一种管花肉苁蓉中活性成分的提取方法
【技术领域】
[0001]本申请涉及一种从管花肉苁蓉中提取松果菊苷、麦角留苷和肉苁蓉多糖的方法。
【背景技术】
[0002]管花肉苁蓉又称红柳大芸、管花大芸，主产于新疆维吾尔族自治区塔里木盆地南端，被列为濒危物种，生长于海拔约1200米处水分较充足的柽柳丛中及沙丘地，常寄生于塔克拉玛干径柳(K talamakanensis Μ.T.Liu)、多枝径柳(71.Bunge)和多花柽柳(K hohenackeri Bunge)的根部。管花肉灰蓉为多年生寄生草本,莖肉质,莖不分枝，干后变褐色，穗状花序，花萼筒状，花冠筒状漏斗形，蒴果长圆形，种子多数近圆形，干后变黑褐色。管花肉苁蓉生品呈纺锤形或扁纺锤形，直或稍弯曲，质坚硬，无韧性，不易折断，断面颗粒状，灰棕色至灰褐色，黄白色点状维管束散生于整个断面，具有明显的酒糟香味，味甘微苦。
[0003]管花肉灰蓉(cistanche tubulosa)干燥带鳞叶的肉质莖具有补肾壮阳，填精补髓，养血润燥，悦色延年等功效，具有“沙漠人参”的美称。其中主要的活性成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素苷类、寡糖脂类及多元醇等。苯乙醇苷类作为其中一种主要活性成分，包括松果菊苷、毛蕊花糖苷、2-乙酰基毛蕊花糖苷等。
[0004]松果菊苷(Echinacoside, ECH)具有保护神经系统、保护骨骼、抗氧化和抗损伤的功能。松果菊苷能逆转保护鱼藤酮、中动脉闭塞、6-羟多巴胺诱导的多巴胺能神经元损伤，也能自由穿过血脑屏障，有可能用于治疗帕金森、阿尔兹海默等神经变性疾病及预防和治疗大脑的缺血性疾病。松果菊苷能保护急性肺损伤，用于治疗急性呼吸窘迫综合征。松果菊苷通过诱导II期细胞保护能力而具有持久的皮肤保护效应，还能激发细胞活力，保护细胞免受DNA损伤，起到护肤和抗衰老的作用。
[0005]毛蕊花糖苷(Acteoside)，又称麦角留苷。具有治疗慢性肾小球肾炎等病症的功效。高莉等研究发现，毛蕊花糖苷能明显改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的学习记忆能力障碍，可以调节脑组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性，保护脑组织海马CAl区神经元细胞，提高脑组织和免疫器官指数，改善模型小鼠的脑损伤，提示毛蕊花糖苷的作用可能与其增强中枢胆碱能功能和保护神经元细胞有关.(中草药，毛蕊花糖苷改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的作用，2014年45卷01期，P81-85)。
[0006]肉苁蓉多糖也是管花肉苁蓉中的一种活性成分，具有抗衰老、抗氧化、调节免疫力、促进造血、改善记忆、抗癌等方面的功效。CN101870742A中公开了一种肉苁蓉多糖的分离提纯方法，CN101775047A、CN101717417A、CN1721425A中均公开了一种从肉苁蓉中分离松果菊苷的方法，CN103896997A中公开了一种从肉苁蓉中分离纯化毛蕊花糖苷的方法，CN101629198A中公开了一种采用生物催化方法制备毛蕊花糖苷单体化合物的方法。上述方法虽然均能得到目标产物，但均是从原料中获得单一产物的方法，对管花肉苁蓉中其它活性成分造成浪费。。
【发明内容】
[0007]本发明涉及一种提取管花肉苁蓉中有效成分的方法。具体而言，本发明所述方法可同时从管花肉苁蓉中提取肉苁蓉多糖、松果菊苷和麦角留苷。所述方法其特征在于:
