作为计算机化x射线断层照相术对比剂的稳定均匀的悬浮液的制作方法

专利名称：作为计算机化x射线断层照相术对比剂的稳定均匀的悬浮液的制作方法
相关申请参考文献这是正在共待审核的序号为08/247,656，申请日是1994年5月23日的美国申请的部分继续申请，上述美国申请涉及现在获允许的序号为08/116,982，申请日是1993年9月7日的美国申请，它是序号为07/980,594，申请日是1993年1月19日的美国分案申请，其专利号为5,281,408，公告日为1994年1月25日，这一美国专利是序号为07/680,984，申请日是1991年4月5日的美国分案申请，此申请的专利号为5,205,290，公告日为1993年4月27日。
上述每份公开的申请在这里作为一个整体结合参考。
本发明领域本发明涉及计算机化X射线断层照相术，特别涉及计算机化X射线断层照相术对比剂的稳定化的、基本均匀的悬浮液。
本发明背景计算机化X射线断层照相术(CT)通常用于包括诊断腹腔和盆腔疾病等身体各种疾病和不适的诊断技术。仅在1978年，便进行了约780万人体CT扫描。
CT成像包括测量物体射线密度。一般是Hounsefield单位(HU)表示射线密度。(HU)是物体对计算机X射线断层照相术X-射线相对吸收的量度，并与电子密度成正比例。已把水的HU值人为地定为0，空气的HU值为-1000，稠密骨密质的HU值为1000。
人体各种组织具有相似的密度，这就对具有相似密度组织CT视觉成像的生成造成困难，而且它们是彼此近似的。例如，将胃肠(GI)道与相邻结构，包括如血管与淋巴结的CT成像分离开是困难的。现已相应地发展尝试了改变不同组织的相对密度，从而提高了CT的诊断效率的对比介质。CT对比剂用于多数CT成像扫描，例如，1978年，进行了780万人体CT扫描，其中660万人使用了静脉内对比剂，以提高血管和/或内脏的成像。
对胃肠(GI)道造影的传统的CT对比剂通常是以射线密度，非吸收性，重金属物质为基础的，这些物质在肠通过吸收X-射线传输而成像中帮助提高肠腔的射线密度，这些对比剂通常是钡和碘化合物，包括如硫酸钡。硫酸钡和碘化合物用于GI道的成像已60多年，如今它们被广泛用于提高GI道上部和下部的成像它们通常增加人体某些区域的电子密度，从而被归类为“阳性对比剂”。
尽管它们的广泛用途，但钡和碘化合物也有许多缺陷。例如，它们通常不能与其它和/或包括血管成像技术在内的较新成像技术配伍。例如，在CT血管造影照片(CTA)中这种非配伍性是明显的在CTA中，静脉注射碘化剂，并在对比物聚集期间得到成像。高度详细的血管成像通常是用CTA通过重新形成轴成像产生一个脉管组合画面来得到的。在重新形成期间，最佳血管画面基于测量显象脉管的密度。为了进行这一成像，减去各种基线成像，然而，在肠射线密度对比剂，例如碘化合物存在下血管最佳成像变形并模糊不清。所以，如果在任何阳性对比剂如钡和碘化合物存在下，同时进行GI道的CTA和CT则会遇到困难。
此外，通用合适的CT对比剂的寿命对浓度通常极其敏感，如果浓度太低，观察不到对比。如果浓度太高，射线硬度增加并在产生的CT成像中观察到拖影。另外，典型地，在用通常合适的对比剂显象肠粘膜中会遇到困难。
因此，对于CT，需要新的和/或更好的对比剂。此为本发明的目的所在，以及其它重要的部分。
本发明概述本申请涉及稳定化的，基本均匀的悬浮液。特别是，一方面提供一种稳定化的、基本均匀的气体悬浮液。悬浮液的Hounsefield单位(HU)负密度值大约是-40或更少，在优选形式中，悬浮液包含稳定的微球体。如果需要，悬浮液可以进一步含有稳定剂、增稠剂和/或分散剂。
另一方面，本发明涉及稳定均匀悬浮液的气体前体。在优选形式中，悬浮液包含稳定化的微球体。如果需要，悬浮液可以进一步含有稳定剂、增稠剂和/或分散剂。
本发明的又一方面涉及计算机化X射线断层照相术对比介质。对比剂含有稳定化的、基本均匀的气体悬浮液。至少一部分气体衍生于气体前体。在优选形式中，悬浮液包含稳定化的微球体。
本发明的又一方面涉及制备稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液的方法。方法包括在气体前体存在下，搅拌稳定物质的水相悬浮液。在优选方案中，搅拌包括振荡或涡旋。
本发明的又一方面涉及制备计算机化X射线断层照相术对比介质用稳定化的基本均匀的气体悬浮液的方法。该方法包括在气体前体存在下，搅拌稳定物质的水相悬浮液。该方法进一步包括激活气体前体。在优选方案中，搅拌水相悬浮液包括振荡或涡旋。又在优选方案中，气体前体的激活包括在体内将液态气体前体相转移成气体。
本发明的又一方面涉及提供患者内部区域成像的方法。方法包括对患者给用上述悬浮液。该方法还包括用计算机化X射线断层照相术扫描患者以得到明显的区域成像。
本发明另一方面还涉及提供患者内部区域成像的方法。该方法包括对患者给用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液。使气体前体在体内经受从液态相转移成气体的过程，用计算机化X射线断层照相术扫描患者以得到患者任何疾病组织的可视成像。
本发明还涉及诊断患者疾病组织存在的方法。该方法包括对患者给用上述悬浮液。该方法进一步包括用计算机化X射线断层照相术扫描患者以得到患者任何疾病组织的可视成像。
本发明另一方面还涉及诊断患者疾病组织存在的方法。该方法包括对患者给用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液，使气体前体在体内经受从液态相转移成气体的过程，以及用计算机化X射线断层照相术扫描患者以得到患者任何疾病组织的可视成像。
本发明的又一方面涉及制备用于患者的计算机化X射线断层照相术用对比介质的方法。该方法包括对患者给用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液。该方法进一步包括使气体前体在体内经受从液态相转移成气体的过程，以提供对比介质。
本发明的这些和另一些方面将在本说明书和权利要求中展示得更清楚。
本发明详述如上所述并于全部公开中，除非另有指明，应当理解，下列术语具有下列意义。
“悬浮液”是指混合物，漂浮在液体中细碎的悬散剂或乳剂。颗粒可以是固态、液态或气态的。
“乳剂”是指两种或两种以上液体的混合物，并且、通常是胶体混合物的形式。
“稳定化的”是指已产生的，具有最小凝集的漂浮在液体中细碎胶体颗粒的混合物悬浮液。优选地悬浮液在某一时间周期保持稳定。如下文详细讨论的那样，本发明某些优选方案包括稳定的微球体悬浮液。在这部分内容中，术语“稳定的”是指对于由下列情况产生的降解具有基本耐受性的微球体，例如，由微球体内侧结构和组成的完整性的损坏和/或由微球体中包封的任何气体或气体前体显著部分的损坏而产生的降解。如上文所指出，本发明的悬浮液对于某个时间的时段是稳定的。优选地，悬浮液在使用其，包括例如使用计算机化X射线断层照相术对患者区域产生可见影象的悬浮液的时段内是稳定的。而优选地，悬浮液的时段稳定性至少容许对患者给用悬浮液并接着用计算机化X射线断层照相术对患者进行扫描。
“稳定物质”是指生物相容的并能稳定本发明悬浮液的物质。关于悬浮液，包括例如细碎液滴和/或气泡，稳定物质能最小聚集液滴和/或气泡。关于包括微球体悬浮液的方案，稳定物质能够促进微球体的形成，一旦形成，也能增强微球体对于由微球体内侧结构和组成的完整性的损坏和/或由微球体中包封的任何气体或气体前体显著部分的损坏而产生降解的耐受性。在优选方案中，稳定物质将上述性质赋予某一时段的悬浮液。优选稳定物质是能够在悬浮液容许使用的时段内，包括例如作为计算机化X射线断层照相术对病区产生可见影象的悬浮液使用时段内能稳定悬浮液。因此，稳定物质优选能够在某一时段内稳定本发明悬浮液，至少容许对患者给用悬浮液并接着用计算机化X射线断层照相术对患者进行扫描。在某些优选方案中，稳定物质包括表面活性剂。这里所用的“表面活性剂”是指能够改变(i)水溶液表面张力；(ii)两种液体之间的表面张力；和/或(iii)液体与固体之间表面张力的表面活性剂。总之，表面张力的改变包括表面张力的降低。表面活性剂可以具有净的中性、阳性或阴性电荷。在某些优选方案中，稳定物质包括聚合物，在这里所用的“聚合物”是指两个或两个以上重复单元化学键合而形成的分子。因此，术语“聚合物”包括例如是二聚体、三聚体和低聚物。聚合物可以是合成的、天然产生的或半合成的。在优选方案中，术语“聚合物”是指含有10个或更多重复单元的分子，在某些其它优选方案中，稳定物质包括非聚合物质，包括例如单体分子。
“分散剂”是指当加入胶体颗粒的悬浮介质时的表面活性试剂，包括，例如通常促进悬浮液颗粒均匀分离的分散剂。在某些优选方案中，分散剂包括聚合硅氧烷化合物。
“类脂”指包括亲水成分和疏水成分的合成、半合成或天然产生的两性化合物。类脂包括例如脂肪酸、中性脂肪、磷脂、糖脂、脂肪醇和蜡、萜烯和类固醇。
“烷基”指可以是具有1-约30个碳原子的直链或支链脂肪烃基。“低级烷基”指具有1-约个碳原子的烷基。“高级烷基”指具有约10-约30个碳原子的烷基。烷基可以是任意由一个或更多可以是相同或不相同的烷基取代基取代，这里“烷基取代基”包括例如卤素、芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、羧基烷氧基羰基、氧代和环烷基。沿着烷基可任意接入一个或一个以上的氧、硫或取代的氮原子，其中，氮的取代基是低级烷基。烷基可以是直链或支链的。“支链”指烷基基团中如甲基、乙基或丙基的低级烷基连接到直链烷基上。典型的烷基包括甲基、乙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十三基、十四基、十五基和十六基。优选的烷基包括具有1-约4个碳原子的低级烷基和具有约10-约16个碳原子的高级烷基。
“微球体”指特征在于存在内部空间的小球体。这样的球体包括例如脂质体、胶囊、气泡、微气及极其类似物。优选由在此描述的稳定物质所产生的微球体。下面所详细讨论的那样，本发明某些方案包括含有类脂的悬浮液。在产生于这些如悬浮液的微球体中，类脂可以是单层或双层的形式。而且，单层或双层类脂可用于形成一个或一个以上的单层或双层物。在一个以上的单层或双层的情况下，单层或双层通常是同轴的。因此，类脂可以用于形成单一层(unilamellar)微球体(包括单层或双层)，低聚层微球体(包括大约两个或大约三个单层或双层)或多层微球体(包括大约多于三个单层或双层物)。微球体的内部空间可以包含预想的液体，包括例如含水类脂，气体，气体前体，和/或固体或溶质物质。
“气体填充的微球体”指包封气体的微球体。“气体前体填充的微球体”指包封气体前体的微球体。微球体可以是由气体和/或气体前体最小地、部分地或基本完全地填充。在优选方案中，微球体由气体和/或气体前体基本完全地填充。
“增稠剂”指任何各种通用的亲水物质，当它与本发明悬浮液混合时，起粘度调节剂、乳化和/或溶解剂、悬浮剂和张力增强剂的作用。预计，增稠剂由于这些性质能够帮助悬浮液保持稳定。
“脂质体”指球簇或两性化合物(amphipathic)的凝集，典型地包括以一个或一个以上同轴层例如双层形式的类脂化合物。在这里，它们也可以作为类脂微球体。
“半合成聚合物”指天然产生的已经化学修饰的聚合物，天然产生的聚合物的实例包括例如多糖。
“生物相容的”指通常不伤害生物功能的物质，而且将不导致任何程度不可接受的毒性，包括变态反应和疾病症状。
“患者”指动物，包括哺乳动物，优选人。
