专利名称：抗水痘－带状疱疹病毒基因63产物的疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗和预防感染了水痘-带状疱疹病毒(VZV)的个体的带状疱疹的组合物，并涉及水痘感染的预防和治疗。本发明组合物含有由VZV基因63编码的蛋白或其免疫活性衍生物。本发明进一步涉及含有与VZV基因63相对应的DNA或RNA的组合物。
水痘病毒是一种人α-疱疹病毒，能导致两种人类疾病初次感染VZV导致儿童水痘，此后病毒变为潜伏并常常重激活(通常几十年后)产生带状疱疹。患水痘时，病毒透入外周神经系统并潜伏直至以痛苦的带状疱疹形式重激活。由于病毒是潜伏的，大部分病毒基因地表达被抑制。由于带状疱疹形式的重激活常发生在年老的或免疫损伤的个体中，据信细胞介导的免疫在控制潜伏状态中起着关键作用。
VZV感染具有存在最小量的自由病毒的特征。在潜伏状态和重激活时，病毒主要在细胞内。相应地，甚至使用高浓度中和抗体和依赖于细胞介导免疫的病毒控制也不能预防复发疾病。为了通过接种获得保护，不但需要诱导抗体反应，还需要细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。一种有效的疫苗应当使细胞毒性T淋巴细胞具有一旦出现潜伏病毒重激活征兆时尽可能早的起作用的能力。
由于通过细胞毒性T淋巴细胞CTL的抗原识别机制包括天然抗原分解成肽，蛋白分解片段与主要组织相容性复合体(MHC)分子的结合以及复合体向细胞表面的排出，任何病毒编码多肽而不只是那些膜内在蛋白质例如糖蛋白可以是T细胞介导反应的潜在靶。然而，由于VZV基因组除了外部糖蛋白以外还编码几种非结构蛋白质和内部病毒颗粒蛋白质，导致大量的潜在细胞毒性T淋巴细胞靶并且不知哪种蛋白质是最相关的。
水痘带状疱疹病毒基因组由71个开放阅读框组成，编码68种蛋白质。已知病毒DNA的序列(普通病毒学期刊(J.Gen Virol)67 1759-1816)。水痘带状疱疹病毒基因63编码预计分子量为30.5千道尔顿(KDa)的立即早期蛋白质(Debrus等,病毒学期刊(J.of Virology)69(5),1995第3240页)。该基因开始于110581(起始密码子)直至111414(终止密码子)。该基因另一个反方向的拷贝发现于碱基119316至118483之间。相当罕见地，发现了IE63蛋白质表达于大鼠模型中，潜伏状态时在神经元中。该蛋白质已经作为融合蛋白在大肠杆菌(E.coli)中表达(Debrus等)。
已经发现VZV IE63蛋白质仅在潜伏感染的人三叉神经节和胸神经节的神经元胞质中检测到。这是第一个鉴定到的在人神经系统中于潜伏状态下表达的α-疱疹病毒蛋白质。
此外，本发明者发现这种蛋白质是免疫系统的重要靶，特别是T细胞反应的靶，从而可用于预防和治疗VZV感染。特别是，预防已被VZV感染的病人的带状疱疹。
相应地，本发明提供了一种含有水痘-带状疱疹病毒IE63蛋白质或其免疫学功能等价物和药物可接受载体的药组合物。
这是这种蛋白质的首次医学应用并且从而本发明相应地提供VZV IE63蛋白质或其免疫学功能等价衍生物用于药物中。
本发明的另一方面是提供了一种治疗易患有或正患有VZV感染的人的方法，包括施用安全和有效量的根据本发明的组合物。
每一疫苗剂量中的蛋白质量是以能够在典型疫苗中诱导免疫保护反应而没有显著的有害副反应的量来选择的。这一量将随使用的特定免疫原以及它怎样呈递而变化。通常，预计每剂包含1-1000微克蛋白质，优选地2-100微克，最优选地4-40微克。通过包括观察受试者中适当的免疫应答的标准研究可确定特定疫苗的最佳量。在初次接种后，可使对象以充分间隔接受一次或多次加强剂量免疫。
除了向易患有VZV感染的人接种外，还可使用本发明的药物组合物，免疫治疗感染VZV的病人，以预防或显著降低复发疾病，带状疱疹病的频率，严重程度或持久性等。