(1)将干燥的管花肉苁蓉粉碎，以乙醇溶液加热提取2次，合并提取液；
(2)将提取液浓缩至热比重为1.15，加入天然澄清剂并过滤，得到滤液A ;
(3)滤液A过层析柱，吸附剂为大孔树脂SP207，过柱流出液收集B;用10-30%的乙醇水溶液进行洗脱，得到低醇洗脱液C，其用量为树脂体积的3倍，流速l-2BV/h ;再用60-95%的乙醇水溶液进行洗脱，得到高醇洗脱液D，其用量为树脂体积的3倍，流速2-3BV/h ;树脂吸附再生溶剂为5%氢氧化钠、纯化水；
(4)将过柱流出液B浓缩至热比重1.39，进行真空干燥，得到含量在20%-40%的肉苁蓉多糖产品；将低醇洗脱液C浓缩至热比重为1.20，进行喷雾干燥，得到含量在35%以上的松果菊苷产品；将高醇洗脱液D浓缩至热比重为1.20，进行喷雾干燥，得到含量在20%-30%的松果菊苷与含量在10%-20%的麦角甾苷混合产品。
[0008]进一步的，本发明所述的步骤(I)中，提取溶剂为50%_95%的乙醇水溶液。
[0009]进一步的，本发明所述的步骤(I)中，加热提取温度为70°C，每次提取时间为2h。
[0010]进一步的，本发明所述的步骤(2)中，天然澄清剂为II型ZTC1+1，加入量为500-600ppm ;过滤可使用10 μ m的精密过滤器。
[0011]进一步的，本发明所述的步骤(3)中，优选使用30%的乙醇水溶液，以2BV/h的流速，洗脱得到低醇洗脱液C。
[0012]进一步的，本发明所述的步骤(3)中，优选使用80%的乙醇水溶液，以3BV/h的流速，洗脱得到高醇洗脱液D。
[0013]更进一步的，本发明所述的步骤(I)中，提取溶剂为60%的乙醇水溶液。
[0014]本发明所述方法可以同时得到三种规格的管花肉苁蓉提取物产品，操作较简便，产品纯度和收率均较高，最大限度地利用了原料，节约资源。以本发明所述的方法得到的全部产品总收率达90%以上。
【附图说明】
[0015]图1为本发明所述方法的工艺流程图。
[0016]图2为松果菊苷标准品HPLC谱图。
[0017]图3为麦角甾苷标准品HPLC谱图。
[0018]图4为本申请实施例1中低醇洗脱液所得产品的HPLC谱图。
[0019]图5为本申请实施例1中高醇洗脱液所得产品的HPLC谱图。
【具体实施方式】
[0020]实施例1
称取5kg干燥管花肉灰蓉(多糖含量3.4%,松果菊苷含量5.0%,麦角留苷含量为1.2%),粉碎为直径约0.5cm的颗粒。以60%乙醇作为提取剂，对原料加热提取2次，每次加热2小时，提取温度70°C，原料与提取剂的质量比为1:5 ;将两次提取得到的提取液合并，加入浓缩器中真空浓缩至热比重为1.15,加入500ppm天然澄清剂II型ZTC1+1,过10 μ m的精密过滤器，得到滤液A ;滤液A以2BV/h的速度过层析柱，吸附剂为大孔树脂SP207，收集过柱流出液B ;用3倍于树脂体积的30%乙醇水溶液进行洗脱，流速2BV/h，得到低醇洗脱液C ;再用3倍于树脂体积的80%乙醇水溶液进行洗脱，流速3BV/h，得到高醇洗脱液D ;树脂吸附再生溶剂为5%氢氧化钠、纯化水；将过柱流出液B浓缩至热比重1.39，进行真空干燥，得到肉苁蓉多糖含量为30.0%的产品I的质量为510g ;将低醇洗脱液C浓缩至热比重为1.20，进行喷雾干燥，得到松果菊苷含量为40.3%的产品2的质量为293g ;将高醇洗脱液D浓缩至热比重为1.20，进行喷雾干燥，得到松果菊苷含量为25.1%、麦角留苷含量为11.2%的产品3的质量为489g ;总过程中，多糖收率90.0%，松果菊苷收率为96.3%，麦角留苷收率为91.3