本发明部分目的是稳定化的、基本均匀的悬浮液。在优选方案中，提供稳定化的、基本均匀的气体悬浮液。悬浮液的特征是具有负密度。这个负密度使得本发明悬浮液特别适合于作为计算机化X射线断层照相术(CT)的对比剂。优选悬浮液具有负密度大约为-40Hounsefield单位(HU)，或更少。在进一步优选方案中，悬浮液具有负密度大约为-50Hounsefield单位(HU)，或更少，如大约-60(HU)、-70(HU)、-80(HU)和-90(HU)，更优选具有负密度大约为-100(HU)，或更少，如大约-110(HU)、-120(HU)、-130(HU)、-140(HU)、-150(HU)、-160(HU)、-170(HU)、-180(HU)和-190(HU)。进一步优选悬浮液具有负密度大约为-200(HU)或更少，如大约-210(HU)、-220(HU)、-230(HU)、-240(HU)、-250(HU)、-260(HU)、-270(HU)、-280(HU)、和-290(HU)，更优选大约为-300(HU)或更少，如大约-310(HU)，-320(HU)、-330(HU)、-340(HU)、-350(HU)、-360(HU)、-370(HU)、-380(HU)和-390(HU)。悬浮液具有负密度大约为-400(HU)，或更少，如大约-410(HU)、-420(HU)、-430(HU)、-440(HU)、-450(HU)、-460(HU)、-470(HU)、-480(HU)、和490(HU)更为优选，更优选具有负密度大约为-500(HU)或更少。
本发明悬浮液具有高度适宜的稳定性质。的确，能如述形成的悬浮液对于某一时段内保持稳定是本发明令人吃惊和意想不到的优点。如上所述，本发明的悬浮液至少在对患者区域产生可视影像如CT成像的时段内是非常稳定的。本发明另一个令人吃惊和意想不到的优点是与各种现有技术对比剂有联系的悬浮液通常缺乏测量稳定性，例如，Quay在WO 94/16739的国际申请中公开了超声对比剂，它具有5天到1年的稳定性。这样高的稳定性有某些优点，包括例如贮存期限长，可消除对于重复制备新鲜对比剂的需要。然而，保持这样长时间周期稳定的对比剂造成从体内难以代谢和排泄的严重缺陷。这样稳定的对比剂能够在患者体内、特别是在脂肪组织和肝脏中积累。由于长期受这样的对比剂的作用，其对健康的影响是未知的，因而受到人们特别的关注。
除它们用作计算机化X射线断层照相术对比剂的优异效果外，本发明悬浮液还通常在整个使用期间保持稳定，并且通常不明显地超该出时间框架，典型地时间周期例如至少容许给患者用药并用CT扫描产生可见影像。因此本发明悬浮液至少在大约几分钟内是稳定的。如果需要，能配制在比几分钟更长的时间内稳定的悬浮液。例如，根据本文所述的方法，能配制在几小时或大约一天内稳定的悬浮液，如果需要，能配制在直至几天内稳定的悬浮液，基于本发明公开的内容，对于本领域普通技术人员是显而易见，即任何特殊悬浮液稳定的时间长度都取决于各种因素，例如包括悬浮液的成分，制备悬浮液的方法，形成以后悬浮液存在的环境，等等。基于各种因素，本发明悬浮液在大约几分钟到大约几天后，将开始离析并失去均一性。因此，悬浮液在给患者用药并用例如CT对患者扫描的时间内保持稳定。希望本发明悬浮液通常在使用后不保持明显的稳定性。例如，通常期望它们在超过对患者给药和扫描所需的时间以外不保持稳定性。因此，本发明悬浮液能够由患者快速代谢掉，而在脂肪组织和器官中没有危险的积累。
人们吃惊且未曾预料地发现用极小的努力就能方便地存储均匀的悬浮液。均匀性对于均匀精确的计算机化X射线断层照相术扫描是重要的，并且仅通过搅动悬浮液便能容易地保持。例如，这样的搅动能够采取振荡悬浮液的形式。搅动悬浮液的技术在下列有关制备本发明悬浮液的方法中进行了详细描述。在搅拌和重新悬浮以后，悬浮液将在如上述从几分钟到几天的时间内保持稳定。因此本发明悬浮液具有潜在的无限期存储寿命，因为离析和/或其他非均匀的混合物很容易达到重新悬浮。气体和气体前体在本发明一个方面中，悬浮液包含气体。优选的气体是极其稳定的气体。这里所用的术语稳定的气体指基本惰性的和生物相容的气体。优选在水介质中具有低溶解度和/或弥散性的气体。此外，优选对本发明悬浮液提供所需要的负密度值，包括如上所述的负密度值为大约-40(HU)或更少那些气体特别优选气体，如全氟代烃，因为它们在水介质中弥散性小，和相对地不溶解。
可以掺入本发明组合物的气体实例选自由空气、稀有气体、例如氦、氖、氩和氙，二氧化碳、氮、氟、氧、含硫气体，例如六氟化硫、四氟化硫、碳氟化合物、全氟代烃气体，极其混合物组成的组。如上所述，优选的气体是金氟化碳合物。全氟代烃气体实例包括，例如全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟环丁烷极其混合物。认为不同类型气体混合物，例如全氟代烃气体和其他类型气体，例如空气的混合物，也能用于本发明悬浮液。在国际申请Quay WO93/05819中所讨论的气体，包括在此描述的高“Q”因子气体，也可使用。国际申请QuayWO93/05819公开的内容在这里以其整体作为参考。此外，顺磁气体和同位素气体，例如17O也可用。认为含有后边这些气体的悬浮液也可用作除CT外与诊断技术有关的技术(MRI)，例如核磁共振成像的对比剂。
根据本申请公开的内容，对于本领域技术人员来说其他气体，包括上面例举的气体是显而易见的。
在本发明特别优选方案中，悬浮液含有微球体。微球体是直径非常小的气泡，含有包围或包封用液体或气体填充的小室或空腔的“皮”或“壳”。特别优选与衍生于气体前体的气体有关的微球体，而气体前体也是本发明优选的。
气体前体包括在体内能转化成气体的物质。前体的实例是在室温下是液体但给入患者后，在体内经过相变变成气体的物质。优选的气体前体是与生物相容的，并且在体内产生的气体也是与生物相容的。此外，优选气体前体是当转化成气体时对本发明的悬浮液提供所需的负密度包括如上所述的有关气体的负密度值大约-40HU或/更少的物质。合适的气体前体实例是全氟代烃。因为技术人员懂得，当最初制备悬浮液时，特定的全氟代烃以液体状态存在，因此的被用作气体前体。另一方面，全氟代烃可以被直接用作气体。全氟代烃是作为液体还是气体而使用通常取决于它的液/气相变温度，或沸点。例如，优选的全氟代烃、全氟戊烷的液/气相变温度(沸点)是29.5℃。这意味着全氟戊烷在室温(大约25℃)时将是液体，但是在人体正常温度(37℃)下将变成气体，37℃高于上述全氟戊烷的相变温度。因此在正常环境下，全氟戊烷是气体前体。进一步的实例有全氟戊烷的同系物，为全氟丁烷和全氟己烷。全氟丁烷的液/气相变温度是4℃，而全氟己烷的液/气相变温度是57℃。因此，尽管全氟丁烷作为气体更恰当，但它作为气体前体是有潜在用途的，而全氟己烷仅因其沸点较高而通常被用作气体前体。
许多物质能被用作本发明组合物的气体前体。只需物质能够在合适的温度下相变为气体。合适的气体前体包括，例如六氟丙酮、异丙基乙炔、丙二烯、四氟丙二烯、三氟化硼、1，2-丁二烯、2，3-丁二烯、1，3-丁二烯、1，2，3，-三氯-2-氟-1，3-丁二烯、2-甲基-1，3-丁二烯、六氟-1，3-丁二烯、丁二炔、1-氟丁烷、2-甲基丁烷、全氟丁烷、1-丁烯、2-丁烯、2-甲基-1-丁烯、3-甲基-1-丁烯、全氟-1-丁烯、全氟-2-丁烯、4-苯基-3-丁烯-2-酮、2-甲基-1-丁烯-3-炔、硝酸丁酯、1-丁炔、2-丁炔、2-氯-1，1，1，4，4，4-六氟丁炔、3-甲基-1-丁炔、全氟-2-丁炔、2-溴-丁醛、氧硫化碳、丁烯腈、环丁烷、甲基环丁烷、八氟环丁烷、全氟环丁烷、3-氯环戊烷、全氟环戊烷、八氟环戊烷、环丙烷、全氟环丙烷、1，2-二甲基-环丙烷、1，1-二甲基环丙烷、1，2-二甲基-环丙烷、乙基环丙烷、甲基环丙烷二乙炔、3-乙基3-甲基二氮丙啶、1，1，1-三氟二乙基偶氮、六氟二甲基胺、二甲基乙基胺、双-(二甲基瞵)胺、全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛烷、2，3-二甲基-2-降冰片烷、全氟二甲基胺、氯化二甲基氧翁、1，3-二氧戊环-2-酮、4-甲基-1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1-三氟乙烷、1，1，2，2-四氟乙烷、1，1，2-三氯-1，2，2-三氟乙烷、1，1-二氯乙烷、1，1-二氯1，2，2，2-四氟乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氯-1，1，2，2，2-五氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、1，1-二氯-2-氟乙烷、1-氯-1，1，2，2-四氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、氯乙烷、氯五氟乙烷、二氯三氟乙烷、氟乙烷、全氟乙烷、硝基五氟乙烷、亚硝基五氟乙烷、全氟乙基胺、乙基乙烯基醚、1，1-二氯乙烷、1，1-二氯-1，2-二氟乙烷、1，2-二氟乙烷、甲烷三氟甲磺酰氯、三氟甲磺酰氟、溴二氟亚硝基甲烷、溴氟甲烷、溴氯氟甲烷、溴三氟甲烷、氯二氟硝基甲烷、氯二硝基甲烷、氯氟甲烷、氯三氟甲烷、氯二氟甲烷、二溴二氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯氟甲烷、二氟甲烷、二氟碘甲烷、二硅烷基甲烷、氟甲烷、碘甲烷、碘三氟甲烷、硝基三氟甲烷、亚硝基三氟甲烷、四氟甲烷、三氯氟甲烷、三氟甲烷、2-甲基丁烷、甲醚、甲基异丙基醚、乳酸甲酯、亚硝酸甲酯、甲基硫、甲基乙烯基醚、季戊烷、一氧化二氮、1，2，3-十九烷-三羧酸-2-羟基三甲基酯、1-壬烯-3炔、1，4-戊二烯、正-戊烷、全氟戊烷、4-氨基-4-甲基戊烷-2-酮、1-戊烯、2-戊烯(顺式)、2-戊烯(反式)、3-溴戊-1-烯、全氟戊-1-烯、四氯苯二甲酸、2，3，6-三甲基哌啶、丙烷、1，1，1，2，2，3-六氟丙烷、1，2-环氧丙烷、2，2-二氟丙烷、2-氨基-丙烷、2-氯丙烷、七氟-1-硝基丙烷、七氟-1-亚硝基丙烷、全氟丙烷、丙烯、六氟丙烷、1，1，1，2，3，3-六氟-2，3-二氯丙烷、1一氯丙烷、氯丙烷-(反式)、2-氯丙烷、3-氟丙烷、丙炔、3，3，3-三氟丙炔、3-氟苯乙烯、十氟化二硫(S2F10)、2，4-二氨基甲苯、三氟乙腈、三氟甲基过氧物、三氟甲基硫化物、六氟化钨、乙烯基乙炔和乙烯基醚。
全氟代烃被优选为用于本发明悬浮液的气体和气体前体。优选具有从大约C1(4个氟原子)到大约C9(20个氟原子)的全氟代烃。全氟代烃C1-C9的实例是选自全由氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟环丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛烷和全氟壬烷组成的全氟代烃组。优选地，全氟代烃选自由全氟戊烷、全氟己烷和全氟辛烷组成的组，并特别优选全氟戊烷。
在有些优选方案中，气体例如、空气或全氟代烃气体与液体全氟代烃，例如，全氟辛基溴化物(PFOB)、全氟萘烷、全氟十二氢化萘、全氟辛基碘化物、全氟三丙基胺和全氟三丁基胺相结合。
如上所述，本发明有些优选方案涉及含有微球体的悬浮液。如果需要，微球体的大小能通过各种方法调节，包括例如微滴乳化作用、旋涡、挤压、过滤声波、均化，反复循环如下过程冷冻和解冻、在压力下挤压通过一定大小的孔径，和类似的方法。对于血管内使用，优选微球体直径小于约30μm，和更优选小于约12μm。对于目的血管内使用，例如包括与一定的组织如肿瘤组织结合，微球体能相当小，例如直径小于100nm。对于吸入或胃肠使用的微球体可相当大，例如大小可达毫米。优选地，筛选直径在大约20μm和100μm之间的微球体。下表列出了在相当接近于人体温度(37℃)或低于人体温度的情况下，从液体相到变气体的一系列气体前体，表中还列出乳滴的直径大小，需要形成微球体的最大直径为约10μm。
表1气体前体的物理特性和形成10μm微球体的乳滴直径
*来源Chemical Rubber Company Handbook of Chemistry and Physics RobertC.Weast and David R.Lide，eds.CRC Press，Inc.Boca Raton，Florida.(1989-1990).
