专利名称：胰岛素栓剂的制法的制作方法
技术领域：
本发明是涉及药物的生产方法，特别是胰岛素栓剂的生产方法。
到目前为止，治疗糖尿病最有效的药物仍是胰岛素。目前临床上给胰岛素的主要方法是皮下注射，该方法的缺点是使用不方便、局部疼痛、有发生感染的机会、长时间注射会引起皮肤硬化、脂肪组织萎缩等；利用直肠栓剂给药被认为代替上述皮下注射的最好方法之一。
在通常情况下，直肠吸收蛋白质类物质胰岛素的能力很弱，因此在胰岛素栓剂中需加入吸收促进剂。十几年来，国际上研制了包含各种吸收促进剂的胰岛素栓剂，但其主要缺点是(1)吸收率较低；(2)吸收促进剂对直肠粘膜产生不可逆损害；水杨酸钠类物质被认为是目前较好的胰岛素吸收促进剂，虽无上述第二个缺点，但仍存在第一个缺点，即吸收率较低。
现将目前效果较好的以水杨酸钠或苯甲酸钠以及它们的衍生物作为吸收促进剂的胰岛素栓剂的制法，例如，日本专利公开号为J62267238的“胰岛素栓剂的制法”介绍如下1.在整个栓剂中，胰岛素的重量占0.1-1％，吸收促进剂占2-5％和/或水溶性糖类占0.5-30％，上述各物质用水溶液溶解，干燥后得粉末，将粉末与基质混合后制成栓剂。
2.吸收促进剂可以是[I]，结构所示的物质 (R可用-H、-OH、-OCH3、-Cl、-Br等代替)3.吸收促进剂也可是[II]结构所示的物质 (X可用-Cl、-Br等代替)4.水溶性糖类可以是乳糖、甘露糖醇、D-赤藓糖、L-阿拉伯糖、D-核糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-果糖、L-山梨糖、海藻糖、麦芽糖、纤维二糖、龙胆二糖、密二糖、龙胆三糖、松三糖。
评价胰岛素栓剂的效果通常是看其降低血糖的幅度或相对幅度(血糖下降百分率)(Camx)；下降最大的幅度所需时间(tmax)和血糖下降持续时间(MRT)。上述方法制成的胰岛素栓剂的缺点具体表现在Cmax幅度不大、MRT短。例如，用上述方法对健康狗做试验的结果如下1.0IU/公斤体重时(IU-胰岛素国际单位，本文中IU其意义同此)，Cmax平均为60％；MRT约为2-2.5小时。造成这些缺点的主要原因如下1.直肠粘膜对蛋白质多肽等大分子吸收能力差，虽然在栓剂中加入了吸收促进剂，但效果不甚明显；2.栓剂中的胰岛素在直肠中吸收持续时间短，其主要原因是栓剂在直肠内释放的胰岛素容易被肠道内蛋白水解酶分解。Scot、Harner、Laskowski等人分别进行了报导胰岛素与胰蛋白酶一起孵化9分钟，胰岛素的活性即损失50％。[见文献Scot.D.AJ.Biol.Chem.63，641(1925)；Harner B K；Nash.TJ.Biol.Chem.97，443(1932)；LaskowskiM；Haesseler M.A；Science 127，115(1958)]。在直肠内虽然几乎没有胰蛋白酶，但直肠内有大量细菌，它们体内含有大量蛋白水解酶，能够分解胰岛素，故胰岛素在直肠内损失较多，导致胰岛素在直肠中吸收持续时间短。
本发明的目的就是针对上述问题，提供一种增强直肠对胰岛素的吸收能力，释放的胰岛素在肠道内存续时间长的胰岛素栓剂的制法。