在本发明的疫苗中，可直接使用VZV IE63蛋白质的水溶液。或者，可将经过或未经冻干的VZV IE63蛋白质与任何各种已知的佐剂相混合。这类佐剂包括但不限于，氢氧化铝，胞壁酰二肽和皂角苷诸如Quil A，特别是QS21或3脱酰单磷酰类脂A(3D-MPL)。优选地诱导TH1应答的佐剂或佐剂系统是优选的。能够优先地刺激TH1细胞应答的佐剂描述于国际专利申请WO94/00153和WO95/17209中。
一种特别优选的佐剂包括QS21，一种来源于皂树(Quillaja SaponariaMolina)树皮的高效液相色谱纯化的非毒性组分，和3去氧酰化单磷酰类脂A(3D-MPL)，任选地与一种水包油乳剂一起。
3去氧酰化单磷酰类脂A是从GB2220211(Ribi)所知的。化学性质上来讲它是具4,5或6酰化链的3去氧酰化单磷酰类脂A混合物并且由Ribi免疫化学，蒙大那公司(Ribi Immunochem Montana)制造。3去氧酰化单磷酰类脂A的一种优选的形式在国际专利申请No.92/16556中公开。
QS21是从南美的皂树树皮(Quillaja Saponaria Molina)中经高效液相色谱纯化得到的皂角苷非毒性组分并且在美国专利No.5,057,540中公开了(作为QA21)其生产方法。
一种优选的水包油乳剂包括诸如角鲨烯，α-生育酚和吐温80的一种可代谢油。另外，水包油乳剂可包含Span85和/或卵磷脂。
QS21对3D-MPL的比率典型地处于1∶10到10∶1的数量级；优选地1∶5到5∶1并且通常实际为1∶1。最佳协同作用的优选范围是2.5∶1到1∶1的3D MPL:QS21。对人类施药时典型地QS21和3D MPL在疫苗中的每剂含量范围为1微克-100微克，优选地10微克-50微克。典型地，水包油含有2％到10％的角鲨烯；2％到10％α-生育酚和0.3％到3％的吐温80。优选的角鲨烯α-生育酚比率是等量或小于1，这样能使乳剂更稳定。也可含有1％的Span85。在有些情况下，本发明的疫苗进一步含有一种稳定剂是有益的。
作为进一个示范的替代方案，也可将蛋白质包在诸如脂质体的微粒中。在另一个示范的替代方案中，可将VZV IE63蛋白质与免疫刺激性分子，诸如杀死的博代杆菌或一种破伤风类毒素相缀合。
疫苗制备通常描述于疫苗新趋势和发展(New Trends and Developments inVac cines),Voller等(编者)，University Park Press,Baltimore,Maryland,1978一书中。包埋于脂质体中由Fullerton描述于美国专利4,235,877中。蛋白质与大分子的缀合公布于例如Likhite的美国专利4,372,954和Armor等的美国专利4,474,757中。Quil A的使用由Dalsgaard等公开于Acta Vet Scand 18:349(1977)中。3D-MPL来自美国的Ribi免疫化学公司(Ribi immunochem)，并公开于英国专利申请No.2220211和美国专利4912094中。QS21公开于美国专利No.5057540中。
本发明的多核苷酸在遗传免疫中的应用优选地使用下列一种合适的传递方法，诸如将质粒DNA直接注射到肌肉(Wolff等，人类分子遗传(Hum MolGenet)1992,1:363,Manthorpe等，人类遗传治疗(Hum,Gene Ther.)1963:4,419)，递送与特定蛋白质载体复合的DNA(Wu等，生物化学杂志(J.BiolChem)1989:264,1985)，将DNA与磷酸钙共沉淀(Benvensity和Reshef,美国国家科学院院报(PNA),1986:83,9551)，或与其它易化剂facilitator一起将DNA包埋于多种形式的脂质体中(Kaneda等，科学(Science)1989:243,375)，颗粒轰击(Tang等，自然(Nature)1992,356∶152,Eisenbraun等，DNA细胞生物学(DNACell Biol)1993,12:791)以及使用克隆的逆转录病毒载体(Seegar等，PNAS1984:81,5849)或非感染性重组病毒载体诸如Semliki Forest helper2系统(Berglund等生物/技术学(Bio/Technology)1993,11∶916-920)进行活体感染。