本发明的一方面是通过有限溶解度的气体的使用，使悬浮液，包括含有微球体的悬浮液的利用最佳。这里所用的有限的溶解度指气体扩散能力，例如由于在其周围的水介质中的溶解性能而扩散出微球体的能力，在水介质中较大的溶解度赋以微球体气体梯度，气体将有一个扩散出微球体的倾向。在水介质中较小的溶解度将减小球体与界面的梯度，便将阻碍气体扩散微球体。优选在微球体中截留的气体，其溶解度小于氧，即32份水中1份气体。见Matheson Gas Data Book，MathesonCompany，Inc.(1966)。更优选在微球体中截留的气体，其在水中的溶解度小于空气的溶解度；更优选在微球体中截留的气体，其在水中的溶解度小于氮的溶解度。
掺入本发明悬浮液的气体和/或气体前体的量可以变化，该量取决于各种因素，包括，例如如果需要，悬浮液中要用到的特别的稳定物质，增稠剂，分散剂，等等。优选气体或气体前体的浓度至少足以赋予悬浮液需要的性质，包括例如被用于对比剂时需要的负密度值。在优选方案中，包括气体前体，也包括气体前体的结合，气体前体的总浓度是约从0.1Wt.％到约5Wt.％。更优选气体前体的总浓度是从约0.5Wt.％到约2Wt.％，甚至更优选气体前体的总浓度是约1Wt.％。稳定物质在本发明某些优选方案中，悬浮液进一步包括稳定物质。令人吃惊和难以预料地发现在这里定义的稳定物质能够基本均匀的悬浮液的形成。同样令人吃惊和难以预料地发现在这里定义的稳定物质能够促进微球体的形成，一旦形成，也增强了微球体由例如微球体壁结构或组成的完整性的损失和/或由包封于微球体中任何显著部分的气体或气体前体的损失而产生降解的耐受性。
许多物质均适于作为本发明悬浮液中的稳定物质。优选稳定物质是与生物相容的。增强悬浮液粘性的物质也是优选的。已发现，包括例如表面活性剂的表面活性试剂特别适合于作为本发明悬浮液中的稳定物质。在优选方案中，表面活性剂选自于阴离子、阳离子、两性离子和非离子表面活性剂。这些表面活性剂中优选非离子表面活性剂。
非离子表面活性剂的实例包括例如聚氧乙烯-聚氧丙烯甘醇嵌段共聚物、脱水山梨醇脂肪酸酯和含氟表面活性剂。其中优选的聚氧乙烯-聚氧丙烯甘醇嵌段共聚物是α羟基-ω-羟基聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)-聚(氧乙烯)嵌段共聚物。后者这些嵌段共聚物通常指poloxamer共聚物。特别适合于作为本发明使用的poloxamer共聚物实例包括，例如poloxamerF68、poloxamerL61和poloxamer L64，这些poloxamer共聚物以Spectmm1100(Houston，TX)的商品得到。
在这些脱水山梨醇脂肪酸酯中，优选的例如，脱水山梨醇高级烷基醇的聚(氧-1，2-亚乙基)衍生物。这样的脱水的梨醇酯的例子包括单月桂酸脱水山梨醇酯，单油酸脱水山梨醇酯，单棕榈酸脱水山梨醇酯和单硬脂酸脱山梨醇酯。以及脱水山梨醇的其它衍生物，典型地指聚山梨酸酯类包括聚山梨酸酯20，40，60和80。不同的聚山梨酸酯可以Spectrum 1100(Houston，TX)购得。
含氟表面活性剂包括含有一个或更多的氟原子表面活性剂。这样的表面活性剂包括以DuPont Chemicals(Wilmington，DE)的商品得到，并且以ZonylTM商品名售出，包括，例如ZonylTMFSN-100和ZonylTMFSO-100。
如上所述，离子表面活性剂例如，阴离子和阳离子表面活性剂可用于本发明悬浮液的稳定物质。合适的阴离子表面活性剂的实例是十二烷基硫酸钠，从WitcoCorp.(New York，NY)得到。合适的阳离子包括铵盐，特别是用高级烷基基团取代的铵盐。其中包括的铵盐是溴化月桂基三甲基铵、溴化十六烷基三甲基铵、溴化十四烷基三甲基铵氯化烷基二甲基苄基铵、(这里烷基是例如，C12，C14或C16)、溴化/氯化苄基二甲基十二烷基铵、溴化/氯化苄基二甲基十六烷基铵、溴化/氯化苄基二甲基十四烷基铵、溴化/氯化十六烷基二甲基乙基铵、和溴化/氯化十六烷基吡啶翁。此外，阳离子表面活性剂可以含有阳离子类脂，包括，例如氯化N-[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-三甲基铵(DOTMA)，1，2-二油酰氧-3-(三甲基铵))丙烷(DOTAP)，1，2-二油酰-e-(4’-三甲基铵)-丁酰-sn-甘油(DOTB)和载有阳离子聚合物的类脂，如多熔素和多精氨酸。
基于本申请公开的内容，其它表面活性剂，包括上述这些实例对本领域普通技术人员将是显而易见。
如上文所指出，其中与稳定物质配合的悬浮液代表本发明优选的实施方案。预计悬浮液能够含有稳定物质的混合物。
存在于本发明的悬浮液中的每一种稳定物质的浓度能够变化并取决于各种因素，包括，例如所用的特定的稳定物质、气体、气体前体等等。优选的稳定物质的总浓度至少足以使悬浮液稳定。如果悬浮液含有微球体，优选稳定物质的总浓度至少促进微球体的形成以及后续的稳定。在优选方案中，每一种稳定物质的浓度是从大约10ppm-大约1000ppm。更优选每一种稳定物质的浓度是从大约50ppm-大约750ppm。更优选每一种稳定物质的浓度是从大约100ppm-大约500ppm。增稠剂在本发明一些优选方案中，悬浮液进一步含有增稠剂。如果需要，本发明悬浮液能够用两种或更多的增稠剂。用于本发明悬浮液合适的增稠剂包括淀粉、树胶、果胶、酪蛋白、明胶和藻胶体(phycocolloids)包括角叉胶、藻朊、和琼脂；半合成纤维素衍生物；聚乙烯醇和乙烯羧酸酯；和皂土、硅酸盐和胶体硅。上述物质实例是，例如碳水化合物、磷酸化及其磺化衍生物；琼脂糖；聚醚，包括，例如具有分子量为约400-约100,000的聚醚；二和三羟基烷和它们具有分子量如约200-约50,000的聚合物；阿拉伯胶；二乙醇胺；一硬脂酸甘油酯；羊毛脂醇；卵磷脂；一和二甘油酯；一乙醇胺；油酸；油醇；硬脂酸50聚氧乙烯酯；聚羟氧基35蓖麻油；聚羟氧基10油醚；聚羟氧基20鲸蜡醇硬脂酰醚；硬脂酸40聚羟氧基酯；1，2-丙二醇二乙酸酯；1，2-丙二醇一硬脂酸酯；硬脂酸钠；硬脂酸；三乙醇胺；乳化蜡；琼脂；藻酸；一硬脂酸铝；皂土；糖糊；carbomer 934P；羟乙基淀粉；羧甲基纤维素；钙和钠和钠12；角叉菜；纤维素；葡聚糖；明胶；瓜耳胶树胶；刺槐豆胶；硅酸镁铝；羟乙基纤维素；羟丙基甲基纤维素；镁-铝-硅酸盐；甲基纤维素；果胶；聚氧化物乙烯；聚烯吡酮；1，2-丙二醇藻酸酯；二氧化硅；藻酸钠；黄蓍胶；苍耳烷胶；α-d-葡萄糖酸内酯；甘油；甘露醇；聚乙二醇(PEG)；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；聚乙烯醇(PVA)；聚-丙二醇；吐温；山梨糖醇；丙二醇；和甘油。
其中上述增稠剂优选的是树胶，包括苍耳烷胶，纤维素衍生物，包括甲基纤维素和羧甲基纤维素，和角叉菜。其中特别优选的增稠剂是甲基纤维素。
当增稠剂存在于本发明悬浮液中时其浓度可以变化，并取决于各种因素，包括，例如所用的特定的增稠剂，气体，气体前体，稳定物质，等等。优选增稠剂的总浓度至少足以赋予悬浮液需要的性质，包括，例如悬浮液的稳定性。在优选方案中，增稠剂的浓度是从约0.1Wt.％到约10Wt.％，更优选增稠剂的浓度是从约0.2Wt.％到约7.5Wt.％，甚至更优选浓度是约0.25Wt.％到5Wt.％，更优选增稠剂的浓度是从约0.3Wt.％到约3Wt.％。分散剂本发明悬浮液还优选含有一种或多种分散剂。预计分散剂也能对悬浮液的稳定性起作用。在一些优选方案中，分散剂含有聚合硅氧烷化合物。优选聚合硅氧烷化合物用烷基基团基本或完全烷基化，优选的烷基基团为低级烷基基团。更优选聚合硅氧烷化合物基本或完全甲基化。在本发明悬浮液中，特别适合用作为分散剂的聚合硅氧烷化合物是α-(三甲基甲硅烷基)-ω-甲基聚[氧(二甲基亚甲硅基)]，也指二甲硅油，并从Dow Corning(Midland，MI)得到。
悬浮液中包括的分散剂的量可以变化，并取决于各种因素，包括，如果需要，悬浮液中所用的，例如特定的分散剂，稳定物质，增稠剂，气体，气体前体等等。优选的总浓度至少足以赋予悬浮液需要的性质，包括，例如促进悬浮液具有需要稳定性。在优选方案中，分散剂的浓度是从约10ppm到约1000ppm，更优选分散剂的浓度是从约50ppm到约750ppm，甚至更优选浓度是约100ppm到500ppm.辅助剂除了上述讨论的稳定剂、增稠剂和分散剂外，如果需要，本发明悬浮液中可以结合存在各种助剂。例如助剂可以根据其物理和/或化学性质赋予悬浮液需要的性质。例如助剂也能对悬浮液的形成和/或稳定起作用。在包括微球体的方案中，辅助剂可以促进微球体的形成和/或稳定。此外，助剂可以提高本发明稳定物质的功能，或除赋予本发明稳定物质需要的性质外，还可以对一些需要的性质起作用。例如特定的助剂能够提高悬浮液特殊传入感觉器官(organoleptic)的性质。
根据目前公开的技术，对于本领域普通技术人员是显而易见，但特定物质当与本发明悬浮液配合时，是否像上述的那样起稳定剂、增稠剂或分散剂的作用，或是否起辅助剂的作用并不总是清楚的，这是因为所述的物质性能通常是凭经验测定的，或通过关于特定稳定悬浮液的形成产生的结果测定的。例如像下文更充分描述的那样，通常作为本发明内容中辅助剂的与生物相容的类脂和水或盐水简单结合，振荡，高压蒸汽消毒后常得到混浊溶液。这样的混浊溶液具有对比剂的功能，但有碍美观，并可蕴涵以不溶解形式或不悬浮的类脂颗粒而太稳定。这里被定义为增稠剂的丙二醇可以被加入，通过促进分散或类脂颗粒的溶解消除这种混浊。因此丙二醇也可以起改进微球体的形成和增加微球体膜或皮的表面张力的作用。丙二醇也能作为附加层起包裹微球体膜或皮的作用，从而，提供了附加的稳定作用。
根据目前公开的技术，用于制备稳定悬浮液的起稳定剂和/或辅助剂作用的物质，对于本领域普通技术人员是显而易见。这些物质包括，例如在D’Amgo，U.S.Patents Nos.4,684,479和5,215,680公开的常用表面活性剂，这里将公开的内容完整地结合起来参考。
附加辅助剂和/或稳定物质包括，例如油，如花生油、canola油、橄榄油、红花油、玉米油或任何其它熟知可被吸收的油，另一个稳定剂/辅助剂是海藻糖。
如上所述，生物相容的类脂可被包括在本发明悬浮液中。这样的类脂物实例包括，例如溶血类脂(lysolipids)，磷脂，如具有两个饱和和不饱和类脂的磷脂酰胆碱，包括，二油酰磷脂酰胆碱、二-十四酰磷脂酰胆碱、二-十五酰磷脂酰胆碱、二-十二酰磷脂酰胆碱、二-棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、和二-硬脂酸磷脂酰胆碱(DSPC)；磷脂酰乙醇胺，如二油酰磷脂酰乙醇胺、和二-棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；鞘类磷脂，如鞘磷脂；糖酯，如神经节甙酯GM1和GM2；葡萄糖酯；硫脂类；糖鞘类磷脂；磷脂酸，如二棕榈酰磷脂酸(DPPA)；棕榈酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；载有多聚体的类脂，包括亲水聚合物，如聚乙二醇、甲壳质、玻璃酸、或聚烯吡酮，优选载有多聚体的类脂物包括，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-PEG 5000(DPPE-PEG 5000)，是指连接平均分子量约5000具有PEG聚合物的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺聚合物；载有磺化的单-、双-、寡多糖聚合物，如阿聚糖、呋喃聚糖(fructans)、fucan、半乳聚糖、聚半乳醛糖酸、葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖(如菊糖)、果聚糖、岩藻依聚糖、角叉菜胶、galatocarolose、果胶酸、直链淀粉、支链淀粉(pullulan)、糖原、支链淀粉、纤维素、葡聚糖、石脐素、甲壳质、琼脂糖、角蛋白、软骨素、皮肤素、透明质酸、藻酸、苍耳烷胶、淀粉和各种天然均聚物或杂聚物，包括含有一个或多个如下醛糖、酮糖、酸或胺的物质赤藓糖、苏糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖、赤藓糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素二糖、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、古氨酸、赖氨酸、精氨酸、组胺酸、葡糖醛酸、葡糖二酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、和神经氨酸，及其天然存在的衍生物，胆甾醇和丁二酸胆甾醇酯；生育酚和丁二酸生育酚酯；磷酸二乙酰酯；磷酸十六酰酯；硬脂酰胺；心磷脂；具有脂肪酸短链(C6-C8)的磷脂；具有不对称酰基链的合成磷脂，如C6的第一酰基链和C12的第二酰基链；神经酰胺；聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇、聚氧乙烯脂肪醇醚、羟基硬脂酸甘油聚乙二醇酯、蓖麻醇酸甘油聚乙二醇酯、甾醇、乙氧化大豆甾醇、乙氧化蓖麻油、和硬脂酸聚氧乙烯脂肪酸酯；甾醇脂族酸酯、包括硫酸胆甾醇酯、丁酸胆甾醇酯、异丁酸胆甾醇酯、棕榈酸胆甾醇酯、硬脂酸胆甾醇酯、乙酸羊毛甾醇酯、棕榈酸麦角甾醇酯、和正-丁酸植物甾醇酯；糖酸甾醇酯、包括葡糖苷酸胆甾醇酯、葡糖苷酸羊毛甾醇酯、葡糖苷酸7-去羟胆甾醇酯、葡糖苷酸麦角甾醇酯、葡糖酸胆甾醇酯、葡糖酸羊毛甾醇酯、和葡糖酸麦角甾醇酯；糖酸和醇酯，包括，葡糖苷酸十二酯、葡糖苷酸硬脂酸酯、葡糖苷酸十四酯、葡糖酸十二酯、葡糖酸十四酯、和葡糖酸硬脂酸酯；糖和脂族酸酯，包括十二酸蔗糖酯、十二酸果糖酯、棕榈酸蔗糖酯、硬脂酸蔗糖酯、葡糖苷酸、葡糖酸、accharic