id no:140，seq id no:141，seq id no:142，seq id no:143，seq id no:144，seq id no:145，seq id no:146，seq id no:147，seq id no:148，seq id no:149，seq id no:150，seq id no:151，seq id no:152，seq id no:153，seq id no:154，seq id no:155，seq id no:156，seq id no:156，seq id no:156，seq id no:157，seq id no:157，seq id no:158，seq id no:159，seq id no:160，seq id no:161，seq id no:162，seq id no:163，seq id no:164，seq id no:165，seq id no:166，seq id no:167，seq id no:168，seq id no:169，seq id no:170，seq id no:171，seq id no:171，seq id no:172，seq id no:173，seq id no:174，seq id no:175，seq id no:175，seq id no:176，seq id no:177，seq id no:178，seq id no:179，seq id no:180，seq id no:181，seq id no:182，seq id no:183，seq id no:184，seq id no:185，seq id no:186，或seq id no:186。
41.本公开的抗体可包含以下的轻链可变结构域序列：seq id no:187，seq id no:188，seq id no:189，seq id no:190，seq id no:191，seq id no:191，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:193，seq id no:194，seq id no:194，seq id no:195，seq id no:196，seq id no:197，seq id no:198，seq id no:198，seq id no:199，seq id no:200，seq id no:201，seq id no:202，seq id no:203，seq id no:204，seq id no:205，seq id no:206，seq id no:207，seq id no:208，seq id no:209，seq id no:209，seq id no:209，seq id no:210，seq id no:211，seq id no:211，seq id no:211，seq id no:212，seq id no:213，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:215，seq id no:216，seq id no:217，seq id no:218，seq id no:219，seq id no:219，seq id no:220，seq id no:221，seq id no:222，seq id no:223，seq id no:224，seq id no:225，seq id no:226，seq id no:227，seq id no:228，seq id no:228，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:230，seq id no:230，seq id no:230，seq id no:231，seq id no:231，seq id no:232，seq id no:232，seq id no:233，seq id no:233，seq id no:234，seq id no:235，seq id no:236，seq id no:236，seq id no:236，seq id no:237，seq id no:238，seq id no:239，seq id no:240，seq id no:240，seq id no:241，seq id no:242，seq id no:243，seq id no:244，seq id no:245，seq id no:246，seq id no:247，seq id no:248，seq id no:249，seq id no:250，seq id no:251，seq id no:252，seq id no:253，seq id no:253，seq id no:254，seq id no:255，seq id no:256，seq id no:257，seq id no:258，seq id no:259，seq id no:260，seq id no:261，seq id no:262，seq id no:263，seq id no:264，seq id no:265，seq id no:266，seq id no:266，seq id no:267，seq id no:268，seq id no:269，seq id no:270，seq id no:271，seq id no:272，seq id no:
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42.本公开还提供一种可变结构域序列，其包含与选自以下的序列至少80％、至少85％、至少90％，或至少95％等同(identical)的序列：seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:39，seq id no:40，seq id no:41，seq id no:42，seq id no:43，seq id no:44，seq id no:45，seq id no:46，seq id no:47，seq id no:48，seq id no:49，seq id no:50，seq id no:51，seq id no:52，seq id no:53，seq id no:54，seq id no:55，seq id no:56，seq id no:57，seq id no:58，seq id no:59，seq id no:60，seq id no:61，seq id no:62，seq id no:63，seq id no:64，seq id no:65，seq id no:66，seq id no:67，seq id no:67，seq id no:68，seq id no:69，seq id no:70，seq id no:71，seq id no:72，seq id no:73，seq id no:74，seq id no:75，seq id no:76，seq id no:77，seq id no:78，seq id no:79，seq id no:80，seq id no:81，seq id no:82，seq id no:83，seq id no:84，seq id no:85，seq id no:86，seq id no:87，seq id no:88，seq id no:89，seq id no:90，seq id no:90，seq id no:91，seq id no:92，seq id no:93，seq id no:94，seq id no:95，seq id no:96，seq id no:96，seq id no:97，seq id no:98，seq id no:99，seq id no:100，seq id no:101，seq id no:102，seq id no:103，seq id no:104，seq id no:105，seq id no:106，seq id no:107，seq id no:108，seq id no:109，seq id no:110，seq id no:111，seq id no:112，seq id no:113，seq id no:114，seq id no:115，seq id no:116，seq id no:117，seq id no:118，seq id no:119，seq id no:120，seq id no:121，seq id no:122，seq id no:123，seq id no:124，seq id no:125，seq id no:126，seq id no:127，seq id no:128，seq id no:129，seq id no:130，seq id no:131，seq id no:132，seq id no:133，seq id no:134，seq id no:135，seq id no:136，seq id no:137，seq id no:138，seq id no:139，seq id no:140，seq id no:141，seq id no:142，seq id no:143，seq id no:144，seq id no:145，seq id no:146，seq id no:147，seq id no:148，seq id no:149，seq id no:150，seq id no:
151，seq id no:152，seq id no:153，seq id no:154，seq id no:155，seq id no:156，seq id no:156，seq id no:156，seq id no:157，seq id no:157，seq id no:158，seq id no:159，seq id no:160，seq id no:161，seq id no:162，seq id no:163，seq id no:164，seq id no:165，seq id no:166，seq id no:167，seq id no:168，seq id no:169，seq id no:170，seq id no:171，seq id no:171，seq id no:172，seq id no:173，seq id no:174，seq id no:175，seq id no:175，seq id no:176，seq id no:177，seq id no:178，seq id no:179，seq id no:180，seq id no:181，seq id no:182，seq id no:183，seq id no:184，seq id no:185，seq id no:186，或seq id no:186。本公开还提供一种可变结构域序列，其包含与选自以下的序列至少80％、至少85％、至少90％，或至少95％等同的序列：seq id no:187，seq id no:188，seq id no:189，seq id no:190，seq id no:191，seq id no:191，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:192，seq id no:193，seq id no:194，seq id no:194，seq id no:195，seq id no:196，seq id no:197，seq id no:198，seq id no:198，seq id no:199，seq id no:200，seq id no:201，seq id no:202，seq id no:203，seq id no:204，seq id no:205，seq id no:206，seq id no:207，seq id no:208，seq id no:209，seq id no:209，seq id no:209，seq id no:210，seq id no:211，seq id no:211，seq id no:211，seq id no:212，seq id no:213，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:214，seq id no:215，seq id no:216，seq id no:217，seq id no:218，seq id no:219，seq id no:219，seq id no:220，seq id no:221，seq id no:222，seq id no:223，seq id no:224，seq id no:225，seq id no:226，seq id no:227，seq id no:228，seq id no:228，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:229，seq id no:230，seq id no:230，seq id no:230，seq id no:231，seq id no:231，seq id no:232，seq id no:232，seq id no:233，seq id no:233，seq id no:234，seq id no:235，seq id no:236，seq id no:236，seq id no:236，seq id no:237，seq id no:238，seq id no:239，seq id no:240，seq id no:240，seq id no:241，seq id no:242，seq id no:243，seq id no:244，seq id no:245，seq id no:246，seq id no:247，seq id no:248，seq id no:249，seq id no:250，seq id no:251，seq id no:252，seq id no:253，seq id no:253，seq id no:254，seq id no:255，seq id no:256，seq id no:257，seq id no:258，seq id no:259，seq id no:260，seq id no:261，seq id no:262，seq id no:263，seq id no:264，seq id no:265，seq id no:266，seq id no:266，seq id no:267，seq id no:268，seq id no:269，seq id no:270，seq id no:271，seq id no:272，seq id no:273，seq id no:274，seq id no:275，seq id no:276，seq id no:277，seq id no:278，seq id no:279，seq id no:280，seq id no:280，seq id no:281，seq id no:281，seq id no:282，seq id no:283，seq id no:283，seq id no:284，seq id no:285，seq id no:286，seq id no:287，seq id no:288，seq id no:289，seq id no:290，seq id no:291，seq id no:292，seq id no:293，seq id no:294，seq id no:295，seq id no:296，seq id no:297，seq id no:297，seq id no:298，seq id no:299，seq id no:300，seq id no:301，seq id no:302，seq id no:303，seq id no:304，seq id no:305，seq id no:305，seq id no:306，seq id no:307，seq id no:308，seq id no:309，seq id no:310，seq id no:
310，seq id no:310，seq id no:310，seq id no:310，seq id no:311，seq id no:312，seq id no:313，seq id no:314，seq id no:314，seq id no:315，seq id no:316，seq id no:317，seq id no:317，seq id no:318，seq id no:319，seq id no:320，seq id no:321，seq id no:322，seq id no:323，seq id no:324，seq id no:325，seq id no:326，seq id no:326，seq id no:327，seq id no:328，seq id no:329，seq id no:330，seq id no:331，seq id no:332，或seq id no:332。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:4至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:317至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:5至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:211至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:6至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:302至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:7至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:223至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:8至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:260至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:9至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:325至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:10至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:305至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:11至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:319至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:12至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:241至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:13至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:306至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:14至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:315至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:14至少80％、至少85％、至少90％或至少95％
等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:316至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:15至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:312至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:15至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:314至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:16至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:314至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:17至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:288至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:18至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:313至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:19至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:298至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:20至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:307至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:21至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:246至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:22至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:261至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:23至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:330至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:24至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:237至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:25至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:238至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:26至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:236至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，
其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:27至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:236至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:28至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:231至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:29至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:232至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:30至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:224至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:31至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:235至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:32至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:240至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:33至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:220至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:34至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:221至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:35至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:240至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:35至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:317至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:36至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:277至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:37至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:239至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:38至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:236至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:39至少80％、至少85％、至少
90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:228至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:40至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:228至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:41至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:231至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:42至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:232至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:43至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:233至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:44至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:233至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:45至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:269至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:46至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:305至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:47至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:284至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:48至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:283至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:49至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:283至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:50至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:318至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:51至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:262至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:52至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:206至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还
