专利名称：心脏恢复剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种在心脏恢复剂，特别是一种在治疗心肌梗塞时用于机械性血管再造后恢复心脏功能的药物组合物。
背景技术：
心肌梗塞是一种由于血栓或栓子形成，成者是因为冠状动脉痉挛造成冠状血管不同程度的收缩成阻塞，心肌经受局部缺血坏死的疾病。尤其是突发的、严重的冠状动脉阻塞造成突然的心肌间部缺血，从而导致心肌收缩力的严重损害而引起致命的心律失常，这种临床症状被认为是急性心肌梗塞。
急性心肌梗塞的预后取决于坏死损害的大小和左心室功能的状态。因此，为防止不可逆的心肌局部缺血坏死，目前通常尽可能早的施行使阻塞的冠状动脉再通的机械性血管再造。然而，即使这种阻塞是短暂的，还不能引起不可逆的心肌坏死，但已有局部缺血损害的心肌收缩力需要几天时间才能恢复到阻塞前的水平。这种短暂的心肌收缩力紊乱称为“stunning心肌”，并且最近在机械性血管再造后，作为一种心脏机能障碍正受到特别的关注。因此，这种疾病的预后改善以便防止或减轻上述“stunning”，从而维持心肌处于机能健康状态有着重大意义。
已知有一类β-激动剂，发现其在心肌梗塞机械性血管再造后能有效地恢复心脏功能。但是，在这些药物无疑能提高心肌收缩力从而改善心脏机能的同时，也扰乱了心肌的能量平衡(例如，增加了心肌能量需求和心肌氧气需求)，结果不利地影响心肌代谢(Br.Heart.J.，42，pp.43-50，1979Progr.Cardiovasc，Dis.，19，pp.327-340，1977)。
同时，洋地黄(一种历史悠久的强心剂)具有改善心脏机能而不增加心肌氧气需求的功能(CardiovascularResearch，1983，17，pp，192-199)。但是，由于洋地黄具有使冠状血管收缩的作用(Chest.，63，pp.862-867，1973Am.J.Cardiol.，41，pp.88-93，1978)，因此有人认为，它有进一步恶化心肌血液动力学的可能，因此，使人们对它应用的理论基础产生怀疑。
最近，已报道了一种能增加腺嘌呤核苷(一种内源性生理活性物质)产生的药物，因而它能有效地改善心脏机能，该药物即是5-氨基-4-咪唑甲酰氨基核糖甙(rAICA)。但是，这种药物的活性和效果尚不充分，而且鉴于内源性腺嘌呤核苷单独不足以说明再灌流干扰对抗机制，因此有必要研究更新的药物。
发明的详细说明本发明的目的是为了克服上述弊端，即现有技术中心脏恢复剂严重的副作用和不足的活性及效果，从而提供一种新的心脏恢复剂，其在保证具有改善心脏机能恢复效果的同时，没有不良反应的危险。
本发明的心脏恢复剂已达到上述目的，下面详细说明。
本发明提供了一种心脏恢复剂，它包括至少一种从嘌呤核苷(腺嘌呤核苷除外)和嘌呤核苷酸中选出的作为活性成分的物质。
作为活性成分的嘌呤核苷，次黄嘌呤核苷最为优选。作为上述嘌呤核苷酸，鸟嘌呤核苷5′-一磷酸(下文缩略为GMP)最为优选。GMP也可以一种药学上可接受的碱金属盐(如钠盐、钾盐等)的形式使用。其中，具有高溶解度的二钠盐(GMP-2Na)最为理想。
本发明优选的一种心脏恢复剂含有次黄嘌呤核苷和GMP作为活性成分。
本发明另一优选的心脏恢复剂含有一种嘧啶核苷，如胞嘧啶核苷和尿嘧啶核苷作为另外的活性成分。
本发明又一优选的心脏恢复剂含有一种嘌呤碱，如腺嘌呤和次黄嘌呤，作为另外的活性成分。
本发明尤为优选的一种心脏恢复剂含有次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、GMP(或其盐)以及胸腺嘧啶脱氧苷作为活性成分。上述组合物中各组份的摩尔比为4∶4∶3∶4∶1时最好。