acid、和多糖醛酸；皂草苷，包括，萨洒皂草配基、菝契配基、常春配基、石竹素、和毛地黄毒苷；二月桂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、二棕榈酸甘油酯、甘油和甘油酯、包括三棕榈酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、二肉豆蔻酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、长链醇，例如约有10-约30个碳原子，包括正-癸醇、十二醇、十四醇、十六醇、和十八醇；磷酸烷酯、膦烷基和亚磷酸烷酯； 6-(5-胆甾烷-3β-基氧)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖；二吡喃半乳糖；6-(5-胆甾烯-3β-基氧)己烷-6-氨基-6-去氧-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖；6-(5-胆甾烯-3β-基氧)己基-6-氨基-6-去氧-1-硫代-α-D-吡喃甘露糖；12-(((7’二乙氨基香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)十八酸；N-[12-(((7’二乙氨基香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)辛酸]-2-氨基棕榈酸；(4’-三甲基铵)丁酸胆甾烷酯；N-琥珀酰二油酰-膦基乙醇胺；1，2-二油酰-sn-甘油；1，2-棕榈酰-sn-3-琥珀酰甘油；1，3棕榈酰-2-琥珀酰甘油；1-十六烷基-2-棕榈酰甘油磷酰乙醇胺；棕榈酰单半胱氨酸；饱和脂肪酸，包括，例如十二、十三、棕榈酸和硬脂酸；和不饱和脂肪酸，包括，例如异十二酸、异十三酸、异棕榈酸和异硬脂酸；在一些方案中，优选辅助剂包含两个或更多类脂物的混合物。优选类脂混合物的实例是DPPC和DPPE-PEG-500的混合物。
如下面详细讨论的那样，可用各种方法制造包含微球体的本发明悬浮液。其中包括这些方法，例如振荡、干燥、气体滴注、喷雾干燥、等等。在包括类脂作为辅助剂用途的方案中，优选制备将类脂保持在胶体状态下的悬浮液，这里是双层类脂从胶体状态转化成液晶态的温度。见，Chapman et al.，J.Biol.Chem.1974 249，2512-2521，结合公开的内容完整地参考。下表列出了代表性类脂和它们的相转移温度。
表2饱和二酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸主链相转移温度
见Derek Marsh，CRC Handbook of Lipid Bilayers，P.139(CRC Press，BocaRaton，FL 1990).
优选用一种或更多种具有较高水结合能力的物质形成本发明悬浮液。如在GI区域中使用时，这样的物质能够结合大量的游离水分。这能使物质在GI道携载大体积液体，借此，填充和膨胀通道。填充和膨胀的GI道能够增强区域的CT成像。此外，优选进行GI区域成像时，形成悬浮液的物质基本不降解并不被GI区域吸收。因此，优选在GI道中最小的代谢和吸收，以避免除去对比剂。也避免由降解在GI道中可能形成气体。对于GI区域成像，优选物质能够置换空气并使对比介质中大量气泡降到最少。
如上所述，常需要结合一种或更多种能够增强悬浮液器官感觉性能的辅助剂。预计许多这些物质也能起稳定剂、增稠剂和/或分散剂的作用。其中能够增强悬浮液器官感觉性能的辅助剂包括，甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖、糖精、或天冬酰苯丙氨酸甲酯，和风味剂，如薄菏，冬青油、或樱桃风味剂。优选与本发明悬浮液结合的甜是味剂，优选的甜味剂是果糖。
包括在悬浮液中的感官增强剂的量能够变化并取决于各种因素，包括，例如，如需要，用于悬浮液的特定的稳定物质、增稠剂、气体、气体前体、分散剂等等，优选感官增强剂的浓度至少足以赋予悬浮液需要的性能，包括，例如提高味觉，在优选方案中，感官增强剂的浓度是从约0.1Wt.％-约10Wt.％，更优选感官增强剂的浓度是从约0.5Wt.％-约5Wt％，进一步优选浓度2Wt.％。含水稀释剂本发明稳定化的悬浮液、特别是含有微球体的悬浮液所需要的成分是在含水的环境中。上面讨论的许多稳定物质包括含有疏水和亲水性质的化合物。因此，在此环境中，能够预先安排本发明悬浮液形成具有高度稳定构象的微球体。稀释剂能用于产生含水环境，包括，但不局限于此，水或去离子水、或含任何量溶解盐而不干扰稳定悬浮液的产生和维持、或它们作为CT剂的水、和盐水和生理盐水。制备方法本发明稳定化的悬浮液可以通过一多种合适的方法制备。下面分别描述含有气体、气体前体的悬浮液，和既含有气体又含有气体前体的悬浮液。
使用气体的制备方法含有气体的悬浮液，可以通过在气体存在下，搅拌如果需要含有稳定物质，优选是表面活性剂的水溶液来制备。如果悬浮液中结合类脂，优选在低于类脂物从胶体相转移到液晶的温度下进行搅拌。这里所用的术语搅拌及其变化指气体从局部周围环境中被导入水溶液中时振荡该溶液的任何运动。振荡必须使其力量足以使包括微球体特别是气体填充的微球体的稳定悬浮液的形成。振荡必须是如旋转，如涡旋，左右，或上下运动。结合不同的运动类型。振荡也可以通过振荡容纳含水类脂的容器发生，或通过不振荡容器只振荡容器里的水溶液来发生。
另外，振荡可以人工或通过机械发生。可用的机械振荡包括，例如振荡台，如VWR系统(Cerritos，CA)振荡台，或Dental Mfg.Ltd.(Lyons，IL)的Wig-L-Bug振荡器都证明有优异的效果。已发现一定状态的振荡或涡旋可被用于制备优选大小范围的稳定微球体。优选振荡，并且优选用Wig-L-Bug机械振荡器进行振荡。根据这个优选方法，优选利用往复运动产生稳定悬浮液，并且特别是稳定的含有微球体悬浮液。更优选弧形往复运动，进一步优选弧形往复运动在约2°°和约20°°之间，更优选弧形往复运动在约5°°和约8°°之间，最优选往复运动在约6°°和约7°°之间，更特别优选在约6.5°°。预计往复运动及其弧形往复运动的速度对于形成微球体特别重要，优选往复运动数或全部来回循环数为从约1000-约20000/分，更优选往复运动数或全部来回循环数为从约5000-约8000。如上所述的Wig-L-Bug是机械振荡器，它提供每10秒2000杆冲撞，即6000次来回振荡/分。当然，来回振荡数取决于被搅动的内容物的量，量越大来回振荡数越少。产生振荡的另一个方法包括在高速或高压下逸出气体。
当然，优选大体积的水溶液，全部的力量将相应地增加。剧烈振荡被限定为至少约60转振荡运动/分，并被优选。更优选涡旋约60-300转/分，更优选涡旋约300-1800转/分。
依靠振荡形成的气体填充的微球体能被目测鉴定。除上述简单的振荡方法外，也能用完善的方法。这样完善的方法包括，例如液晶振荡气体输入法，和真空干燥气体输入法，如正在审核的美国序号为08/076250，申请日1993年6月11日的申请所述，这里结合此申请完整参考。当用这些方法时，气体填充的稳定的微球体可以在用多种常规准备技术中的任何一种包括与含有类脂的悬浮液有关的常规脂质体准备技术进行气体注入以前制备，这些对于本领域普通技术人员是显而易见的。其中的准备技术是冷冻-解冻，还有如声处理，螯合物透析，均匀化，溶剂泡制，微乳化作用，自然形成，溶剂蒸发，French pressure cell技术，可控除垢透析，等等，每个包括制备微球体的不同形式，Madden et al.，Chemistry and Physics ofLipids，1990 53，37-46，这里结合此申请完整参考。
根据这里描述的方法所制备的气体填充的微球体，其大小范围可以是从1微米以下到100μm以上。此外，挤压和消毒步骤以后，搅拌或振荡提供微球体的悬浮液，如果制备悬浮液含有类脂，则在溶液余物中基本没有或极少残余无水类脂相，(Bangham，A.D.，Standish，M.M，& Watkins，J.C.(1956)J.Mol.Biol.Vol.13，pp.238-252(1965)。
如果需要，气体填充的微球体的大小可以通过各种步骤被调节，包括微乳化、涡旋、挤出、过滤、声处理、均匀化、重复冷冻和解冻循环、在压力下通过固定大小的孔径挤出和相似方法。它们的形成用本发明微球体也是理想的，没有对大小做任何进一步的修饰。
气体填充的微球体可以通过简单的过滤挤出过程筛分；滤器孔径大小控制得到的气体填充的微球体的大小分布，通过使用两个或更多串联或叠架的过滤器，例如10μm过滤器继之以8μm过滤器，可以选择气体填充的微球体具有非常窄的7-9μm大小分布。过滤后，这些稳定的气体填充的微球体保持稳定状态超过24小时。
在使用前，把悬浮液从消毒瓶中移去时，筛分或过滤步骤可以用过滤装配完成，或优选可以在使用期间把过滤装配引入注射器中。筛分微球体的方法包括使用注射器时包含至少1个针桶，1个过滤器、和1个针头；并通过下列率取步骤进行包括通过装配到注射器的针桶和针头之间的过滤器，将所述的微球体压出，藉此，在微球体用作本发明的CT对比剂而对患者给用之前，将其筛分。率取步骤也可以包括将微球体抽入注射器中，过滤器将以同样的方式将进入注射器的微球体筛分。另一种方法是将已经借助其它方法筛分的微球体填充进注射器，在这种情况下，过滤器起到只是保证微球体具有需要的大小范围，或需要的最大尺寸，继之通过从注射器中挤出而给用。
在优选方案中，微球体溶液或悬浮液通过过滤器挤出，并在振荡以前加热消毒。一旦形成气体填充的微球体，便可以上述方法过滤筛分。在形成气体填充和气体前体的微球体以前，这些步骤具有的优点如，减少未水合稳定物质量，和提供相当高的填充微球体的气体的产率，也对患者准备了灭菌的气体填充的微球体。例如混合容器如小瓶或注射器可以填充过滤的稳定物质，然后，在混合容器中通过高压锅灭菌的悬浮液，将气体注入悬浮液，通过振荡灭菌容器，形成气体填充的微球体。优选配置的灭菌容器带有定位过滤器，使得气体填充的微球体在接触患者以前通过此过滤器。
这一优选方法的第一步是挤压稳定化合物的溶液使其通过过滤器，通过分解任何无水物质和暴露大表面积水合表面来减少未水合稳定物质量。优选过滤器孔径约0.1μm-约5μm，更优选约0.1μm-约4μm，进一步优选约0.1μm-约2μm，更优选约1μm。未水合化合物表现为非均一大小的无定形群，是不需要的。
第二步， 消毒提供了对欲作CT成像的患者给用的组合物。优选热消毒，优选在至少约100℃温度下热压消毒溶液来消毒，更优选在约100℃-约130℃热压消毒，进一步优选约110℃-约130℃，更优选在约120℃-约130℃，更优选在约130℃。优选至少加热约1分钟，更优选约10-约20分钟，进一步优选约15分钟。
如果需要，如上所述，第一步骤和第二步骤可以颠倒使用，或只使用两者之一。
如果消毒通过与加热消毒不同的方法进行加热温度下可以引起气体填充微球体破裂，则(灭菌)消毒可在气体填充的微球体形成之后进行。优选例如，在气体填充的微球体形成以前和/或以后可以使用γ射线。
使用气体前体的制备方法除前面提到的方案外，微球体中含有的气体前体可以依靠活化来形成，例如通过受到升高的温度、变化的PH、或光的作用、从液体如微球体中截留的液体相转移成气体状态，直至膨胀产生本发明稳定、均匀的悬浮液。在优选方案中，气体前体的活化将气体前体填充的微球体转化为气体填充的微球体，这个技术在正处于共待审的专利申请08/160232，申请日为1993年11月30日和08/159687，申请日为1993年11月30日中进行了详细的描述。这里结合公开的内容，完整地参考。
