留兰香精油在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及留兰香精油在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用，属于药物新用途 领域。
【背景技术】
[0002] 过敏性皮肤病是由过敏原引起的皮肤病，具体的过敏原包括接触过敏原、吸入过 敏原、食入过敏原和注射入过敏原。每类过敏原都可以引起相应的过敏性皮肤病，主要的表 现是多种多样的皮炎、湿瘆、荨麻瘆、药瘆、接触性皮炎等。随着大气污染、滥用农药、婴幼儿 过早使用及滥用抗生素、食品日益丰富或精神压力增大等原因，发病人群逐渐增多，严重影 响人类健康。现有治疗药物主要是激素类，但其副作用比较明显。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供留兰香精油治疗过敏性皮肤病的新用途。
[0004] 针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0005] 本发明提供了留兰香精油在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用。
[0006] 作为优选，所述留兰香精油的提取方法如下：
[0007] (1)取留兰香，粉碎，无水乙醇和乙醚的混合溶液作为提取液，水浴加热提取，得粗 提液；
[0008] (2)上述粗提液中加入活性炭，加热至沸腾，搅拌，冷却，抽虑，收集滤液；
[0009] (3)将上述滤液中的无水乙醇和乙醚除去，即得所述留兰香精油。
[0010] 进一步优选，所述无水乙醇和乙醚的体积比为2 : (2-4)，提取温度为80-100°C。
[0011] 作为进一步优选，所述过敏性皮肤病为化学接触、呼吸道吸入、注射药物、饮食或 者疾病所引起的接触性皮炎、湿瘆、荨麻瘆或者药瘆。
[0012] 本发明方法所述留兰香精油也可以与其它有效治疗过敏性皮肤病的化合物一起 协同使用。
[0013] 本发明的有益效果主要是：
[0014] 相对于现有技术，本发明方法中，留兰香精油能够稳定肥大细胞膜，减少肥大细胞 脱颗粒，抑制组织胺及0 -氨基己糖苷酶释放，减少炎症反应，并且能够降低毛细血管通透 性，缓解皮肤被动过敏反应的症状。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但应注意本发明的范围并不受这 些实例的任何限制。
[0016] 实施例1留兰香精油的提取
[0017] 用滤纸小袋包裹15g留兰香茎粉，置于索氏提取器中，加入无水乙醇和乙醚的混 合溶液l〇〇ml，所述无水乙醇和乙醚的体积比为40:40,水浴加热至80°C。反复提取后至烧 瓶中颜色与新浸出液颜色差不多时止。转移留兰香精油粗提液于烧杯中，加入lg活性炭， 加热至沸腾，并不时地搅拌，冷却后进行抽虑，收集滤液。用连有减压泵的旋转蒸发仪蒸发 其中的溶剂，收集蒸发后剩余的液体即为留兰香精油。
[0018] 实施例2留兰香精油的提取
[0019] 用滤纸小袋包裹15g留兰香茎粉，置于索氏提取器中，加入无水乙醇和乙醚的混 合溶液l〇〇ml，所述无水乙醇和乙醚的体积比为40:80,水浴加热至90°C。反复提取后至烧 瓶中颜色与新浸出液颜色差不多时止。转移留兰香精油粗提液于烧杯中，加入lg活性炭， 加热至沸腾，并不时地搅拌，冷却后进行抽虑，收集滤液。用连有减压泵的旋转蒸发仪蒸发 其中的溶剂，收集蒸发后剩余的液体即为留兰香精油。
[0020] 实施例3留兰香精油的提取
[0021] 用滤纸小袋包裹15g留兰香茎粉，置于索氏提取器中，加入无水乙醇和乙醚的混 合溶液l〇〇ml，所述无水乙醇和乙醚的体积比为40:60,水浴加热至100°C。反复提取后至烧 瓶中颜色与新浸出液颜色差不多时止。转移留兰香精油粗提液于烧杯中，加入lg活性炭， 加热至沸腾，并不时地搅拌，冷却后进行抽虑，收集滤液。用连有减压泵的旋转蒸发仪蒸发 其中的溶剂，收集蒸发后剩余的液体即为留兰香精油。
[0022] 实施例4留兰香精油对肥大细胞脱颗粒，释放组织胺及氨基己糖苷酶的影 响：
[0023] 注：以下所用留兰香精油均为本发明实施例3所得留兰香精油
[0024] 1、肥大细胞脱颗粒试验
[0025] 大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株RBL-2H3,购自中国科学院上海生命科学研宄院细 胞资源中心。RBL-2H3具有肥大细胞的许多生物学特性，被认为是体外检测脱颗粒反应的最 佳模型。用含有10%胎牛血清的DMEM培养液，于5%C02 , 37°C条件下对细胞进行培养。传 代时用0. 25 %胰酶消化约3min，用少量血清终止消化，吹打细胞使其成单个细胞。离心收 集细胞，调整细胞浓度为5X104/ml，种于24孔板，lml细胞悬液/孔，5 %C02, 37°C培养过 夜使贴壁。培养24h后，每孔加入不同浓度的留兰香提取物溶液（溶剂为二甲基亚砜DMSO， DMSO的终浓度不超过0. 5% )20y1，加入相同体积的PBS作为正常对照组，另外加入5yM 的地塞米松作为阳性对照。30min后再分别加入终浓度为10yg/ml的C48/80 (本领域公 知的，在细胞实验中常用的引起细胞脱颗粒的复合物）20y1，继续培养lh后，弃去培养液， 每孔中加入0. 5%的中性红染液0. 4ml，37°C染色3min，随机计数每100个肥大细胞中脱颗 粒细胞数。设立3个复孔，重复3次实验取平均值。脱颗粒细胞百分比％=脱颗粒细胞数 八脱颗粒细胞数+未脱颗粒细胞数）X100 %。