提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:53至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:205至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:54至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:204至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:55至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:202至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:56至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:263至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:57至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:310至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:58至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:320至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:59至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:259至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:60至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:287至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:61至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:203至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:62至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:310至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:63至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:311至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:64至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:265至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:65至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:310至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:66至少80％、至
少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:308至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:67至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:290至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:67至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:310至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:68至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:309至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:69至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:310至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:70至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:264至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:71至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:300至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:72至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:324至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:73至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:326至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:74至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:326至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:75至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:243至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:76至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:217至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:77至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:78至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:211至少80％、至少85％、至少90％或至少95％
等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:79至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:80至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:81至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:82至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:213至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:83至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:215至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:84至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:332至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:85至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:328至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:86至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:331至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:87至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:329至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:88至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:332至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:89至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:198至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:90至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:197至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:90至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:198至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:91至
少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:92至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:299至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:93至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:285至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:94至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:267至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:95至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:222至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:96至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:227至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:96至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:97至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:98至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:99至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:100至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:101至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:230至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:102至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:225至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:103至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:234至少80％、至少85％、
至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:104至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:105至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:230至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:106至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:230至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:107至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:229至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:108至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:282至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:109至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:110至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:212至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:111至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:268至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:112至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:266至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:113至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:280至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:114至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:266至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:115至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:187至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:116至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:280至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变