优选气体前体活化的方法是通过受到升高温度的作用。活化或转变温度和类似的术语指气体前体沸点的温度，在此温度下发生气体前体从液体到气体的相转移。有用的气体前体是沸点范围在约-100℃-70℃的物质。活化温度对每种气体前体是特定的，优选本发明气体前体的活化温度约为37℃或约为人体温度。在优选方案中，活化液体气体前体在37℃成为气体。然而，气体前体可以液相或气相用于本发明。
制备本发明CT对比剂的方法是在低于气体前体沸点的温度下将液体掺入微球体中进行的。此外，其方法是在气体前体沸点时呈气态被并入微球体中进行的。对于具有低沸点的气体前体，液体前体用微强化流态剂装置激冷到低温乳化，为使用液态前体，也可以用液体介质溶剂降低沸点。然而，方法也可以在此方法中升高温度进行此方法起始于气体前体为液态而终止于气体前体为气态。
使用以前，储存或制造期间，可以选择气体前体进入人体或动物体，以便在体内靶组织或流体中就地形成气体。产生活化温度的气体前体填充微球体的方法可以在低于气体前体的沸点温度下进行。在这个方案中，截留微球体中的气体前体，以使相转移不在制造中发生。代之以在液相气体前体中，制造气体前体填充的微球体。相转移活化可以随着允许超过前体沸点温度的任何时间发生。而且，知道液态气体前体的液滴中液体的量，可以测定获得气态的微球体的大小。
另一种方法，气体前体可用于产生用的预先形成的稳定的气体填充的微球体。在这个方案中，在低于气体前体各自的液-气相转移温度下，将气体前体加入存有悬浮和/或稳定介质的容器中。然后，随着温度的增加，气体前体与液体溶液之间形成乳化，气体前体进行从液态到气态的转移。作为这种加热和气体形成的结果，气体置换了上述液体悬浮液上面空间的空气，以便形成截留气体前体气体、环境气体(例如，空气)的气体填充的球体，或形成共同截留气态气体前体和周围气体的气体填充的球体。这个相转移可被用于CT成像对比介质的最佳混合和稳定作用上。例如，在生物合适的稳定化合物中可截留气体前体全氟丁烷，随着温度的增加，超过4℃，即全氟丁烷的沸点时全氟丁烷气被截留于微球体中。又如，气体前体氟丁烷可被悬浮于含有例如乳化剂和/或增稠剂，如甘油或丙二醇的含水悬浮液中，并在工业涡流器中涡旋。涡旋在低于足以使气体前体是液体的温度下开始，并随着样品温度升到超过液态到气态的相转移温度，继续涡旋。在此操作中，微乳化期间，前体转化为气态。在合适物质存在下，包括，例如稳定物质、增稠剂和/或分散剂，得到稳定的气体填充的微球体。
因此，气体前体可选择在体内形成气体填充的微球体，或在制造过程期间、储藏时、用前的一段时间，可设计就地得到气体填充的微球体。
本发明进一步方案中，通过由液态到含水乳化物预先形成气体前体，转移到气态一旦实现，用理想气体定律可以估计最大微球体的大小。为了从气体前体得到气体填充的微球体的目的，假设气相瞬间和基本形成，由于气体扩散到事实上通常含水的液体中，新形成的微球体中没有气体被消耗。因此，在乳化中，从已知液体体积，能够预计填充微球体的气体大小的上限。
按照本发明，达到气体前体特定沸点温度时，含有确定大小液滴的稳定物质和气体前体的混合物可以形成，微滴膨胀成确定大小的气体填充的微球体。确定大小代表实际大小的上限，因为，如气体扩散到溶液里、气体逸到大气损失的原因，和增加压力的影响是理想气体定律不能计算的原因。
理想气体定律和从液体到气体转移，气泡体积增加的计算式如下PV＝nRT其中P是大气压力(atm)；V是升体积(L)；n是气体摩数；T是开尔文温度(K)；和R是理想气体常数(22.4L-atm/K-mole)。
用液体混合物中的液体的体积、密度、和温度的知识，可以计算出液体前体的量(如摩尔数)，还有液体前体的体积，当液体前体转化成气体时，将膨胀成已知体积的微球体。计算的体积将反映气体填充的微球体大小的上限，假设瞬间膨胀成气体填充的微球体。可忽略膨胀时气体的扩散。
对于其中前体微滴是球体的混合物中液态前体的稳定作用，其微滴体积可以通过下式计算体积(球体)＝4/3πr3这里f是球体半径。
于是，一旦预测体积，和知道需要温度下的液体密度，可以测定微滴中液体(气体前体)的量。在进一步叙述性术语中，可以用下式V气体＝4/3π(r气体)3用理想气体定律，PV＝nRT代换得到
V气体＝nRT/P气体或(A) n＝4/3[πr气体3]P/RT量n＝4/3[πr气体3P/RT]·MWn转化回液体体积(B) V液体＝[4/3[πr气体3]P/RT]·MWn/D]这里D是前体密度。计算液体微滴的直径(C) 直径/2＝[3/4π[4/3·[πr气体3]P/RT]MWn/D]1/3推算得直径＝2[[r气体3]P/RT[MWn/D]]1/3根据本发明和根据稳定化合物/前体液体微滴的体积、特别是半径的知识，作为进一步制备用于CT造影对比剂需要大小的微球体的方法，能够使用合适大小的过滤器，以便以合适的球体直径尺寸制造气体前体微滴。
代表性的气体前体可被用于形成一定大小的微球体，例如，10μm直径。在这个例子中，微球体在人类血流中形成，因此，典型的温度应是37℃，或310K。在1个大气压下，用(A)中的公式预算，需要气体前体7.54×10-17摩尔量以填充10μm直径的微球体。
用上述计算量的气体前体和在20℃下，具有76.11分子量、32.5℃沸点和0.7789g/mL的1-氟丁烷，进一步计算10μm直径的微球体需要5.74×10-15克此前体。进一步推断，和用密度的知识，公式(B)进一步推算，10μm上限的微球体需要8.47×10-16mL液体前体。
最后，用公式(C)，形成例如，含有半径0.0272μm或相应直径为0.0544μm微滴乳剂的混合物，以使气体前体填充的微球体具有10μm的上限。
通过使用合适大小的过滤器很容易得到特定大小的乳剂。此外，由此可见，通过过滤器需要的大小形成特定大小的气体前体微滴，过滤器的大小也有能力除去任何可能的细菌污染物，也可被用作消毒过滤。
在本发明方法中，制备作为CT造影对比剂的气体填充的微球体的方案可被用于由温度活化的所有气体前体。事实上，降低溶剂系统的凝固点容许使用低于0℃温度下进行液体-气体的相转移的气体前体。应选择溶剂系统对于气体前体的悬浮液提供介质。例如可混合于缓冲盐水中的20％丙二醇显示凝固点降低且低于单独水的凝固点。增加丙二醇的量或加物质如氯化钠，凝固点能进一步降低。
也可以通过物理方法确定选择的合适溶剂系统。当物质，固体或液体，这里指作为溶质溶于溶剂如水的碱性缓冲液中时，凝固点通过依靠溶液组成的量来降低根据Wall所定义的，由下式能够表达溶剂降低的凝固点Inxa＝In(1-xb)＝ΔHfus/R(1/T。-1/T)这里xa是溶剂摩尔分数；xb是溶质摩尔分数；ΔHfus是溶剂熔融热；和T0是溶剂正常凝固点。
溶剂正常凝固点可通过解下列方程得到。如果xb较xa小，则上述等式可变为xb＝ΔHfus/R[T-T0T0T]≈ΔHfusΔT/RT02上述等式假设温度ΔT的变化比T2小。这个等式可以通过溶质重量克摩尔浓度表示来进一步简化，m(每千克溶剂中溶质的摩尔数)，因此，等式可变为Xb＝m/[m+1000/ma]≈ mMa/1000这里，Ma溶剂摩尔质量，从而，取代分数xbΔT＝[MaRT02/1000ΔHfus]m或ΔT＝Kfm，这里Kf＝MaRT02/1000ΔHfusKf指摩尔凝固点，在一个大气压力下，每摩尔浓度等于1.86度。上式可用于准确确定用于本发明气体前体填充的微球体滴液的对水摩尔。
上述等式能用于估计凝固点降低和测定需要降低溶剂结冰温度的适宜值的液体或固体溶质的合适浓度。
制备温度活化的气体前体填充的微球体方法包括a)涡旋和/或振荡气体前体和所需附加物质的含水混合物，包括，例如稳定物质、增稠剂、和/或分散剂。这种方法任意变化包括在涡旋或振荡前进行压热灭菌；加热气体前体含水混合物；将含有混合物/悬浮液的容器排气；振荡或使气体前体微球体自发形成，并冷却气体前体填充微球体的悬浮液；和通过约0.22μm过滤器挤压气体前体含水悬浮液。也可用0.22μm过滤器在体内给用微球体期间进行过滤；
(b)微乳化方法，是在患者给用以前，通过搅拌和加热乳化气体前体含水混合物形成微球体；(c)搅拌或不搅拌，加热混合物中的气体前体，以使密度较低的气体前体填充的微球体通过膨胀漂浮在溶液上面，并在取代容器中其它微球体和逸出容器释放到空气中；和(d)在任何上述方法中，利用密封容器存贮气体前体含水悬浮液，并在低于气体前体相转移温度下维持悬浮液，继之热压处理使温度升高到相转移温度以上，任意进行振荡，或使气体前体微球体自发形成，藉此密闭容器中膨胀的气体前体增加了容器中的压力，以及冷却气体填充微球体的悬浮液，其后也可进行振荡。
在振荡注入方法以前，冷冻干燥对于从稳定物质中除去水和有机物质是有用的。干燥注入方法可用于从微球体中除去水。加温后，预通过截留干燥的微球体中(如干燥前)的气体前体，气体前体可以膨胀填充微球体。气体前体也能被用于填充干燥的经真空后的微球体。由于干燥的微球体在低于它们从凝胶态到液晶的温度下保存，干燥仓可以用气态的气体前体缓慢填充，例如，在4℃(全氟丁烷的沸点)以上的温度，全氟丁烷可用于填充干燥的微球体。
优选地，制备温度活化的气体前体填充微球体的方法包括振荡含水溶液，该溶液含有在气体前体存在下，低于液态到气态的气体前体相变温度下的稳定物质。如果水溶液中也含类脂，优选该方法在低于类脂凝胶态到液晶状态的相转移温度下进行。加热混合物超过气体前体液态到气态的相变温度，使前体挥发并膨胀。然后终止加热，使混合物的温度降到气体前体液态到气态的相变温度以下。在加热步骤期间可以振荡混合物，或在使混合物冷却之后进行。
制备气体前体填充的微球体的其它方法包括，振荡如稳定物质和气体前体的含水溶液，并分离所产生的用于计算机化X射线断层照相术成像的气体前体填充的微球体。
通常，现有技术的充水脂质体是在用于制备它们的类脂相转移以上温度下形成的，是由于，它们更具柔韧性，从而以液晶状态用于生物系统，实例见Szoka和Papahadjopoulos，Proc.Natl.Acad.Sci.1978，75，4194-4198。作为对比，根据在此描述的优选方案得到的微球体是气体前体填充的，具有较大的柔韧性，因为气体前体形成气体以后比含水溶液更具压缩性和顺从性。
本发明为在温度活化的气体前体存在下设计了振荡含有稳定物质的水溶液的方法。这里所用的振荡被定义为搅拌水溶液以使气体前体从周围环境中导入水溶液中的运动。搅拌水溶液并导入气体前体的任何类型运动都可以用于振荡。优选振荡力度在短期内，如30分钟，优选20分钟，更优选10分钟内足以形成泡沫。振荡可以包括微乳化、微液化、旋转(如通过涡旋)、左右或上下运动。如果加入液态气体前体，除上述四种方法以外，可以用声处理方法。此外，可以结合不同类型的运动。通过振荡存储含水类脂溶液的容器产生振荡，或通过不振荡容器本身而振荡容器中的水溶液产生振荡。此外，可以通过人工或机械产生振荡。可用的机械振荡器包括，例如振荡器台，如VWR Scientific(Cerritos，CA)振荡器台、微液化器、Wig-L-Bug(Crescent Dental Manufacturing，Inc.，Lyons，IL)已发现得到特别好的效果，机械油漆(paint)混合器，还有其它已知和合适的装置。产生振荡的另一种方法包括在高速或压力下释放气体前体。可以理解，优选随着水溶液体积的增大，总力量将相应增加。剧烈振荡限定为至少每分60次振荡，并被优选，更优选每分涡旋1000转，更优选每分涡旋1800转。
依靠振荡形成气体前体填充的微球体可以通过水溶液上面泡沫的存在来检测。与对于泡沫形成的水溶液体积的减少结合考虑，优选泡沫的最终体积至少约为水溶液最初体积的二倍，较优选泡沫的最终体积至少约为水溶液最初体积的三倍，更优选泡沫的最终体积至少约为水溶液最初体积的四倍，进一步优选所有水溶液都转化成泡沫。
需要持续振荡的时间可以通过检测泡沫的形成来鉴定。例如50mL离心管中15-20分钟可以旋转10mL溶液，或直到气体前体填充的微球体的粘度变得足够厚，以致于随着涡旋它不在粘附于边壁上。这时，泡沫可以使含有气体前体填充的微球体溶液升到30-35mL水平。
根据本发明设计的方法，存在的气体如空气也可以由局部周围的大气压提供，局部周围的大气压包括密封容器中的大气压，或未密封容器，外部环境的大气压。或者，例如，气体可以注射到或用其它方法加到具有含水类脂溶液的容器中或为了提供与空气不同的气体，加到含水类脂溶液本身中去。比空气轻的气体通常加到密封容器中，而比空气重的气体可以加到密封或未密封的容器中。因此，本发明包括截留与气体前体一道的空气和/或其它气体。