此心脏恢复剂中的活性成分嘌呤核苷可心是除腺嘌呤核苷外的任一已知的嘌呤核苷，因此包括次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷等。这些可以单独或联合使用。其中，次黄嘌呤核苷尤为优选。活性成分嘌呤核苷酸也可以是任一普通的已知嘌呤核苷酸，包括腺苷酸、三磷酸腺苷、鸟苷酸(鸟嘌呤核苷-磷酸)、次黄嘌呤核苷酸等。这些核苷酸也可以单独或合并使用。当然，上述嘌呤核苷和嘌呤核苷酸能同时用作活性成分。
本发明的心脏恢复剂可以包含至少一种选自上述嘌呤核苷(腺嘌呤核苷除外)和嘌呤核苷酸，以及一种嘧啶核苷或一种嘌呤碱亦可两者伴随情况都可作为活性成分，也可以将上述活性成分合并使用。
能同时含有的成分也可以任意从已知化合物中选择，从心脏机能恢复效果的观点来看，优选的作法是使用两种或更多不同的嘧啶核苷。同时使用的嘧啶核苷的比例并不特别限定，但是可以按相对于嘌呤成分(嘌呤核苷、嘌呤核苷酸和嘌呤碱的总克分子量)计算通常在0.1-10摩尔当量范围内，优选0.5-2摩尔当量。
本发明的心脏恢复剂依靠上述活性成分表现出很好的心脏机能恢复效果，但是理想的效果也可通过将上述提及成分与其它核酸成分和/或其盐合并使用体现出来。尤为优选的能联合并使用的其他成分是胸腺嘧啶脱氧核苷，其比例可按每摩尔上述嘌呤成分计算从约0.1-10摩尔的范围内适当选择，优选0.2-2摩尔。当从上述GMP及其盐中选出的一种化合物作为活性成分时，其比例可按相对于每摩尔上述嘌呤成分计算从约0.1-10摩尔当量的范围内适当选择，优选约0.5-2摩尔当量。
每摩尔嘌呤核苷和/或嘌呤核苷酸的上述嘌呤碱的配方数量可以从约0.1-10摩尔当量的范围内适当选择，优选约0.5-2摩尔当量。
构成本发明心脏恢复剂的优选的典型的合并使用的核酸成分(包括上述嘌呤核苷和/或嘌呤核苷酸)有(1)腺嘌呤/胞嘧啶核苷，(2)次黄嘌呤核苷/胞嘧啶核苷，(3)次黄嘌呤核苷/尿嘧啶核苷，(4)鸟嘌呤核苷/尿嘧啶核苷，(5)鸟嘌呤核苷/胞嘧啶核苷，(6)次黄嘌呤核苷/胞嘧啶核苷/尿嘧啶核苷，(7)鸟嘌呤核苷/胞嘧啶核苷/尿嘧啶核苷，(8)腺嘌呤核苷/次黄嘌呤核苷/胞嘧啶核苷，(9)腺嘌呤核苷/鸟嘌呤核苷/尿嘧啶核苷，(10)腺嘌呤核苷/次黄嘌呤核苷/胞嘧啶核苷/尿嘧啶核苷，(11)腺嘌呤核苷/次黄嘌呤核苷/鸟嘌呤核苷/胞嘧啶核苷，(12)胞嘧啶核苷/GMP/尿嘧啶核苷/次黄嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，(13)胞嘧啶核苷/GMP-2Na/尿嘧啶核苷/次黄嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，(14)胞嘧啶核苷/GMP-2Na/尿嘧啶核苷/腺嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，(15)胞嘧啶核苷/GMP-2Na/尿嘧啶核苷/鸟嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，(16)腺嘌呤核苷/GMP-2Na尿嘧啶核苷/鸟嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，和(11)胞嘧啶核苷/腺嘌呤核苷/GMP-2Na/尿嘧啶核苷/次黄嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，在其它成分中。
上述提到的合并使用配方中，尤其先选用(13)胞嘧啶核苷/GMP/尿嘧啶核苷/次黄嘌呤核苷/胸腺嘧啶脱氧核苷，并且各成分的优选配方比例通常是4∶4∶3∶4∶1。
本发明药物组合物可以通过称取上述配方中的各个组份，再由既定的药学步骤将它们加工制备成适合于预定用途的药物制剂。可采用的剂量形式并不特殊限定，包括用于普通药物的各种剂量形式，但是静脉给药的注射制剂尤为优选。这种注射剂可以通过本身常规的方法制得，通常包括将上述各组份一起溶于注射用蒸馏水中，必要的话接着加入各种常用的添加剂，如pH调节剂如盐酸、乙酸、苹果酸、柠檬酸、氢氧化钠或氢氧化钾，和使水溶液pH值约在6-9的稳定剂；并且通过高压消毒或由膜滤器过滤使该溶液灭菌。得到的注射用本发明心脏恢复剂所有活性成分的总浓度并不是十分极限的，一般可以约为0.5-10W/V%，优选2-8W/V%。