合适的肌肉转染促进因子(promoter)包括巨细胞病毒(CMV)，劳斯肉瘤病毒(RSV),Sra，肌动蛋白，MCK，α-珠蛋白，腺病毒，二氢叶酸还原酶。递送依据本发明的多核苷酸的优选方法是使用金颗粒通过US5100792,US5036006，以及4945050的基因枪方法递送。
可以使用描述于WO90/11092中的给药剂量和途径对本发明多核苷酸组合物给药。不过精确的剂量显然应依赖于诸如体重，性别，给药方式，病人大致健康状况和要处理的疾病状况等因素。尽管如此，对肌肉内给药，使用的剂量典型地处于0.05微克/公斤到大约50毫克/公斤的范围，更典型地大约0.1到10毫克/公斤。由于具诱导高水平CTL的能力，皮下，表皮，真皮内或粘膜给药是有益的。
本发明的疫苗另外还可含有其它抗原性组分，诸如VZV gpⅠ,gpⅡ,gpⅢ,gpⅣ或其截短的衍生物或其它立即早期蛋白质诸如IE62蛋白质。特别是公开为No.0405867的欧洲专利申请中所述的截短的gpⅠ,gpⅡ或gpⅢ。
在本发明的一个优选实施方案中，提供的疫苗组合物含有与IE63或IE63衍生物并用的非锚定(anchorless)gpⅠ。
非锚定意味着一种实质上缺乏所有的C末端锚区域的VZV糖蛋白衍生物并且它使其在哺乳动物细胞中表达时分泌。这种蛋白质描述于欧洲专利EP-A-0405867。
在另一实施方案中提供了含有一种含融合蛋白的疫苗，该融合蛋白含有体现IE63或衍生物的氨基酸序列和体现gpⅠ,gpⅡ,gpⅣ或gpⅤ中的一个或其衍生物或其它立即早期蛋白诸如IE62的氨基酸序列。
在另一个实施例中，可直接使用能表达IE63或其衍生物的多核苷酸作为核酸疫苗。优选地，该多核苷酸是DNA。在这种情况下，多核苷酸将在一种合适的启动子控制下。
也可使用RNA免疫。在此情况下，可依据WO92/10578中的方法制备RNA。
实施例1含有VZV IE63蛋白质的疫苗制剂
制成了两种佐剂制剂，每种含有下列水包油乳剂组分。
SB62:5％角鲨烯，5％生育酚，2.0％吐温80；颗粒大小180nm1(a)制备乳剂SB62(2倍浓度)
将吐温80溶解于磷酸缓冲盐溶液(PSB)制成PBS中的2％溶液。为了制成100毫升二倍浓度乳剂，将5克DLα-生育酚和5毫升角鲨烯涡动以充分混合。加入90毫升PBS/吐温溶液并充分混合。然后将产生的乳剂通过注射器并最后使用Ml10S微流仪(microfluidics machine)微流。产生的油滴大小大致180nm。1(b)依据Debrus等(Supra)的方法制备抗原。1(c)制备IE63蛋白QS21/3D-MPL水包油制剂。
将等体积二倍浓度抗原(20微克或100微克)加入1a)的乳剂中并混合。将其与50微克/毫升3D-MPL和20微克/毫升QS21混合形成最终制剂。缓冲液与盐含量和pH相应实施例2IE P63的免疫学特征2.1材料
从有一人已被免疫接种的十一位健康供血者中抽取血液。所有这些供血者都是成年人，并在童年患过水痘。在每一例中，将30毫升血液采集到肝素化试管中以及将5毫升放置凝血以获取血清。2.2体液免疫应答
进行了使用全VZV和对照抗原来检测血液样品中抗-VZV IgG的酶联免疫吸附测定试验所有检测的供血者(除一人外)都有可检测水平的抗VZV抗体，从而提供了童年时患过水痘的血清学证明。