本发明的目的是这样实现的将占栓剂总重量0.001％-1％的胰岛素与占栓剂总重量的15％-50％的吸收促进剂和/或占栓剂总重量的0.5％-30％的水溶性糖类和占栓剂总重量0.5％-30％的抑菌剂在水溶液中溶解并搅拌，干燥后得粉末，将其粉末与含有占栓剂总重量的0.5％-30％的月桂氮酮或有机溶媒的基质均匀混合、冷却成型即成。
本发明的主要优点1.增强直肠对胰岛素的吸收功能在本发明的栓剂基质中加入一定量的月桂氮酮或有机溶媒(例如二甲基亚枫等)可引起直肠粘膜蛋白构型可逆性变化，使组织膨胀、疏松、构成间隙而更利于药物渗透；2.胰岛素在肠道内存续时间长直肠内有大量细菌，细菌体内有能水解胰岛素的蛋白水解酶，在本发明的栓剂中加入一定量抑菌剂，如甲硝唑等来抑制这些细菌，从而达到了保护胰岛素，延长了胰岛素在直肠中存在的时间，也就是延长了胰岛素在直肠中的吸收持续时间，即增加胰岛素的吸收量。
实践证明本发明的胰岛素栓剂的综合效果是很明显的，即胰岛素的用量减少、血糖降低辐度较大、作用时间长。附表1列出本发明制出的胰岛素栓剂同上述日本专利(J62267238)所介绍的方法制出胰岛素栓剂的实验结果相比较的情况(胰岛素用量为1.0IU/公斤体重)，从表中可以看出，本发明方法制出的胰岛素栓剂比日本专利(J662267238)所介绍的方法制出胰岛素栓剂在血糖降低最大百分率(Cmax)较好，而在血糖降低持续时间上则比日本专利(J662267238)所介绍的方法制出的栓剂增加一倍。
实施例1制出均一的含有胰岛素粉末将水杨酸钠3克、甲硝唑0.5克分别加入9毫升4℃的0.01NNaOH溶液(含吐温80为0.003％)中(吐温80即Tween-80)，在4℃条件下充分搅拌后(允许最后有少量不溶物)，4℃条件下待用。取胰岛素粉末(28IU/毫克)溶于4℃条件0.0055NNaOH溶液(含吐温80为0.003％)中，使浓度为62.5IU/毫升，轻轻搅拌使之完全溶解后，取320微升在低温下加入前述溶液中，使之充分混合，迅速冷冻干燥，将干燥物用研钵研碎后，过筛(孔径为250微米)得均一粉末，4℃条件下待用。
栓剂基质的调制分别取混合脂肪酸甘油脂6.3克、大豆卵磷脂1.818克，80℃水浴加热，搅拌使它们完全融化，再加入月桂氮酮0.5克，搅拌使它们均匀混合，保持42℃待用。
胰岛素栓剂的制造将上述的含有胰岛素均一粉末迅速加入42℃上述基质中，充分搅拌均匀，浇注冷却成型，4℃保存。
这样制成的胰岛素栓剂含胰岛素2.0IU/1.212克栓剂，重量百分比为0.0059％，含甲硝唑4.1％，含水杨酸钠24.8％，含月桂氧酮4.1％，大豆卵磷脂15％，混合脂肪酸甘油脂占52％。
在制取每1.212克栓剂含有胰岛素分别为1.0IU和3.0IU的胰岛素栓剂时，利用上述相同方法，只是在制取均一粉末时，分别加入160毫升和480毫升上述胰岛素溶液。这样制成的栓剂含胰岛素重量百分比分别为0.0029％和0.0088％。
比较例日本专利J62267238的制法制造均一含有胰岛素的粉末将水杨酸钠21.42克加入132.1毫升4℃的0.005M柠檬酸溶液(含0.001％吐温-80)中，低温充分搅拌后，加入5.1毫克胰岛素粉末(28IU/毫克)，使之完全溶解，混合均匀，迅速冷冻干燥成粉末，粉末用研钵研碎后，过筛(孔径350微米)后，4℃条件下待用。
栓剂基质的调制取混合脂肪酸甘油脂45.0克，大豆卵磷脂5.0克，在80℃的水浴中加热，搅拌使它们完全融化，混匀后，保持42℃待用。