本发明的心脏恢复剂，当以上述任一剂量形式应用或给予病人服用时，能在心肌上发挥强有力的收缩作用，但是却具有可能极低的不良反应的优点。病人的给药剂量不能笼统地规定，因为这需根据每位病人的病理状况、年龄、性别和体重，疾病的严重性及其它因素而改变。一般来说，注射用制剂可按每人每天约0.5-50ml的剂量给药；根据经验，成人患者优选1-20ml(约30-620mg活性成分)。
附图的简要说明
图1表示下述实施例1中描述的本发明药物再灌流后心肌收缩力的改善作用。
图2表示下述实施例2中描述的本发明药物的心脏机能恢复效果。
图3表示下述实施例3中描述的本发明药物再灌流后心肌收缩力的改善作用。
实现本发明的最好方式下述本发明药物的制备实施例及药理实验例意在更详尽地描述本发明。
实施例1把按照下面配方(括号中的数字表示摩尔比)各成份的纯净晶体于搅拌下加到注射用蒸馏水中，使总量为1升。由此得到的水溶液通过一个膜滤器过滤并且装入注射剂小瓶中封好。这些小瓶在105℃高压灭菌40分钟即得到本发明心脏恢复剂的注射用剂量形式(5ml×200小瓶)。这种产品总的游离核酸的浓度为3.35W/V%。
次黄嘌呤核苷0.80W/V%(4)胞嘧啶核苷0.73W/V%(4)GMP-2Na1.22W/V%(4)尿嘧啶核苷0.55W/V%(3)胸腺嘧啶脱氧核苷0.18W/V%(1)实施例2配方中只是使用次黄嘌呤核苷30mM
，腺嘌呤盐酸盐30mM
，和尿嘧啶核苷60mM[1.47W/V%(2)]，重复实施例1中其它步骤即得本发明的一种三元体系的心脏恢复药。
实施例3配方中只是使用次黄嘌呤核苷53.3mM[1.43W/V%(4)]，GMP-2Na53.3mM[2.17W/V%(4)]和胸腺嘧啶脱氧核苷13.3mM
，重复实施例1中其它步骤即得本发明的一种三元体系的心脏恢复药。
实施例4配方中只是使用次黄嘌呤核苷30mM
和GMP-2Na30mM[19.7W/V%(1)]，重复实施例1中其它步骤即得本发明的一种二元体系的心脏恢复药。
实施例5单独使用次黄嘌呤核苷60mM
，重复实施例1中其它步骤即得本发明的一种一元体系的心脏恢复药。
实施例6用GMP-2Na60mM[19.7W/V%]，重复实施例1中其它步骤即得本发明的一种一元体系的心脏恢复药。
实施例1成年杂种狗(每组4-6只)用戊巴比妥钠麻碎(30mg/kg，静脉内)，从左股静脉以0.1或0.2ml/kg/min的速度给予实施例1的心脏恢复药80分钟。本组被指定为“发明组1”(剂量0.1ml，n=6)或“发明组2”(剂量0.2ml，n=6)。
作为本发明药物的替代，类似给予相同数量的rAICA(3mM水溶液)或生理盐水(0.9%NaCl)，规定为“参比组”(rAICA的剂量=0.1ml，n=4)或“对照组”(生理盐水的剂量=0.2ml，n=6)开始给予每种实验药物30分钟后，将对应组的动物切开胸廓以暴露左室壁，把从左前下行冠状动脉(LAD)的开端约1cm的位置仔细分离。接着，将一根结扎冠状动脉用的丝缝线穿过上述位置，同时把一电磁流速计的探针置于适当位置以测量冠脉血流。
然后，将一根超声波晶体探针嵌入左室壁中并测出心肌的长度。同时，左室压、动脉压及心率也一同被监测。直到各参数变平稳后，完全地结扎冠状动脉，从而保持心肌处于局部缺血状态20分钟，随后进行30分钟的再灌流。
作为心肌收缩力的指示，心肌长度和左室压的测量值可用于计算心室长度的%变化(%SS；节变短)和左室压线性微分(dp/dt)。
结果如图1所示(横坐标为以分钟计的时间，纵坐标为%SS)。