使用克隆到pGEX5X中并在大肠杆菌(E.coli)中以融合蛋白(GST-IE63)表达以及通过亲和层析(Deburs等，病毒学期刊)(J.Viol),69,3240-3245)纯化的IE63通过Western印迹检测研究抗-IE63抗体的存在。使用以相同方式表达和纯化的GST蛋白质作为阴性对照。在所有检测的血液样品中，纯化的IE63融合蛋白得以识别表明了血清中存在抗-IE63抗体。对照蛋白质从未被该抗体识别。2.3细胞免疫应答
通过刺激由菲可帕克(ficollhypaque)离心分离的PBMC(外周血单核细胞)检测T淋巴细胞刺激。
通过用植物血细胞凝集素(PHA)刺激3×105 PBMC一式三份进行全部试验测定非特异刺激指数，全VZV和对照抗原(通过超声处理感染或未感染黑素瘤细胞制备)及纯化的融合蛋白(GST-IE63或单独的GST)。在第6天，用3H-胸苷脉冲标记细胞16小时，然后收获细胞。刺激指数(SI)以蛋白质刺激孔中的每分钟计数(CPM)与对照孔的比率计算，并且在＞2时认为是阳性。2.4T细胞增生结果
使用先前确定的参数，迄今已进行了10次增生检测。
结果列于表1。
用全VZ抗原或IE63刺激后获得的刺激指数描绘于
图1所示的曲线图中。
从这些数据，我们可推断
大多数人(6/10)具有对VZV IE63的记忆T细胞应答。
两名供体用全抗原和纯化的融合蛋白时均具有很低的刺激指数(SI)，可认为是阴性的(SI＜2)。但是，其中一人具有很低的抗体滴度，没有任何具水痘病史的明确证据，因此可能是一名阴性供血者。另一名具有很高抗体滴度的人在用MBP-IE63进行检测时具有较好的SI(SI=3.4)，表明在某些情况下一种融合蛋白更好地被T细胞识别因此在SI非常低且有高的标准偏差时两种蛋白质的比较是有益的。
另两位供血者对IE63显示阴性应答而其SI对全抗原则较高，但是只用GST融合蛋白进行了刺激。实施例3细胞反应
在上述实验的扩展中，检测了来自19位健康成年人的PBMC对VZV抗原或GST-IE63纯化蛋白刺激的T细胞增生反应。对VZ抗原的平均S.I.是15.5±3.3标准误(SE)，其值在2.1和52之间。用GST-IE63刺激后的平均S.I.是3.4±0.48SE，其值在1.8和8之间。这些S.I.数据显著高于在非免疫病人中观察到的数据，其S.I.对VZV抗原为1.95±0.48SE，对IE63为1.3±0.1SE。当绘出VZV刺激后的S.I.并与使用GST-IE63的S.I.相对比，两位非免疫病人对两种抗原制剂清楚地显示阴性(S.I.＜2.0)(图2)。所有17位免疫供血者对VZV抗原具有高于2.0的S.I.。在这些阳性供血者中，其中的3人(17％)，一人有多次带状疱疹发疹历史，对VZV抗原显示非常强烈的反应，而对GST-IE63的S.I.低于2.0。四位对GST-IE63的S.I.为2.0的供血者对VZ抗原的S.I.在5.4到11的范围。但是，所有对GST-IE63的S.I.≤2的供血者对单独GST有非常重要的反应(未发表资料)，这使得结果难以解释。所有其它天然免疫个体(59％)对GST-IE63显示强烈反应，其S.I.在2.3到8之间。但是，未发现用VZ抗原和用融合蛋白刺激之间有何相关性。实施例4细胞因子检测
评价了7个受试者的用IE63刺激的PBMC的细胞因子产生用GST或GST-IE63刺激PBM C并在第2,4或6天用酶联免疫吸附检测(ELISA)测定白介素2(IL.2)，白介素4(IL4)和g-FN。结果以GST-IE63或单独的GST刺激后检测到的细胞因子浓度间的差别表示。IE63刺激后的T-细胞未检测到IL2和IL4但产生了显著量(175到1400皮克/毫升)的γ-干扰素(r-IFN)，第四天产量达到最高。未观察到刺激的培养物中检测到的γ-干扰素的量非常低。实施例5细胞毒性检测
在有限稀释分析从10名VZV-免疫供体中获得的T细胞中测定了IE62和IE63-特异性CTL反应。使用未感染的或由牛痘对照，牛痘-IE62或牛痘-IE63感染的自体靶进行了这些检测。在供体中对照靶产生的背景变动很大，但只有在病毒特异性靶裂解至少比对照靶(未感染的或用牛痘-对照感染的)裂解强10％时结果才被认为有效。