[0026] 2、组织胺释放试验
[0027] 按照前述方法将RBL-2H3细胞培养在24孔板上，用PBS洗涤细胞两次，加入新的 含有10%胎牛血清的DMEM培养基lml，继续培养30min。每孔加入不同浓度的留兰香提取 物溶液20y1 (溶剂同上），加入相同体积的PBS作为正常对照组，另外加入5yM的地塞米 松作为阳性对照。30min后再分别加入终浓度为10yg/ml的C48/80 20y1，继续培养lh。 吸取细胞培养上清50y1，加入到低荧光本底的黑底96孔板中，随后加入50y1 0. 1M的 HC1，然后加入0. 4MNaOH溶液25y1，振荡混匀后立即加入0. 1 %与邻苯二甲醛的甲醇溶液 5y1，充分混匀并置室温下反应lOmin，加入0. 5MHC1 25y1终止反应。所得反应产物置于 Tecan多功能微孔酶标仪进行检测，激发波长为347nm发射波长为442nm。相应地，每孔细 胞通过反复冻融后收集细胞裂解液，同法检测细胞内组织胺水平。根据标准曲线分别计算 细胞上清和细胞中的组织胺含量。每孔细胞进行蛋白定量，平衡细胞数目差异。
[0028] 3、氨基己糖苷酶释放试验
[0029] 按照前述方法将RBL-2H3细胞培养在24孔板上，用PBS洗涤细胞两次，加入新的 含有10%胎牛血清的DMEM培养基（不含酚红）0. 5ml，继续培养30min。每孔加入不同浓度 的留兰香提取物溶液20y1 (溶剂同上），加入相同体积的PBS作为正常对照组，另外加入 5yM的地塞米松作为阳性对照。30min后再分别加入终浓度为10yg/ml的C48/80 20y1， 继续培养lh。吸取细胞培养上清50y1，加入到96孔板中，随后加入50y1底物溶液（2mM 的P-硝基苯-N-乙酰基-0 -D-氨基葡萄糖胺，0. 2M柠檬酸，pH4. 5)，37°C反应2h。加入1M Tris缓冲液（pH9) 100y1终止反应，405nm波长下测定吸光度。相应地，用0? 1%Triton X-100破碎细胞后离心去除沉淀，同法测定细胞中的0 -氨基己糖苷酶。每孔细胞进行蛋白 定量，平衡细胞数目差异。根据氨基己糖苷酶标准曲线分别计算细胞上清中与细胞中 0-氨基己糖苷酶含量，0 -氨基己糖苷酶释放率=上清的0-氨基己糖苷酶八上清0-氨 基己糖苷酶+胞内氨基己糖苷酶）X100%。
[0030] 4、数据处理
[0031] 结果表示为平均值土标准差，分别为3复孔，重复3次实验的结果。统计学检测 为Student'stwo-tailedt_test〇
[0032] 5、结果
[0033]RBL-2H3细胞分别用浓度（体积比）为0. 1%、0.2%及0.4%的留兰香精油溶液或 地塞米松（5yM)处理，分别测定对C48/80引起的细胞脱颗粒、组织胺及氨基己糖苷酶 释放的影响，结果见表1
[0034] 表1留兰香对RBL-2H3细胞脱颗粒、释放组织胺及0-氨基己糖苷酶的影响
[0035]
【主权项】
1. 留兰香精油在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述留兰香精油的提取方法如下： (1) 取留兰香，粉碎，无水乙醇和乙醚的混合溶液作为提取液，水浴加热提取，得粗提 液； (2) 上述粗提液中加入活性炭，加热至沸腾，搅拌，冷却，抽虑，收集滤液； (3) 将上述滤液中的无水乙醇和乙醚除去，即得所述留兰香精油。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述无水乙醇和乙醚的体积比为2 : (2-4)，提取温度为80-100 °C。
4. 根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于，所述过敏性皮肤病为化学接触、呼 吸道吸入、注射药物、饮食或者疾病所引起的接触性皮炎、湿瘆、荨麻瘆或者药瘆。
【专利摘要】本发明公开了留兰香精油在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用。相对于现有技术，本发明方法中，留兰香精油能够稳定肥大细胞膜，减少肥大细胞脱颗粒，抑制组织胺及β-氨基己糖苷酶释放，减少炎症反应，并且能够降低毛细血管通透性，缓解皮肤被动过敏反应的症状。
【IPC分类】A61P37-08, A61K36-534, A61P17-00
【公开号】CN104523825
【申请号】CN201410790633
【发明人】易宏伟
【申请人】东南大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月17日