有关图1，(1)为“发明组1”(剂量=0.1ml，n=6)，(2)为“发明组2”(剂量=0.2ml，n=6)，(3)为“参比组”(rAICA0.1ml，n=4)，(4)为“对照组”(生理盐水0.2ml，n=6)。每个数据都是平均值±SD。符号*和#表示根据Tukey′stest得出的P＜0.05(与0.9%的“NaCl组”比较)和P＜0.05(与给予rAICA的“参比组”比较)。时间(分钟)标于横坐标上，包括从0开始的各药物的给药时间点，以及用符号“-”标出给药前的时间点。30-50分钟段为局部缺血时间段，随后的50-80分钟段为再灌流时间段。
从图1可明显看出，在急性心肌梗塞模型中，“发明组”(“发明组”1和2)再灌流后%SS与给生理盐水的“对照组”和给rAICA的“参比组”相比有显著改善。
上述发现清楚地表明，与“对照组”甚至与“参比组”相比，本发明药物在局部缺血-再灌流后可显著抑制stunning心肌而不遗留任何不良作用。这表明本发明药物对于在治疗心肌梗塞中机械性血管再造后的心肌恢复有很好的效果，因此能大大有助于预后改善。
实验例2从每只雄性Spragne-Dawley大鼠中取出心脏，立即固定在灌流装置上，按照Langendorff方法，用Krebs-Henseleit碳酸氢盐缓冲液于37℃进行5分钟的恒压灌流。接着转换到心脏工作状态[Circ.Res.，38，Suppl.1，22-30，1976]，再进行10分钟灌流。然后，通过建立一旁路移走主动脉瓣上负荷的方法形成一局部缺血的心脏。[J.Cardiovasc.Pharmacol.，5，745-751，1983]。经过40分钟局部缺血后，再应用后负荷进行30分钟的心脏再灌流。
在上述转到心脏工作状态的灌流时，将实施例1中的心脏恢复剂以1/60浓度加入灌流液中(2mM作为灌流液中各组份的总浓度；n=6)(组1)。
以下各组进行同样的实验(2)-以1/60浓度(灌流液中，次黄嘌呤核苷0.5mM，尿嘧啶核苷1mM，腺嘌呤0.5mM，n=6)(组2)给予实施例2的心脏恢复剂；(3)-以1/60浓度(灌流液中，次黄嘌呤核苷0.89mM，胸腺嘧啶脱氧核苷0.22mM，n=6)(组3)给予实施例3的心脏康复剂；(4)-以1/60浓度(灌流液中，次黄嘌呤核苷1mM，n=6)给予实施例5的心脏恢复剂(组4)；(5)-以1/60浓度(灌流液中，GMP-2Na1mM，n=6)(组5)给予实施例6的心脏恢复剂。此外，还给予不含药的灌流液组(6)-对照组(n=6，组6)。
上述组中的离体大鼠心脏分别用工作心脏技术灌流的评价心脏的泵功能。
在上述评价中，计算二者乘积即峰收缩压×心率来作为指示。
结果如图2所示。图2中，横坐标代表时间(min)，纵坐标代表二者乘积(×103mmHg/min)。并且，(1)代表用本发明实施例1所得药物的处理组(组1)；(2)代表用实施例2所得药物的处理组(组2)；(3)代表用实施例3所得药物的处理组(组3)；(4)代表用实施例5所得药物的处理组(组4)；(5)代表用实施例6所得药物的处理组(组5)；(6)代表用不含任一本发明药物的灌注液的对照组。
从图2中可明显看出，在通过工作心脏技术的大鼠局部缺血-再灌流模型中，就对心脏机能的恢复效果看，给予本发明药物的各组(图中(1)-(5)与单用灌流液的对照组(组6，(6))相比，表现出非常令人满意的结果。(**P＜0.01通过Tukey′stest与对照组相比)。
上述结果表明，本发明药物在局部缺血-再灌流后，对于心脏机能的恢复非常有益，因此在治疗心肌梗塞中能大大改善预后。
实验例3成年杂种狗(体重7-20kg)静脉给予30mg/kg的戊巴比妥钠，建立人工呼吸后，剪去手术部位的毛发，将股静脉和股动脉插管以分别给予实验药物和测量血压。
接着，打开左胸廓，切开心包以暴露左心室。然后，分离左冠状动脉。将一根用于阻断的丝缝线穿过冠状动脉，把一个电磁流速计的探针置于适当位置以测量血压。为测定室壁长度的变化，将一对超声波晶体探针安装牢固，同时把一根用于测量左室压的内存钉置于适当位置。