因此，以上描述的稳定的微球体前体能以同样方式用作为其它用于本发明的稳定微球体，一旦通过活化应用到宿主组织，如温度或pH这样的因素可以用于使气体发生。优选，气体前体在接近所述的宿主正常体温下进行从液态到气态的相转移，例如通过宿主的体内温度被活化，以便进行到气态的转移。这是能发生的，例如宿主组织是有约37℃正常体温人体组织，在接近37℃，气体前体进行从液态到气态的相转移。
所有上述涉及制备稳定悬浮液的方案，包括气体和/或气体前体填充微球体的悬浮液，如果在安装步骤以前或悬浮液中温度敏感的气体前体温度介导转以前，可进行热压消毒或过滤消毒的步骤。另一方面，一种或多种抗菌剂和/或防腐剂可包括在对比介质的形成中，如苯甲酸钠、季铵盐、叠氮钠、对羟苯甲酸丙酯、山梨酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香迷、丁基化羟基甲苯、氯丁醇、脱氢乙酸、乙二胺、单硫代甘油、苯甲酸钾、焦二亚硫酸钾、山梨酸钾、甲亚硫酸氢钾、二氧化硫和有机汞盐。通过其它常规方法如通过照射也可以进行消毒，稳定微球体在侵入环境中如血管内或腹膜内用于成像时，消毒是必要的。根据本申请，消毒的合适方法对于技术人员是显而易见的。
本发明对比介质通常作为含水悬浮液存储，但也可用干燥的微球体以前，对比介质可作为干粉存储时容易重新构成。使用方法如上面所讨论，包括气体和/或气体前体填充微球体的本发明稳定悬浮液用作为计算机化X射线断层照相术(CT)成像的对比剂，包括CT血管造影照片(CTA)成像。可以想象本发明稳定悬浮液也可用作为与其它诊断方法有关的对比剂，包括，例如核磁共振(MR)成像和核磁共振血管造影照片(MRA)。
根据本发明，提供了对一个或更多病灶成像的方法。本发明也提供了包括诊断患者存在或不存在疾病组织的成像方法。本发明成像方法可以通过对患者给用稳定悬浮液形式的对比介质进行。用计算机化X射线断层照相术成像、或其它成像方法对患者扫描，得到患者内部区域和/或内部区域任何患病组织的可见成像。者区域是指患者整体或患者特别部位或部分。对比介质特别用于提供胃肠道的成像，也可以有更广泛的应用，如脉管系统的成像，或用对其它技术人员显而易见的方法。这里，胃肠道区域或胃肠道包括由食管、胃、小和大肠、和直肠限定的患者区域。这里，脉管系统指身体或身体器官或部位的血管。患者可以是任何类型的哺乳动物，最优选人。
作为本领域技术人员会清楚，本发明稳定悬浮液的给用可以各种剂量形式、各种方式进行，如血管内、口服、直肠内、阴道内、膀胱内、腹膜内、耳蜗内、泌尿道内等等，当扫描区域是胃肠道区域时，本发明悬浮液优选口服或直肠给用。给用的剂量和给用的特定方式可以根据年龄、体重和特定哺乳动物以及扫描的区域和所用的本发明特定对比介质变化。典型地，最初剂量较低并随所需对比的增加而升高。各种混合的稳定悬浮液可用于改变所需的性能，如粘度、渗透性或可口性。在本发明进行成像的方法中，可以单独使用对比介质、或结合诊断、治疗或其它试剂使用。其它试剂包括赋形剂，如风味剂或着色剂。所用的CT成像技术是常规的，并被描述如Computed Body Tomography，Lee，J.K.T.，Sagel，S.S.，和Stanley，R.J.eds.，1983，Ravens Press，New York，N.Y.，尤其，特别是头两章题目为“Physical Principles and Instrumrntation”，Ter-Pogossian，M.M.，“Techniques”，Aronberg，D.J.，这里结合公开内容整体参考。
本发明悬浮液给用途径和使用范围不局限于有血液的地方包括脉管系统。如果口服摄入本发明悬浮液可以对胃肠(GI)道进行CT成像。或者，直肠给人这些稳定的悬浮液可以产生优异的低GI道成像，包括直肠、降结肠、横结肠、和升结肠，还有充气管。本发明悬浮液，特别是气体和气体前体填充的微球体尤其适合GI道成像。如含有气体填充或气体前体微球体的悬浮液可以口服或直肠给入患者，已发现通常气体前体填充微球体的悬浮液比气体填充微球体的悬浮液口味更好。因此，要是口服给药，优选气体前体填充微球体的悬浮液。要是悬浮液中微球体用在接近体温时转相的气体前体填充，则需要气体前体填充微球体，并通常在患者的GI道中转化成气体填充的微球体。
除用本发明悬浮液可以成像GI道区域外，包括直肠、降结肠、横结肠、和升结肠，还有充气管，还设计可以用这里描述的方法由直肠给药的方式给回肠和空肠成像。此外，直接腹膜内给用可以实现显像腹膜。也设计直接将稳定的悬浮液给入耳蜗，可显像耳蜗及咽鼓管和，如存在穿孔，显像内耳。也设计鼻内给入稳定的悬浮液以帮助鼻中隔和鼻窦进行CT显像。
本发明悬浮液另一个给入和增强显像的组织区域途径包括，例如(i)对于显像鼻道和鼻窦，鼻内给入，包括鼻区域和窦和窦状隙；(ii)对于显像呼吸道剩余部分，鼻内给入和口服，包括气管、支气管、细支气管、和肺；(iii)对于显像听道和；咽鼓管，鼓膜和外内耳和耳蜗，耳蜗内给入；(iv)对于显像与视觉有关的区域，眼内给入；(v)对于显像腹膜，腹膜内给入；和(vi)对于显像泌尿道的所有区域，例如尿道、膀胱、肾、和肾脉管系统和以上部分，膀胱内给入，如进行膀胱造影术或进一步确定存在输尿管反流。
下列实施例进一步描述了本发明。实施例1-168是实际实施例。实施例169-170是预防剂实施例。这些实施例只用于说明目的，而不限制权利要求。
下列实施例(实施例1-10)描述各种本发明范围内稳定悬浮液的别备方法。这些实施例(实施例1-6)也描述本发明范围内和包括用CT显像哺乳动物内部区域的方法，实施例7描述本发明范围内和包括用MR显像哺乳动物内部区域的方法。实施例1将0.5Wt％甲基纤维素(Spectrum，Houston TX)，Poloxamer F68(500ppm)(Spectrum，Houston TX)，吐温40(200ppm)(Spectrum，Houston TX)，二甲硅油(500ppm)(Dow Coming，Midland，MI)和0.1％山梨酸钾(Spectrum，Houston TX)加入纯水(730mL)中。用通常装配和方孔高剪切筛的Silverson L4RT(Silverson MachineLTD，Waterside，England)混合器以5000rpm混合混合物。在冰浴下将产生的混合物冷却到7℃。将全氟戊烷(5mL)(PCR Chemicals Inc.，Gainsville，FL)加到冷却的混合物中。用同样的混合器和方孔高剪切筛以调至高档的速度(10300rpm)搅拌混合物一分钟。通过型号GV-2200(Gilmont Instr.，Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定产生的全氟戊烷稳定悬浮液粘度为30.8cps。用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为4.58μm。
给已保持禁食(NPO，none per oral)24小时的狗(17.25kg)给用约500mL稳定的悬浮液。这个量是相应于30mL/kg的剂量。悬浮液在一碟中两个小时内给用。CT显像前用0.25cc/kg硫喷妥钠将狗麻醉，用异氟烷使其处于麻醉状态。用Toshiba900S CT扫描仪进行(Toshiba Medical Systems，Nasu，Japan)CT成像，在X-射线光片上记录成像，得到肠部高级成像。用整个肠内充满均匀黑色对比的流明。很易被分辨出整个内部肠粘膜表面。
用Picker 2000 CT扫描仪(Picker Medical Systems，Cleveland，OH)以0.5mL/kgiohexol(Sanofi Winthrop，N.Y.，NY)的剂量进行CT血管造影照片(CTA)得到腹部脉管系统的阳性造影。用1.25间隔的5mm厚切片、和改进螺旋胰腺装置130kV和100ma的动力装置获得CTA得到腹部脉管系统高级成像。没有黑色内脏产生的血管显像的干扰。通过比较，在经过口服给入硫酸钡中iohexol(I.V.)以后进行的CTA其内脏重叠密度和腹部脉管系统模糊明显降低。实施例2将Poloxamer F68(0.25g)、二甲硅烷(0.25g)、吐温40(0.1g)、苯甲酸钠(0.5g)、果糖(10g)、甲基纤维素(5g)、和纯水(484g)混合，用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以8000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀。在冰浴下将均匀的混合物冷却到4℃，加入全氟戊烷(3mL)。用与上述同样的混合器以较高速度(12000rpm)高剪切混合物一分钟。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为103cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing SystemsInc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为4.07μm。
给已保持NPO 24小时的Sprague-Dawley鼠(250g)强饲混合物(4mL)，用100毫安，140千伏和4mm薄片厚度的Toshiba 900S CT机器成像1-1.5小时，观察到GI道均匀的阴性造影。实施例3将Poloxamer F68(0.125g)、二甲硅烷(0.125g)、吐温40(0.05g)、苯甲酸钠(0.25g)、果糖(5g)、VeegumTM(5g)(Spectrum，Houston，TX)、和纯水(239g)混合，用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以8000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀，在冰浴下将均匀的混合物冷却到4℃，加入全氟戊烷(1.6mL)，用与上述同样的混合器以较高速度(12000rpm)高剪切混合物一分钟。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为5.6cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为2.67μm。
给已保持NPO 24小时的Sprague-Dawley鼠(250g)强饲混合物(4mL)，用100毫安，140千伏和4mm薄片厚度的Toshiba 900S CT机器成像1-1.5小时，观察到GI道均匀的阴性造影。实施例4Poloxamer F68(0.125g)、二甲硅烷(0.125g)、吐温40(0.05g)、苯甲酸钠(0.25g)、果糖(5g)、苍耳烷树胶(2.5g)(Kelco，San Diego，CA)、和纯水(242g)混合。用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以8000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀。在冰浴下将均匀的混合物冷却到4℃，加入全氟戊烷(1.6mL)，用与上述同样的混合器以较高速度(12000rpm)高剪切混合物一分钟。对于型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定来说，产生的稳定悬浮液的粘度太厚，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，SanTa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为4.06μm。