结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:117至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:281至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:118至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:278至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:119至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:250至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:120至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:253至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:121至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:249至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:122至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:256至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:123至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:252至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:124至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:257至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:125至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:219至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:126至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:219至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:127至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:251至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:128至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:245至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:129至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:254至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:130至少80％、至少85％、至少90％或至
少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:244至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:131至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:272至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:132至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:271至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:133至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:289至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:134至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:301至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:135至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:292至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:136至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:195至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:137至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:291至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:138至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:304至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:139至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:296至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:140至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:294至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:141至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:255至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:142至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:143至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:211至少80％、至少85％、至少90％或至
少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:144至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:214至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:145至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:218至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:146至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:216至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:147至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:286至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:148至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:295至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:149至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:190至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:150至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:193至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:151至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:194至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:152至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:297至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:153至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:194至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:154至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:297至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:155至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:192至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:156至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:188至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所
述重链可变结构域序列与seq id no:156至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:189至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:156至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:327至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:157至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:192至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:157至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:242至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:158至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:192至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:159至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:191至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:160至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:191至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:161至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:192至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:162至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:192至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:163至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:248至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:164至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:270至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:165至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:273至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:166至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:281至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:167至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述
轻链可变结构域序列与seq id no:322至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:168至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:209至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:169至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:321至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:170至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:279至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:171至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:303至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:171至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:323至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:172至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:207至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:173至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:200至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:174至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:247至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:175至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:199至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:175至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:210至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:176至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:196至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:177至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:201至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:178至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:274至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公
开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:179至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:209至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:180至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:209至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:181至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:208至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:182至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:253至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:183至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:276至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:184至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:275至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:185至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:293至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:186至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:226至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。本公开还提供一种抗体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列与seq id no:186至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同，所述轻链可变结构域序列与seq id no:258至少80％、至少85％、至少90％或至少95％等同。
43.表1提供了本文所述的tim-3特异性抗体的总结：
44.药物组合物
45.包含本公开的抗体或抗体片段的药物组合物也被考虑并可用于本文公开的方法中。药物组合物可以包含一种或多种本文所述的抗体或抗体片段以及药学上可接受的运载体或赋形剂。尽管运载体或赋形剂可以促进给药，但其本身不应诱导对接受组合物的对象或个体有害的抗体的产生；它也不应有毒。合适的运载体可以是大的、缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和无活性病毒颗粒，并且是本领域技术人员已知的。
46.本文所述的抗体或抗原结合片段，或本文公开的药物组合物，可以通过任何数量的途径施用，包括但不限于口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、腹膜内、鞘内、脑室内、透皮、经皮、局部、皮下、鼻内、肠内、舌下、阴道内或直肠途径。通常，治疗组合物可以制备为液体溶液或悬浮液形式的可注射剂。也可以制备适合在注射前溶解或悬浮在液体载剂中的固
体形式。
47.在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段或药物组合物静脉内给予。在另一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段或药物组合物通过静脉输注给予。
48.组合物的直接递送通常通过皮下注射、腹膜内注射、静脉内注射或肌内注射来实现，或递送至组织的间质空间。也可以将组合物给予到病灶中。剂量治疗可以是单剂量方案或多剂量方案。已知的基于抗体的药物提供与给药频率有关的指导，例如，是否应该每天、每周、每月等递送药物。频率和剂量也可能取决于症状的严重程度。
49.应理解，组合物中的活性成分将是抗体分子、抗体片段或其变体和衍生物。因此，它很容易在胃肠道中降解。因此，如果组合物要通过使用胃肠道的途径给药，则组合物将需要包含保护抗体免于降解但一旦抗体从胃肠道吸收就释放抗体的物质(agent)。
50.本发明的方法可以单独使用如上所述的抗体或其抗原结合片段或将其与其它药学活性化合物组合来治疗例如上文公开的那些病症。可以同时(以相同剂型或以单独剂型)或依次给予其它药学活性化合物。因此，在一个实施方式中，本发明包括通过向对象给予治疗有效量的本发明的抗体或其抗原结合片段和一种或多种其它药学活性化合物来治疗病症的方法。
51.在一些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段与现有的tim-3相关疾病疗法组合使用。
52.实施例
53.提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何实施和使用本公开的完整描述，并不旨在限制本发明人认为其公开的范围，也不旨在表示以下实验是全部或唯一可以进行的实验。虽然已努力保证所用数值(如量、温度等)的准确性，但应允许一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
54.实施例1：鼠抗人tim-3抗体的分离
55.免疫和单细胞悬液生成
56.采用重组人tim-3(带his标记，目录号：tm3-h5229，百普赛斯生物科技股份有限公司(acrobiosystems)，中国北京，seq id no:2)来免疫c57/bl6幼鼠，各自使用sigma adjuvant (西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrich)，密苏里州圣路易斯)中的80μg蛋白质，持续35天的时间段，采用抗体解决方案公司(antibody solutions)(加利福尼亚州森尼维耳市)的快速免疫方案。在第35天收获淋巴结。产生淋巴结的单细胞悬液，悬液通过70μm网孔(bd生物科技公司(bd bioscience))过滤以去除团块。
57.浆细胞分离、抗体捕获和抗原询检(interrogation)
58.使用基于cd138的细胞表面表达的试剂盒(美天旎(miltenyi)，加利福尼亚州奥伯恩)，富集过滤的淋巴细胞悬浮液中主动分泌igg的浆细胞。使用美国专利号9,328,172中描述的方法，将新鲜富集的浆细胞沉积在pdms装置上，以允许单细胞沉降在装置上的微孔中。从各浆细胞分泌的抗体在衍生化的显微镜载玻片上被捕获。通过用不同浓度的用人fc加标的荧光标记的tim-3蛋白(百普赛斯生物科技股份有限公司(acrobiosystems)，中国北京，目录号：tm3-h5258，seq id no:3)询检抗体捕获载玻片来识别抗原特异性抗体分泌细胞。使用试剂盒(阿纳斯派公司(anaspec)，加利福尼亚州费力蒙，as-72046，
anatag
tm
hilyte
tm
fluor555微量蛋白标记试剂盒*超便捷*)进行标记。
59.mrna捕获
60.抗体捕获后，培养基被除去并用裂解缓冲液替换，随后用定制的寡核苷酸微阵列(安捷伦公司(agilent)，加利福尼亚州圣克拉拉)迅速封闭微孔的顶部。该操作先前在美国专利号9,328,172中有所描述。制备定制的寡核苷酸微阵列，从而使各特征(feature)不仅包含指定其坐标的独特标签，而且还包含用于鼠igg重链、鼠igκ轻链的所有亚类(1、2a、2b和3)的捕获探针。
61.cdna合成、pcr扩增和下一代测序
62.定制微阵列上捕获的mrna被进一步处理以合成各mrna的cdna，所述mrna最初在各特征上纳入独特标签。然后使用taq聚合酶(普洛麦格公司(promega)，威斯康星州麦迪逊)和合适的引物组扩增cdna，以允许扩增以下基因：igg重链亚类的可变结构域和igκ轻链的可变结构域。虽然现在从细胞中被释放出来，但各基因的这些片段当前都用来自定制寡核苷酸微阵列的独特标签标记，表明它们的起初位置。对扩增子进行进一步操作，使其两端附有合适的序列，以能够在赛麦提有限责任公司(seqmatic llc)(加利福尼亚州费力蒙)的illumina miseq仪器上使用2x250 bp化学进行测序。
63.图像和dna序列的生物信息学分析
64.处理来自miseq的测序读数，并且识别各读数中的嵌入标签并将其转换为坐标。绘制坐标以产生回收的mrna的合成图。大多数坐标形成簇，为回收的mrna序列指定原始细胞的位置。接下来，根据与由合适荧光标记二抗可视化的抗体点的位置相匹配的簇，识别和整理存在于各读数中的具有坐标的cdr3基序。对于给定的抗体点，等同或几乎等同的cdr3被组织起来并形成一致的vh和v
l
序列对。包含识别的cdr3的vh或v
l
序列的剩余部分被识别，并且相关的测序读数被组装成vh和v
l
的全长cdna序列。这对全长cdna与和各抗原特异性抗体点相关联的亲和性测量值相关。
65.实施例2：抗tim-3抗体的分子重建和重组表达
66.服务提供者根据已知技术使用配对的vh和v
l
抗tim-3抗体序列的选择子集来合成相应的基因片段。将得到的基因片段克隆到合适的质粒载体中并转染到适当的哺乳动物宿主中，例如hek293，用于重组表达以产生全igg形式的抗体制剂。通过在od280测量以评估产生的量和通过在page上的凝胶电泳以评估所产生的抗体链的大小来表征抗体制剂。
67.实施例3：重组抗tim-3抗体的表征
68.重组表达的抗体用于使用报告细胞测定来评估它们通过磷脂酰丝氨酸轴阻断tim-3信号转导的能力。这种作为试剂盒的测定是市售可得的(货号ja2211，普洛麦格，威斯康星州麦迪逊)。该试剂盒包含通过遗传工程以表达人tim-3的tim-3效应细胞和由t细胞活化途径依赖性反应元件驱动的nanoluc荧光素酶报告基因。相应的靶细胞，mhcii阳性人细胞系也包括在内。设置完成后，产生的发光信号由发光计(cs1978c14，普洛麦格，威斯康星州麦迪逊)检测，且结果(包括ec50值)将用于与具有已知tim-3生物活性的基准抗体进行比较(图1)。作为剂量依赖性阻断tim-3信号转导的结果，阻断性抗体将显示减少的发光。
69.从上述抗体活动(antibody campaign)中回收的抗体在本文中列出。本文所述的抗tim-3抗体的cdr序列和vh和v
l
序列分别描述于表2和表3中。
70.表2
71.72.73.74.75.[0076][0077][0078]
表3
[0079]
[0080]
[0081]
[0082]
[0083]
[0084]
[0085]
[0086]
[0087]
[0088]
[0089]
[0090]
[0091][0092]
前述内容仅说明本公开的原理。应理解，本领域技术人员能够设计各种安排，虽然本文没有明确描述或显示这些安排，但它们均体现本公开的原理并包含在本发明构思和范围内。而且，本文所述的所有实施例和条件语言主要旨在辅助读者理解本公开的原理和本公开对发展现有技术作出的贡献，且不对这些具体引用的实施例和条件构成限制。而且，本文有关本公开原理、方面、实施方式以及具体实施例的所有陈述都应包括其结构和功能等同形式。此外，这些等同物应包括目前已知的等同形式和将来开发的等同形式，即新开发的具有相同功能的任何元件，无论其是何种结构。因此，本公开的范围不应仅限于本文所示和所述的示范性实施方式。适当的是，本公开的范围和构思由所附权利要求书限定。
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