将本发明实施例4的心脏恢复剂(“实验组”)和作为比较用的下述配方的参比药物(“参比组”)以0.1ml/kg/min的速率通过一注射器泵(TerumoCorporationSTC-525)分别注入。每组都提供替代活性药物的生理盐水作为对照组。
〈“参比组”配方〉
胞嘧啶核苷30mM+尿嘧啶核苷22.5mM+胸腺嘧啶脱氧核苷7.5mM(摩尔比=4∶3∶1)在上述注入给药开始之前10分钟，每隔5分钟记录ECG、血压、心率、心内压、室内肌长及其它血流动力学参数。并且，在开始注入30分钟后，进行冠状动脉阻断，50分钟后解除阻断。
上述提及的血流动力学参数在开始注入后需测量80分钟，并且室内肌长的%变化(%SS节变短)按实验例1的方法计算。
每个实验组和参比组的动物数不少于5只，而且Tukey′stest和Dunnett′stest用于检测测量值的统计学意义。
按图1的形式将结果未于图3A和3B(横坐标为时间(min)，纵坐标为%SS)。
在图中，(1)代表实验组(“发明组”，n=5)，(2)代表参比组(n=5)，(3)代表对照组(给予生理盐水，n=12)。各图中横坐标的0-80分钟部分代表经注入给予实验药物期；30-50分钟部分代表局部缺血期；50-80分钟部分代表再灌流期。
从图3A中也可清楚看出。在这种急性心肌梗塞模型中，用本发明药物的处理组(实验组)其再灌注后的%SS，与用生理盐水的对照组相比，有明显提高，这表明本发明药物能在局部缺血-再灌流后控制stunning心肌而不引起任何不良反应。因此，很明显，本发明药物对于在治疗心肌梗塞中机械性血管再造后的心脏机能恢复有很好的效果，因而大大有助于预后改善。相比而言，如图3B所示，用核酸成分处理的参比组中得不到如同本发明的显著的心脏机能恢复效果，并且参比组中的核酸成分不同于作为本发明活性成分的嘌呤核苷及嘌呤核苷酸，尽管它们同样都是核酸成分。
工业适用性根据本发明，提供了一种新的心脏恢复剂，它能抑制或减轻心肌的收缩紊乱，从而保持心脏机能处于正常状况而不伴有可能对心肌代谢有不利影响的副作用。该药能在机械性血管再造后的心脏机能恢复中产生很好的作用，尤其在心肌梗塞中。
权利要求
1.一种心脏恢复剂，它包括至少一种含有嘌呤核苷(腺嘌呤核苷除外)和嘌呤核苷酸作为活性成分的物质。
2.如权利要求1中所述的心脏恢复剂，其中所说的嘌呤核苷是次黄嘌呤核苷。
3.如权利要求1中所述的心脏恢复剂，其中所说的嘌呤核苷酸是鸟嘌呤核苷5′-一磷酸。
4.如权利要求1中所述的心脏恢复剂，它含有次黄嘌呤核苷和鸟嘌呤核苷5′-一磷酸作为活性成分。
5.如权利要求1至4中任何一项所述的心脏恢复剂，此外它还含有一嘧啶核苷。
6.如权利要求5中所述的心脏恢复剂，其中胞嘧啶核苷和尿嘧啶核苷作为上述嘧啶核苷合并使用。
7.如权利要求1至6中任何一项所述的心脏恢复剂，此外它还含有一嘌呤碱。
8.如权利要求7中所述的心脏恢复剂，其中所说的嘌呤碱是腺嘌呤或次黄嘌呤。
9.如权利要求1中所述的心脏恢复剂，它含有次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷5′-一磷酸或其盐以及胸腺嘧啶脱氧核苷。
10.如权利要求9中所述的心脏恢复剂，它含有次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷5′-一磷酸及胞腺嘧啶脱氧核苷的比例(摩尔比)为4∶4∶3∶4∶1。
全文摘要
本发明提供了一种心脏恢复剂，它包括至少一种含有嘌呤核苷和嘌呤核苷酸的物质，例如，一种含有摩尔比为4∶4∶3∶4∶1的次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、鸟嘌呤5′-一磷酸及胸腺嘧啶脱氧核苷的组合物。本发明的心脏恢复剂的特征在于其良好的心脏机能恢复活性而没有副作用的危险。
文档编号A61K45/06GK1113647SQ94190630
公开日1995年12月20日 申请日期1994年8月19日 优先权日1993年8月25日
发明者市原和夫, 横山弘臣 申请人:株式会社大制药工场