给已保持NPO 24小时的Sprague-Dawley鼠(250g)强饲混合物(4mL)，用100毫安，140千伏和4mm薄片厚度的Toshiba 900S CT机器(Toshiba MedicalSystems，Nasu，Japan)成像1-1.5小时，在接近空气的密度中，观察到GI道极其均匀的阴性造影。实施例5将Poloxamer F68(0.3125g)、二甲硅烷(0.3125g)、吐温40(0.125g)、苯甲酸钠(0.625g)、果糖(18g)、和纯水(500g)混合，用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以8000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀，用1N HCl调节均匀混合物的pH至pH4(Fisher ChemicalSupply，Fair Lawn，NJ)，并在冰浴下将均匀的混合物冷却到4℃。将冷却的混合物置于装有冷却室的M-110T微流化器中(Mircofluidics Corp.，Newton，MA)，在15000psi.运作期间，经由水/甲醇溶液循环冷却流化的混合物至10℃。循环冷却的混合物约两次，然后，将全氟戊烷(3.9mL)加入循环的混合物中，使M-110T微流化器循环500次。将甲基纤维素(12.5g)加到纯水(487g)中，用通常装置和方孔高剪切筛的SilversonL4RT(Silverson Machine LTD，Waterside，England)混合器以5000rpm的速度混合，制备出2.5％甲基纤维素溶液。将上述制备的冷却混合物(200mL)加到2.5％甲基纤维素溶液(50mL)并搅拌混合。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmon仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为15.5cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为1.76μm。
给已保持NPO 24小时的两个Sprague-Dawley鼠(每个250g)强饲搅拌的悬浮液(4mL)，用100毫安，140千伏和4mm薄片厚度的Toshiba 900S CT机器(ToshibaMedical Systems，Nasu，Japan)成像1-1.5小时，在接近空气的密度中，观察到GI道极其均匀的阴性造影。实施例6将Poloxamer F68(0.195g)、二甲硅烷(0.195g)和山梨酸钾(0.432g)混合，用水调至300g，用Braun Multipractic Hand搅拌器(Braun Inc，Lynnfield，MA)混合产生的混合物直至均匀用1N HCl调节均匀混合物的pH至pH6(Fisher Chemical Supply，FairLawn，NJ)，并在冰浴下将混合物冷却到4℃。将一部分冷却的均匀混合物(250mL)置于装有冷却室的M-110T微流化器中(Mircofluidics Corp.，Newton，MA)，在15000psi.运作期间，经由水/甲醇溶液循环冷却流化的混合物至10℃，使均匀混合物循环约两次，然后，将全氟戊烷(1.9mL)加入循环的混合物中，然后，使M-110T微流化器循环250次。将一部分混合物(187.5mL)加到1％苍耳烷树胶(62.5mL)中，通过搅拌产生的混合物得到稳定悬浮液。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmon仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为16.1cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle SizingSystems Inc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为6.50μm。
给已保持NPO 24小时的Sprague-Dawley鼠(250g)强饲悬浮液(4mL)，用100毫安，140千伏和4mm薄片厚度的Toshiba 900S CT机器(Toshiba MedicalSystems，Nasu，Japan)成像1.5小时，在接近空气的密度中，观察到GI道极其均匀的阴性造影。实施例7将水(7.3mL)、1％苍耳烷树胶溶液(1mL)、大豆油(1mL)、1％硫酸月桂酯钠水溶液(300μL)(Duponol C，Witco Corp.，N.Y.，NY)、1％吐温40(200μL)、1％山梨酸钾水溶液(100μL)、二甲硅油(5μL)和全氟戊烷(100μL)导入15mL聚丙烯螺旋盖帽管中(VWR，West Chester，PA)，用Vortex-Genie 2(Scientific Industries Inc.，Franklin Lakes，NJ)全速搅拌混合物至一分钟，得到稳定的悬浮液。
给已保持NPO 24小时的Sprague-Dawley鼠(250g)强饲悬浮液(4mL)，一小时以后，用1.3cc/kg Ketamine HCL(Ketaset，Aveco Co.Inc.，Fort Dodge，IA)和acepromazine maleate(PromAce，Aveco Co.Inc.，Fort Dodge，IA)10∶1的混合物使小鼠麻醉，用多项记录在GE Signa 1.5Tesla MR扫描仪(GE Signa，Milwaukee，WI)用终极线圈对小鼠显像，所用的四个记录是MEMP、VEMP、GRASS和快速GRASS。设置MEMP成像如下250TR、14ms TE(自动)、11cm FOV、4mm薄片厚度、1mm间隙、4NEX和256×192膜版。设置VEMP成像如下2500msTR、19/80ms TE、11cm FOV、4mm薄片厚度、1mm间隙、1NEX和256×192膜版。设置GRASS成像如下13.1msTR、4.2ms TE、20度翻转角、15cm FOV、4mm薄片厚度、1mm间隙、2NEX和256×192膜版。设置快速GRASS成像如下100msTR、6ms TE、30度翻转角、11cm FOV、4mm薄片厚度、1mm间隙、1NEX和256×192膜版。MR成像显示整个GI道均匀低信号密度(信号孔率)。在MEMP、VEMP成像和所有免于敏感性人工制品的成像中粘膜清晰度是优异的。用MR成像的试验证实本发明组合物对于MR具有作为有效的阴性(黑色)对比剂的功能。实施例8将Poloxamer F68(0.25g)、二甲硅烷(0.25g)、吐温40(0.05g)、苯甲酸钠(0.5g)、果糖(10g)、甲基纤维素(2.5g)、和纯水(484g)混合，用装有1英寸管式装置和设置为8000rpm的方孔高剪切筛混合产生的混合物直至均匀，在冰浴下将一部分均匀的混合物(250mL)冷却到4℃，加入全氟戊烷(0.16mL)，用与上述同样的混合器和装置以较高速度(12900rpm)混合产生的混合物一分钟。用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，Santa Barbara，CA)对第一部分剪切的悬浮液进行颗粒筛分，对第二部分剪切的悬浮液进行同样的筛分，30天后，已经成为非均匀的剪切悬浮液通过搅拌和悬浮重新悬浮。比较各种大小分散的颗粒证明没有变化。实施例9将Poloxamer F68(0.25g)、二甲硅烷(0.25g)、吐温40(0.05g)、苯甲酸钠(0.5g)、果糖(10g)、Viscarin GP-209 carrageenan(1.25g)(FMCCorp.，Philadelphia，PA)、和纯水(487g)混合，用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以5000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀(10分钟)，用1N HCl调节均匀混合物的pH至pH4。在冰浴下将一部分混合物(250mL)冷却到4℃，加入全氟戊烷(3mL)，用与上述同样的混合器以较高速度(12900rpm)高剪切混合物一分钟。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为15.1cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing Systems Inc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为4.16μm。实施例10将Poloxamer F68(0.25g)、二甲硅烷(0.25g)、吐温40(0.05g)、苯甲酸钠(0.5g)、果糖(10g)、Kelgum(1.25g)(Kelco，San Diego，CA)、和纯水(487g)混合，用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以5000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀(10分钟)，用1N HCl调节均匀混合物的pH至pH4。在冰浴下将一部分混合物(250mL)冷却到4℃，加入全氟戊烷(0.16mL)，用与上述同样的混合器以较高速度(12900rpm)高剪切混合物一分钟。通过型号GV-2200(Gilmont Barrington，IL)的Gilmont仪器号No.2降球粘度计测定产生的稳定悬浮液粘度为8.6cps，用AccuSizer 770光学颗粒分粒机(Particle Sizing SystemsInc.，Santa Barbara，CA)测定颗粒大小平均数为3.62μm。
实施例11-167列于下表中。
表3
*1％浓度表3
表3
表3
表3
表3
表3
表3
表3
表3
**用1％甲硅油涂布表3
表3
表3
***200mM浓度表3
****1M浓度表3
关键词PFP＝全氟戊烷PFA＝全氟己烷PFO＝全氟辛烷SLS＝月桂基硫酸钠Pol＝Pol oxamerPS-吐温CTAB＝溴化十六烷基三甲基铵Simeth＝二甲硅油实施例168本实施例将本申请稳定悬浮液与现有技术对比剂的成像研究进行了对比。
将甲基纤维素(2.5g)、Poloxamer F68(0.25g)、二甲硅烷(0.25g)、吐温40(0.1g)、果糖(10g)、苯甲酸钠(0.5g)(Spectrum Houston TX)、和纯水(486g)混合。用装有1”管式装置和方孔高剪切筛Silverson L4RT混合器以8000rpm的速度混合产生的混合物直至均匀。在冰浴下将均匀的混合物冷却到4℃，加入全氟戊烷(3mL)，用与上述同样的混合器以较高速度(12000rpm)使产生的混合物均匀化一分钟。
将四只250g Sprague-Dawley鼠(鼠(A)(B)(C)(D))给用上述制备的稳定悬浮液、现有技术对比剂、和上述悬浮液与现有技术对比剂的混合物。鼠(A)已保持NPO 24小时，强饲上述制备的稳定悬浮液。鼠(B)强饲现有技术硫酸钡对比剂Scan CTM(4mL)(Smith and Nephew Diagnostics，Memphis，TN)。鼠(C)强饲加进重量百分比为0.2％硫酸钡的上述制备稳定悬浮液混合物(4mL)。鼠(D)强饲Scan CTM(2mL)，一小时后继之第二次强饲上述制备的稳定悬浮液。所有鼠在给用后，都在设置为TI3，KVp125，AS 0.28，薄片厚度4mm和Gantly tilt 0的SomotomDRH(Iselin，NJ)上成像1.25和2.25小时。得到的鼠(A)整个GI道的成像是均匀和黑色的。得到的鼠.(B)的成像显示硫酸钡造影的分离。得到的鼠(C)的成像显示分离的与阴性造影区域混合的硫酸钡(阳性造影)造影(例如两相造影)。得到的鼠(D)成像与鼠(A)1.25小时的成像一致；然而，分离的硫酸钡在降肠中为2.25小时。实施例169本实施例描述对本发明范围内稳定悬浮液进行的初步毒性研究，研究包括对比本发明悬浮液的毒性与对照物(无气体或气体前体制备的混合物)的毒性。
稳定悬浮液的制备将水(7.3mL)、1％苍耳烷树胶溶液(1mL)、大豆油(1mL)、1％月桂基硫酸钠水溶液(300μL)(Duponol C，Witco Corp.，N.Y.，NY)、1％吐温40水溶液(200μL)、1％山梨酸钾水溶液(100μL)、二甲硅油(5μL)和全氟戊烷(100μl)导入15mL聚丙烯螺旋盖帽管中(VWR，West Chester，PA)，用Vortex-Genie2(Scientific Industries Inc.，Franklin Lakes，NJ)全速混合混合物至一分钟，得到均匀的混合物。
对照混合物的制备除无全氟戊烷外，如上制备混合物。所述混合物这里作为“对照混合物”。
这里所述的“对照混合物”是指上述制备的除没有全氟戊烷外的混合物。
毒性研究12只Sprague-Dawley鼠(250g-300g)用于毒性研究，并被分为三组(组(A)(B)和(C))，每4只一组。对组(A)鼠给用对照混合物(4mL)一天一次，7天。给组(B)鼠用上述制备的稳定悬浮液(4mL)一天一次，7天。对组(C)鼠给用上述制备的稳定悬浮液(3mL)一天二次。4天以后，由于强饲管esophagi的过度刺激，停止对组(C)鼠进行第二次日剂量给药，然后，对组(C)鼠给用药(4mL)一天一次维持3天。观察到的组(A)(B)和(C)鼠的食物消耗和重量没有本质的差别。7天处理期以后，处死鼠，收集血液和组织样品，血液的化学分析显示组(A)(B)和(C))鼠之间无明显差别，此外，多器官组织样品显示组(A)(B)和(C))鼠之间无明显差别或毒性的表现。观察到组C鼠收集管中的潜在的肾管上皮的降解，可以相信这是由于组C鼠增长的年龄所致。
