Sb202190在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及SB202190的新用途，具体地说，涉及SB202190在制备治疗难治性癫痫 的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] SB202190(FHPI，英文化学名
[0003] 4_(4-Fluorophenyl)_2_(4-hydroxyphenyl)_5_(4-pyridyl)-lH-imidazole)是 一种有效的P38MAPK抑制剂，分子式C 2tlH14FN3O,分子量331. 3, CAS号152121-30-7。目前 体外研宄表明SB202190显著抑制内源本底和和抗Fas抗体诱导的MAPKAPK 2活性，且抑制 效果呈剂量依赖性。SB202190本身就足以诱导Jurkat细胞和Hela细胞的死亡：通过激活 CPP 32样半胱氨酸蛋白酶，可阻断Bcl-2的表达。ρ38β可减轻而ρ38α可加剧由SB202190 诱导的细胞凋亡。在HaCaT细胞中SB202190强烈抑制由紫外线诱导的cox-2蛋白表达和 mRNA水平。用SB202190处理肾小管上皮细胞（正常大鼠 k肝脏-52Ε)，可将由白蛋白引发 的炎症（单核细胞趋化蛋白-1，MCP-1)或肿瘤生长因子β-l(TGFf3-l)引发的原纤维化 (原骨胶原I al，procollagen-i alphal)相关基因降低50%。SB202190处理Α549细胞， 可诱导JNK磷酸化（该磷酸化效应呈时间和剂量依赖性）、转录因子ATF-2磷酸化，并增加 AP-I与DNA的结合。SB202190处理促进THP-I和MV4-11细胞的生长。SB202190可提高 c-Raf和ERK (细胞外信号调节激酶）磷酸化，暗示由SB202190诱导的白血病细胞增殖过程 有Ras-Raf-MEK-mitogen激活的MAPK通路的参与。体内研宄表明SB202190通过抑制p38 减弱了由人脊髓灰质炎IgG(PV-IgG)在被动转移小鼠模型中诱发的水泡形成。在脓毒症内 毒素模型中，与对照组相比，经SB202190处理可显著提高存活率。
[0004] 大约30 %左右的癫痫患者对抗癫痫药（antiepileptic drugs，AEDs)不敏 感，出现难以被控制的反复发作，称之为药物难治性癫痫。难治性癫痫最突出的特征 就是对有不同化学结构、不同作用机制的各类AEDs有明显的耐药性。目前，在动物实 验中判断这种耐药性公认最敏感、可靠的指标是后放电阈值（ADT)。多药转运体P-糖 蛋白（P-glycoprotein，PGP)介导的难治性癫痫耐药已被国内外公认（参见文献1 : Borst P,Evers Rj Kool M，et al. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins[J]. J Natl Cancer Inst.2000, 92(16):1295-1302.； 文献 2 ：Potschka Hj Fedrowitz M，Loscher W. P-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein are involved in the regulation of extracellular levels of the major antiepileptic drug carbamazepine in the brain[J]. Neuror eport. 2001，12(16) :3557-3560.)。PGP是最早发现参与脑内药物转运的转运体也是研究 最为广泛的多药转运体（参见文献l:Lee JC，Laydon JT，McDonnel，et al.A protein kinase involves in the regulation of inflammatory cytokine biosynthesis[J]. Nature. 1994,372:739;文献 2:Lavoie JN，Lambert H，Hickey E，et al. Modulation of cellular thermo resistance and actin filament stability accompanies phospharylation induced changes in the oligomeric structure of heat shock protein 27[J].Mol Cell Biol. 1995, 15:505-508.)DPGP 是一种分子量为 170kD 的跨膜糖 蛋白，完整的糖蛋白是由1281个氨基酸组成的两个完全相同的单体构成，每个单体均有6 个跨膜区和1个三磷酸腺苷（ATP)结合点。跨膜区作为膜通道有利于药物转运，而ATP结 合点与能量供应有关，这种PGP跨膜结构具有能量依赖性"药泵"的功能，它能将药物和其 它疏水性化合物主动转运出细胞。在人体血脑屏障部位，PGP位于毛细血管近血管腔的一 侧和毛细血管外星形胶质细胞足突上，参与构成了血脑屏障。因其能识别多种不同作用机 制的AEDs，主动将药物泵出血脑屏障，引起脑内药物浓度下降，从而导致耐药。