如一次检测中证明(图3)，当使用T-Lymphokwik回收的T细胞种群时，表达VZV蛋白的靶的裂解显著高于在未感染或对照靶中观察到的裂解。表达IE62的靶中观察到的裂解与表达IE63的靶中的裂解没有显著差别。用全T细胞种群进行的4次检测得到了相似的结果对IE62观察到25-48％特异性裂解，和对IE63的27-43％。识别IE62或IE63的T细胞平均前体频率分别是44500±22500SE和31000±16000SE，但是此差别在统计上是不显著的(P=0.8)。
使用纯化的CD4+和CD8+T淋巴细胞种群作为效应物制备了有限稀释培养基。两种群均裂解IE62和IE63靶。识别IE62或IE63的CD8+细胞的RCF分别是28500±10100SE和30500±13700SE，这在统计学上是无差别的(P=0.9)，表明CD8+细胞对两种病毒蛋白质以相同的效率识别(图4)。在两种群效应物细胞中裂解IE63鞘的细胞数也是相同的平均CD4+效应物细胞是31450±7500SE，与CD8+细胞的频率相同(P=0.97)。但是，计算机分析中舍弃了用于IE62识别的CD4+细胞频率的计算。实施例6潜伏状态下VZV IE63的表达
为了检测潜伏感染的神经节中VZV的表达，从死亡24小时以内的9名成人和3名婴儿中获取了一个三叉神经节和多个胸神经节。在死亡之前所有受试者都不是免疫损伤的，并且通过尸检，没有新近疱疹病毒感染的皮肤征兆。酶免疫测定揭示所有成人血清中有抗VZV抗体。只从3名婴儿中一名中获得的血清中不含抗VZV抗体。使用VZV特异性引物的液相PCR扩增(Mahalinaham R等，英国医学杂志(Eng.J.Med)323,627-631)揭示在从一小部分每种神经节中提取的DNA中在所有成人神经节中有VZV DNA，而在婴儿神经节中均不含VZV DNA。对每一神经节的剩余部分使用在兔中培养的抗如(Debrus等supra)所述在大肠杆菌中以谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白表达并纯化的30.5-千道尔顿-VZV IE63蛋白的抗体进行免疫组织化学检测。VZV感染的和未感染的BSC-1(非洲猴肾)细胞分别用作阳性和阴性对照。
在VZV感染的BSC-1细胞中观察到两个含有VZV IE63蛋白质的典型VZV细胞病理学病灶。在未感染的细胞或单纯疱疹病毒(HSV)感染的BSC-1细胞中未测到信号。在死于动脉粥样硬化的46岁男人死亡后17小时获取的神经节中，特征性的红色揭示3个神经元胞质中仅有VZV IE63蛋白质。当将正常兔血清用于同一神经节相邻部分时未检测到信号。同一对象不同胸神经节相邻部分神经元胞质中检测到深红染色。在潜伏感染神经节的多个神经元中常看到浅红色，暗示着更弥漫的，或许低丰度的感染。在卫星(被膜)细胞，毛细管，结缔组织，神经节中的神经束，或进入神经节的神经无根(rootless)中从未发现红色VZV IE63蛋白特异性染色。当将抗VZV IE63蛋白质的抗血清用于死于脓毒症并发先天脐突出和肺发育不全的2个月婴儿的神经节时未检测到信号。总的来说，从2位成人的5个神经节(4个胸神经节和1个三叉神经节)中发现了VZV IE63蛋白质。在这些成人之一中，从5个胸神经节中的4个中的所有10个切片中都检测到VZV IE63蛋白质。在第二位成人中，从自三叉神经节的所有4切片中都检测到VZV IE63蛋白质。在阳性切片中，在2-4神经元胞质中检测到VZV IE63蛋白质。在每一个从来自7位其它成人中的16个神经节中制备的4切片中的任一个中，或在每一个从3个婴儿中得到的9个神经节中制备的4切片中的任一个中未检测到VZV IE蛋白质。