胰岛素栓剂的制造同实施例1。
这样制成的胰岛素栓剂含胰岛素2.0IU/克栓剂，重量百分比为0.007％，水杨酸钠占30％，大豆卵磷脂占7％，混合脂肪酸甘油脂占63％。
实验动物用新西兰大耳白兔，雄性，体重1.8-2.2公斤，每组3只，将前述实施例1、比较例的方法制取的栓剂分别给予各组兔。给药前后耳缘静脉采血，分别测定各兔给药前后血糖浓度变化。
图1所示实施例1制成的栓剂给健康兔前后各组兔血糖浓度下降百分率。给药前血糖浓度为91.4±15.1毫克/100毫升。各曲线分别代表胰岛素给药量为栓剂0.5IU/公斤(-)，1.0IU/公斤(·-·)，1.5IU/公斤(△-△)和肌注0.4IU/公斤(……)的结果。图2表示为比较例制成的栓剂给健康兔前后各组兔血糖下降百分率。给药前兔血糖浓度为89.9±17.1毫克/100毫升。胰岛素用量为1.0IU/公斤。从图2中可以看出比较例的Cmax为61％，达到最低浓度所需时间tmax为45分钟，MRT为2.5小时。从图1可以看出用实施例1的栓剂，1.0IU/公斤的曲线Cmax为57％，更重要的是MRT为5小时，远远长于比较例的栓剂的2.5小时，在降血糖辐度上和降血糖持续时间上，本发明的效果明显好于日本专利J62267238。本发明的胰岛素栓剂量为1.0IU/公斤时，约相当于肌注0.4IU/公斤；栓剂为1.5IU/公斤时，比1.0IU/公斤降糖效果更为明显。
稳定性实验将实施例1方法制成的栓剂(2.0IU/1.212克)在4℃条件下存放一个月，再重复以上动物实验，结果与图1的1.0IU/公斤曲线相同。
实施例2将实施例1的月桂氮酮改用为二甲基亚枫，其余同实施例1。本实施例中二甲基亚枫含量占4.1％，其余各成份含量(除月桂氮酮外)同实施例1。
实施例3和实施例4本栓剂制法同实施例1，但各种成份含量和百分比分别见附表2和附表3。
图3显示实施3中甲硝唑含量分别为1.0％(-)和10.0％(·-·)的栓剂降低正常兔血糖的情况。该组兔给药前的血糖为82.0±8.0毫克/100毫升，栓剂的胰岛素量为1.0IU/公斤。由图3和图1可以看出，甲硝唑的量能够决定Cmax和tmax甚至MRT。甲硝唑越少，则Cmax辐度越小，tmax越小、MRT也越短。反映出胰岛素由于缺少甲硝唑保护，被直肠内细菌蛋白水解酶水解而损失的情况。但甲硝唑过多并不能明显改变Cmax、tmax和MRT，只有在含量适当情况下，如4.1％甲硝唑才能有效地增强胰岛素的作用。
图4显示实施例4中月桂氮酮含量分别为1％(-)和10％(·-·)的栓剂降低正常兔血糖的情况。
该组兔给药前的血糖为89.0±14.6毫克/100毫升，栓剂胰岛素量均为1.0IU/公斤。由图4和图1可以看出月桂氮酮的量能决定Cmax，月桂氮酮越少，则Cmax辐度越小，反之则越大。由此表明月桂氮酮能增强直肠粘膜对胰岛素的通透性能，但月桂氮酮量过多，也不能明显改变Cmax，它只能在适量情况下起明显的作用，如含量4.1％。
实施例5制取均一的含有胰岛素粉末将水杨酸钠3克、甲硝唑0.5克、D-半乳糖0.969克分别加入9毫升4℃的0.01NNaOH溶液(含吐温-80为0.003％)中，其余同实施例1的含有胰岛素的均一粉末制法。