[0005] 目前关于SB202190在治疗难治性癫痫中的作用还未见报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供SB202190的新用途。
[0007] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
[0008] SB202190在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。
[0009] SB202190在制备药物中的应用，所述的药物用于改善或预防难治性癫痫对抗癫痫 药的耐药性。
[0010] SB202190在制备药物中的应用，所述的药物用于：
[0011] a)降低海马和大脑皮层PGP的表达；
[0012] b)提高海马细胞外液中抗癫痫药的药物浓度；或
[0013] c)降低癫痫发作分级。
[0014] 本发明优点在于：
[0015] 本研宄在难治性癫痫动物模型上，采用免疫组化、Western-blot技术研宄了 SB202190对脑内PGP表达的影响；采用微透析、高效液相色谱技术观察了 SB202190对难治 性癫痫大鼠海马细胞外液抗癫痫药物浓度的影响；采用电生理技术观察了 SB202190对癫 痫动物模型电生理和行为学的影响。研宄发现SB202190可以减少难治性癫痫大鼠脑内的 PGP表达，提高难治性癫痫大鼠海马细胞外液中AEDs的药物浓度，协助AEDs改善耐药大鼠 的电生理活动，降低点燃后发作分级，这提示SB202190可改善难治性癫痫的耐药。本发明 拓展了 SB202190的用途，为难治性癫痫的治疗提供了一种有效途径。
【附图说明】
[0016] 图LPGP在大鼠脑内的表达（荧光显微镜400X)。注明：绿色-PGP，红色-p38， 蓝色-DAPI ;a :正常对照组皮层，b :Epil印sy组皮层，c :SB202190组皮层，d :正常对照组海 马，e :Epil印sy组海马，f :SB202190组海马。
[0017] 图2. PGP在大鼠脑内表达的统计图。N组：正常对照组，M组：Epil印sy组，S组： SB202190 组。
[0018] 图3. p38 MAPK和PGP在大鼠脑内的表达。
[0019] 图4. SB202190对癫痫大鼠海马细胞外液VPA浓度的影响。
[0020] 图5. SB202190对癫痫大鼠海马细胞外液LTG浓度的影响.
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0022] 1材料和方法
[0023] I. 1实验材料和设备
[0024] 兔抗p38MAPK单克隆抗体：CST公司；
[0025] 小鼠抗p_p38抗体单克隆抗体：Santa Cruz公司；
[0026] 小鼠抗PGP单克隆抗体：Abcam公司；
[0027] 羊抗小鼠、羊抗兔DyLight?二抗：Jackson公司；
[0028] DAPI、苯妥英钠（PHT)、丙戊酸钠、拉莫三嗪、SB202190 :Sigma公司；
[0029] 微透析探针及套管：瑞典CM公司；
[0030] CMA/100微量注射泵：瑞典CM公司；
[0031] MonEL510型高效液相色谱仪：美国syltech公司。
[0032] 1. 2癫痫动物模型的建立以及分组
[0033] L 2. 1实验动物
[0034] 实验动物选用200-250g的雄性SD大鼠，共60只，购自BK公司。动物管理和使 用符合上海市动物管理委员会管理条例。清洁级动物房、单笼饲养、安静状态，保持温度为 20±2°C、相对湿度为60%，光照时间12小时/天，清洁饮水，标准饲养。
[0035] 1. 2. 2实验动物分组
[0036] 实验动物首先被随机分成2组，分别是正常对照组（Control group)和癫痫大鼠 模型组。随后癫痫大鼠腹腔注射苯妥英钠进行药物耐药筛选。根据筛选结果分为AEDs耐 药和AEDs敏感组（Sensitive group)。实验中AEDs耐药大鼠再随机分成两组，分别为耐药 组（通过微透析探针给予人工脑脊液作为对照，Epilepsy group)