在几乎所有神经节中检测到VZV DNA但只在某些潜伏感染神经节中检测到VZV IE63可能反映了抽样，即检测每一含VZV IE63蛋白质的VZVDNA的神经节的每一切片可能揭示附加的阳性神经节。换句话说，在不同神经节中病毒表达可能不同，例如，在HSV潜伏感染的神经节中，含HSV DNA的神经元数量远大于揭示出的潜伏状态相联系的转录的。
最后，可能出现病毒重激活，虽然由于死前没有带状疱疹样疹的临床证据，没有疹前长时间神经痛(疱疹前神经痛)的病史，没有不出疹(Zoster sineherpete)的皮肤瘤(deermatomal)散布痛病史，以及没有暗示低级神经节炎的出疹后神经痛病史，看起来在神经节含VZV IE63蛋白质的受试者中不太可能发生。此外，神经节的组织学检查揭示无噬神经细胞作用，包涵体或炎症反应。结论
从这些实验中，我们可推断VZV IE63引发了一个完整的免疫应答
·可通过western印迹测定在多数具水痘病史的供体血清中检测到抗IE
63抗体；
·用IE63(纯化为GST-融合蛋白)体外刺激后能使T细胞增生，但有
限量的测试供体未能使我们发现用VZV的刺激指数(S.I.)与用IE63
的直接的相关性。如上清液中大量γ-干扰素的表达所示，反应于IE
63刺激发生的T细胞增生多为TH1；
·显示了在IE63识别中的T细胞细胞毒性活性。如通过使用纯化的效
应物细胞所确定的，CD4+以及CD8+细胞参与裂解过程。识别
IE63的前体细胞数量近似于对IE62有响应的细胞数量。
这是鉴定在于潜伏状态下人神经系统中表达的疱疹病毒蛋白及其免疫学特性的第一篇报道，它是一种待包含于抗水痘带状疱疹的疫苗中的优异的抗原。
表1T细胞增生表1对VZV的体液和细胞免疫应答。在用全抗原(超声处理的感染的或模拟感染的稀释4,16或64倍的黑素瘤细胞)或用IE63融合蛋白(GST或GST-IE63)刺激后测出刺激指数。对全抗原用酶联免疫吸附测定(以O.D.＞0.250的稀释度表达)或对IE63用Western印迹检测评价体液免疫状态。
权利要求
1．一种包含水痘-带状疱疹病毒IE63蛋白或免疫学功能衍生物以及一种药物可接受赋形剂的药物组合物。
2．一种包含编码IE63的核酸或其免疫学功能衍生物的药物组合物。
3．用于药物的IE63基因蛋白或其免疫学功能衍生物。
4．使用IE63蛋白或其免疫学活性衍生物制备能预防或改善水痘或带状疱疹的药物。
5．根据权利要求1的药物组合物，另外包含其它的VZV抗原。
6．根据权利要求5的药物组合物，其中的第二种水痘-带状疱疹蛋白选自gpⅠ,gpⅡ,gpⅢ,gpⅣ,gpⅤ或IE62或其免疫学功能衍生物。
7．根据权利要求1,2,5或6的药物组合物，另外包含一种佐剂。
8．根据权利要求7的药物组合物，其中的佐剂优选地诱导TH1反应。
9．根据权利要求9的药物组合物，其中的抗原与QS21和3D-MPL一起以水包油乳剂方式存在。
10．一种治疗患有或易患有水痘-带状疱疹病毒感染的病人的方法，包括向病人施用安全有效量的如权利要求1,2,5,6,7,8或9中的任一个中所述的药物组合物。
11．生产包含水痘-带状疱疹病毒IE63蛋白，核酸或其免疫学功能衍生物的药物组合物的方法，包括将上述蛋白，核酸或衍生物与药物可接受赋形剂混合。
12．根据权利要求11的方法，其中的赋形剂含有一种佐剂。
全文摘要
本发明涉及用于治疗和预防感染了水痘－带状疱疹病毒(VZV)的个体的带状疱疹的组合物,并涉及水痘感染的预防和治疗。发明组合物含有由VZV基因63编码的蛋白或其免疫学活性衍生物。本发明进一步涉及含有与VZV基因63相对应的DNA或RNA的组合物。
文档编号A61K39/245GK1210470SQ97192099
公开日1999年3月10日 申请日期1997年2月4日 优先权日1996年2月9日
发明者伯纳德·伦蒂尔, 凯瑟琳·萨德佐特 申请人:史密斯克莱·比奇曼生物公司, 烈日大学