栓剂基质的调制分别取混合脂肪酸甘油脂5.34克、大豆卵磷脂1.818克，在80℃水浴加热、搅拌，使它们完全融化，再分别加入月桂氮酮0.25克，二甲基亚枫0.25克，搅拌使它们混合均匀，保持在42℃条件下待用。
胰岛素栓剂制取同实施例1。
这样制成的胰岛素栓剂的胰岛素含量为2.0IU/1.212克，重量百分比为0.0059％；甲硝唑4.1％，月桂氮酮和二甲基亚枫分别占2.05％，D-半乳糖占8.0％。
实施例6该方法制成的胰岛素栓剂除胰岛素含量外，其余同实施例1。
用本方法制含有胰岛素均一粉末时，向其中加入1.6毫升实施例1的胰岛素溶液。
用本方法制成的胰岛素栓剂的胰岛素含量为10IU/1.212克栓剂，重量百分含量为0.029％。其余成份含量同实施例1。
当制胰岛素含量分别为5.0IU/1.212克栓剂和15IU/1.212克栓剂时，只需在制造含有胰岛素均一粉末时，分别向其中加入0.8毫升和2.4毫升实施例1中的胰岛素溶液即可。这两种栓剂中的胰岛素重量百分比分别为0.015％和0.044％。
用9.0-11.0公斤雄性杂种狗，每组三只，将实施例6方法制成的胰岛素栓剂给予各组狗，给药前后取血，分别测定各血样内的血糖含量。给药前的血糖含量为93.5±9.4毫克/100毫升。
图5显示实施例6制成的栓剂给予各组狗后，血糖下降百分率曲线，各曲线分别代表胰岛素剂量分别为栓剂0.5IU/公斤(-)，1.0UI/公斤(·-·)，1.5IU/公斤(△…△)，肌注胰岛素0.4IU/公斤(……)的结果。
由这组曲线可以看出，在每公斤体重相同胰岛素剂量栓剂情况下，健康狗与健康兔的血糖降低情况即tmax、Cmax和MRT相似。1.0IU/公斤体重时，tmax为1.5小时，Cmax为60％，MRT为5小时。远远优于日本专利J62267238的方法制取的栓剂降低正常狗的血糖结果Cmax为47％-72％，MRT为2-2.5小时。
附表1Cmax(％)MRT(小时)
附表2
各栓剂胰岛素含量均为2.0IU/1.212的栓剂，重量百分比为0.059％。附表权利要求
1.胰岛素栓剂的制法是将占栓剂总重量0.001％-1％的胰岛素与占栓剂总重量的15％-50％的吸收促进剂和/或占栓剂总重量的0.5％-30％的水溶性糖类和占栓剂总重量0.5％-30％的抑菌剂在水溶液中溶解并搅拌、干燥后得粉末，将其粉末与含有占栓剂总重量的0.5％-30％的月桂氮酮或有机溶媒的基质均匀混合、冷却成型即成。
2.根据权利要求1所述的胰岛素栓剂，其特征在于抑菌剂是甲硝唑。
3.根据权利要求1所述的胰岛素栓剂，其特征在于有机溶媒是二甲基亚枫。
4.根据权利要求2所述的胰岛素栓剂，其特征在于甲硝唑为4.1％。
5.根据权利要求3所述的胰岛素栓剂，其特征在于二甲基亚枫为4.1％。
6.根据权利要求1所述的胰岛素栓剂，其特征在于月桂氮酮为4.1％。
全文摘要
本发明是涉及药物的生产方法，特别是胰岛素栓剂的生产方法。本发明就是将胰岛素与吸收促进剂和/或水溶性糖类和抑菌剂在水溶液中溶解并搅拌，干燥后得粉末，将其粉末与含有月桂氮酮或有机溶媒的基质均匀混合、冷却成型即成。本发明可增强直肠对胰岛素的吸收功能，并具有使胰岛素在肠道内存续时间长的特点。
文档编号A61K38/28GK1139578SQ9511184
公开日1997年1月8日 申请日期1995年7月3日 优先权日1995年7月3日
发明者马鸣超, 王捷, 廖万国, 马骥 申请人:马鸣超