下列实施例，(实施例170-177)是假设实施例，描述本发明稳定悬浮液的各种临床用途。实施例171这个实施例描述本发明稳定悬浮液在核磁共振血管造影照片(MRA)中的用途。
对于腹部疾病的患者，口服给入实施例1制备的稳定悬浮液10mL/kg，进行核磁共振(MR)成像，得到轴T1和T2重量的成像。作为信号空白，肠将显示均匀的低信号密度，也用2DTime脉冲程，轴探测进行腹部脉管系统的MR血管造影照片(MRA)。MRA成像是高质量的，没有由本发明稳定悬浮液产生的可察觉的后生现象。
进行两个MRA比较研究以估计本发明稳定悬浮液的效率，第一个比较研究中，给患者口服阳性GIMR对比剂，如稀(4微摩尔)五乙酸钆二乙烯三胺(Gd-DTPA)，通过腹腔高信号密度的叠影降解MRA成像。第二个比较研究中，给患者用作为GI对比介质的氧化铁。通过敏感性后生现象降解MRA成像。这些研究将显示本发明稳定悬浮液提供优异的GI造影，在腹部或盆腔，作为MRA的附件也是有效的。实施例172这个实施例描述本发明稳定悬浮液在改进现有技术阳性对比剂的CT成像特性的用途。
将60％HypaqueTM碘化对比介质(300mL)与本发明范围中的全氟戊烷稳定悬浮液(600mL)混合，悬浮液优选填充全氟戊烷的微球体，在产生的“混合物”对比介质中HypaqueTM浓度按体积计为20％，优选填充全氟戊烷的微球体浓度按体积计为1％。给患者口服15mL/kg的对比介质，食入后，全氟戊烷将转化为气体对比介质全部体积将膨胀，这种膨胀将导致用均匀高密度有控制和均一的GI道膨胀，与单独的HypaqueTM对比，用结合的对比介质将会显示GI道粘膜提高的清晰度，这个提高的清晰度是由于本发明稳定悬浮液产生的膨胀所至。实施例173这个实施例描述本发明稳定悬浮液在改进现有技术对比剂的CT和X-射线成像特性的用途。
给患者用按重量计0.4％的设计为依附于肠粘膜表面的硫酸钡组合物(400mL)。硫酸钡组合物的制备将包括用角菜胶粉在胶体研磨机上研磨硫酸钡，设计用角菜胶包被产生微孔大小的颗粒硫酸钡具有对肠粘膜表面的亲和力。给用药后4小时，对患者给用本发明稳定悬浮液(15mL/kg)。硫酸钡和本发明稳定悬浮液的给用对计算机化X射线断层照相术或荧光镜提供肠双重造影检测。以强光照射肠粘膜表面可见高密度细密层并且腹腔是黑色的。实施例174这个实施例描述本发明稳定悬浮液在改进现有技术对比剂的MR成像特性的用途。
给患者用在聚半乳糖醛酸混合物中含氯化镁(MgCl2)的LumenHanceTM(400mL)(Bracco Diagnostics，Princeton，NJ)，给药后4小时，给患者用本发明稳定悬浮液(15mL/kg)。用T1载重(weighted)自旋回波技术，例如TR是300毫秒、TE是11毫秒，在工业MR成像仪上进行MR成像，得到的成像将显示双重造影，用双重造影MR技术以强光照射粘膜表面，由于给用本发明稳定悬浮液，腹腔将呈均匀的黑色，并将表现为信号空白，粘膜表面将表现为薄、亮轮缘。实施例175
这个实施例描述本发明稳定悬浮液对于改进通过I.V.给入现有技术对比剂的MR成像特性的用途。
给肠息肉患者用本发明稳定悬浮液 (20mL/kg)多于2小时，用MR，500微摩尔Gd-DTPA溶液扫描前10分钟(Schering A.G.，Berlin，Germany)，通过I.V.给入0.1mL/kg的剂量，用T1载重(weighted)MR成像将得到如实施例170所述的参数，除1.5泰斯拉磁力成像也将用脂肪饱和之外。得到的MR成像将在黑色背景中通过高信号，造影增加结构显示息肉，从而，得到提高的息肉conspicuity，得到的造影模式将用于检测各种生长于GI道中的肿瘤。随着产生的屏蔽，这对GI道肿瘤发展的瘤形成患者会是有用的监视技术。实施例176除给患者用0.01微摩尔/kg的含锰化合物，例如二磷酸二吡哆醛锰(Nycomed，Oslo，Norway)代替钆化合物外，该实施例类似于实施例175进行的研究，如实施例17l得到的结果，整个GI道腹部粘膜区域对于MR快速表现为增加损害的造影。实施例177这个实施例描述本发明稳定悬浮液与靶定位阳性对比剂有关的用途。
含有靶定位顺磁剂或不透射线剂的对比剂，例如用对于癌胚剂抗原的抗体标记的MnCl2 nanogels(100mg)，或用内皮生长因子标记的硫酸钡颗粒(1g)，将其给入患有GI道癌症的患者。给入上述靶定位对比剂后24小时，给患者用本发明稳定悬浮液20mL/kg，进行CT或MR成像，肠将显示黑色，由黑色背景中的亮点叠加将检测出肠腺泡癌区域。
每个专利、专利申请的公布和在这些文献中引证或描述的公开，整体结合作为参考。
除了这里所描述的外，本发明的各种改进，对本领域技术人员来说，从前述中是显而易见的。这些改进也将落入所附权利要求书的保持范围之中。
权利要求
1.稳定化的、基本均匀的气体悬浮液，其中悬浮液具有负密度约-40HU或更少。
2.根据权利要求1的悬浮液，其中悬浮液具有负密度约-50HU或更少。
3.根据权利要求2的悬浮液，其中悬浮液具有负密度约-100HU或更少。
4.根据权利要求3的悬浮液，其中悬浮液具有负密度约-500HU或更少。
5.根据权利要求1的悬浮液，其中悬浮液是用稳定剂稳定的。
6.根据权利要求5的悬浮液，其中所述的稳定剂包含表面活性剂。
7.根据权利要求6的悬浮液，其中所述的表面活性剂选自包括阴离子，阳离子，两性离子和非离子表面活性剂。
8.根据权利要求7的悬浮液，其中所述的表面活性剂包括非离子表面活性剂。
9.根据权利要求8的悬浮液，其中所述的非离子表面活性剂选自由聚氧乙烯-聚氧丙烯甘醇嵌段共聚物和脱水山梨醇脂肪酸酯组成的组。
10.根据权利要求1的悬浮液，其中所述的气体包含挥发的全氟代烃。
11.根据权利要求10的悬浮液，其中所述的全氟代烃选自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟环丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、和全氟辛烷。
12.根据权利要求11的悬浮液，其中所述的全氟代烃选自全氟戊烷、全氟己烷、和全氟辛烷。
13.根据权利要求12的悬浮液，其中所述的全氟代烃包括全氟戊烷。
14.根据权利要求1的悬浮液，进一步含有增稠剂。
15.根据权利要求14的悬浮液，其中所述的增稠剂选自淀粉、树胶、果胶、酪蛋白、琼脂糖、明胶、角叉菜胶和纤维素衍生物。
16.根据权利要求15的悬浮液，其中所述的增稠剂选自树胶、角叉菜胶和纤维素衍生物。
17.根据权利要求16的悬浮液，其中所述的树胶包括苍耳烷树胶。
18.根据权利要求16的悬浮液，其中所述的纤维素衍生物选自甲基纤维素和羧甲基纤维素。
19.根据权利要求18的悬浮液，其中所述的纤维素衍生物包括甲基纤维素。
20.根据权利要求1的悬浮液，进一步包括分散剂。
21.根据权利要求20的悬浮液，其中所述的分散剂包括聚合硅氧烷化合物。
22.根据权利要求21的悬浮液，其中所述的聚合硅氧烷化合物基本由烷基完全烷基化。
23.根据权利要求22的悬浮液，其中所述的烷基包括低级烷基。
24.根据权利要求23的悬浮液，其中所述的低级烷基是甲基。
25.根据权利要求21的悬浮液，其中所述的聚合硅氧烷化合物是α-(三甲基甲硅烷基)-ω-甲基聚[氧(二甲基亚甲硅基)]。
26.根据权利要求1的悬浮液，包含稳定化微球体。
27.根据权利要求1的悬浮液，其中所述的微球体包括气体填充的微球体。
28.根据权利要求1的悬浮液，进一步含有选自类脂、摄入油、粘度调节剂、乳化和/或稳定剂、悬浮或粘度增强剂、合成的悬浮剂、和张力增强剂的化合物。
29.根据权利要求1的悬浮液，其中至少部分所述气体衍生自气体前体。
30.稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液。
31.根据权利要求30的悬浮液，包含稳定化微球体。
32.根据权利要求31的悬浮液，其中所述的微球体用稳定剂稳定。
33.根据权利要求31的悬浮液，其中所述的微球体包括气体前体填充的微球体。
34.根据权利要求33的悬浮液，用作计算机化X射线断层照相术或核磁共振用对比介质。
35.根据权利要求34的悬浮液，用作计算机化X射线断层照相术用对比介质。
36.作为计算机化X射线断层照相术的对比介质包含稳定化的、基本均匀的气体悬浮液。
37.根据权利要求36的对比介质，其中至少部分所述气体衍生自气体前体。
38.根据权利要求36的悬浮液，包含稳定化的微球体。
39.根据权利要求38的悬浮液，其中所述的微球体用稳定剂稳定。
40.根据权利要求38的悬浮液，其中所述的微球体包括气体填充的微球体。
41.制备稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液的方法，包括在气体前体存在下搅拌稳定物质的含水混合物。
42.根据权利要求41的方法，其中悬浮液包含稳定化的微球体。
43.根据权利要求42的方法，其中所述的微球体包括气体前体填充的微球体。
44.根据权利要求41的方法，进一步包括在增稠剂存在下搅拌所述的含水混合物。
45.根据权利要求41的方法，进一步包括在分散剂存在下搅拌所述的含水混合物。
46.根据权利要求41的方法，其中所述的搅拌包括振荡或涡旋。
47.根据权利要求41的方法，进一步包括在气体存在下搅拌所述的含水混合物。
48.制备作为计算机化X射线断层照相术用对比剂的稳定化的、基本均匀的气体悬浮液的方法，包括在气体前体存在下搅拌稳定物质的含水混合物；和活化所述的气体前体。
49.根据权利要求48的方法，包括在所述搅拌步骤中形成稳定化的微球体。
50.根据权利要求49的方法，其中所述的微球体是气体前体填充的微球体。
51.根据权利要求50的方法，包括在所述活化步骤中，形成稳定的气体填充的微球体。
52.根据权利要求48的方法，其中所述活化步骤包括在体内经过从液体到气体的相转移产生所述的气体前体。
53.提供患者内部区域成像的方法，包括(i)对患者给用含有根据权利要求1悬浮液的对比介质，和(ii)用计算机化X射线断层照相术扫描患者，得到区域的可见成像。
54.根据权利要求53的方法，其中区域包括脉管系统区域。
55.根据权利要求53的方法，其中区域包括心血管区域。
56.根据权利要求53的方法，其中区域包括胃肠道区域。
57.诊断患者疾病组织的存在方法，包括(i)对患者给用含有根据权利要求1悬浮液的对比介质，和(ii)用计算机化X射线断层照相术扫描患者，得到患者任何患病组织的可见成像。
58.根据权利要求57的方法，其中区域包括脉管系统区域。
59.根据权利要求57的方法，其中区域包括心血管区域。
60.根据权利要求57的方法，其中区域包括胃肠道区域。
61.根据权利要求57的方法，其中所述的扫描患者区域选自鼻内道、听觉通道、眼内区域、腹膜内区域、肾、尿道和泌尿生殖道。
62.提供患者内部区域成像的方法，包括(i)对患者给用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液，(ii)使所述的气体前体在体内经过从液体到气体的相转移，和(iii)用计算机化X射线断层照相术扫描患者，得到区域的可见成像。
63.根据权利要求62的方法，其中所述的气体前体在接近患者正常体温下经过从液态到气态的相转移。
64.诊断患者疾病组织存在的方法，包括(i)对患者给用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液，(ii)使所述的气体前体在体内经过从液体到气体的相转移，和(iii)用计算机化X射线断层照相术扫描患者，得到患者任何疾病组织的可见成像。
65.制备用于患者的计算机化X射线断层照相术对比介质的方法，包括(i)对患者用稳定化的、基本均匀的气体前体悬浮液，和(ii)使所述的气体前体在体内经过从液体到气体的相转移，提供对比介质。
全文摘要
一种诊断对比剂用新颖稳定的气体悬浮液，包括计算机化X线断层扫描术(CT)和核磁共振(MR)对比剂，在优选方案中，悬浮液包含稳定的气体填充的微球体，而且在一些优选方案中，至少一部分气体衍生于气体前体。
文档编号A61K9/50GK1149259SQ95193274
公开日1997年5月7日 申请日期1995年5月22日 优先权日1994年5月23日
发明者艾文·C·安格尔 申请人:ImaRx药物公司