用于炎性疾病的抗-cxcl9、抗-cxcl10、抗-cxcl11、抗-cxcl13、抗-cxcr3和抗-cxcr5试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本申请主要涉及炎性疾病的检测。更具体地说，本申请涉及用于使用抗-趋化因 子和/或抗-趋化因子受体检测试剂检测炎性疾病的方法。
【背景技术】
[0002] 尽管近来在与炎症过程相关的研宄中取得进展，但是用于诊断和治疗慢性炎性疾 病的方法仍然还有很多没有弄清楚。这可能是因为在宿主中引发并且维持炎症状态的因 子有很多并且是复杂的。目前治疗具有与它们相关的缺点，包括免疫系统的抑制可能导致 宿主更容易受到细菌、病毒和寄生虫感染。例如，使用类固醇是慢性炎症治疗的一种传统方 法。这种治疗可能导致保护性免疫的抑制和体重的变化。生物技术中的进展已经促进了具 有很少副作用的靶向生物制品的发展。为了改善炎性疾病治疗，需要发展改变和控制由先 天性和适应性免疫系统两者的细胞生成的因子的技术。
[0003] 宿主细胞具有与配体关联的表面受体以转导信号并且调节宿主细胞活性。施用抗 TNF-α抗体或者可溶性TNF-α受体已经显示抑制炎性疾病。不幸的是，与这种治疗相关联 的副作用可能通过没有充分了解的机制导致感染（例如肺结核）和其他不良反应的风险增 加。类似的，针对膜结合分子样CD40的抗体治疗具有抑制炎症和移植物-宿主病的特性。 虽然一直在研宄用于预防炎性疾病的其他靶向宿主细胞治疗，但是仍然没有能阻止所有炎 性疾病的已知单独表面或分泌因子。因此，需要开发采用新鉴定的特异性宿主细胞目标的 治疗。
[0004] 在进入粘膜之后不久，各种不同的病原体或毒素激活巨噬细胞、嗜中性粒细胞、T 细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞、潘氏和隐窝细胞以及上皮细胞。趋化因子是耐受水解的、 促进新血管形成或内皮细胞生长抑制、诱导细胞骨架重排、使淋巴细胞激活或者失活以及 通过与G蛋白偶联受体相互作用而介导趋药性的小的细胞因子样蛋白的超级家族。趋化因 子可以介导表达它们的受体的宿主细胞的迀移和生长。负责趋化因子的这些功能的细胞机 制一般是但是不是全部是Ca 2+流依赖性的并且是百日咳毒素敏感的。然而，趋化因子介导 事件的准确机制仍未清楚。
【发明内容】
[0005] 本申请的一个方面涉及分离的抗-CXCL9、抗-CXCL10、抗-CXCL11、抗-CXCL13、 抗-CXCR3或抗-CXCR5试剂，所述试剂对炎性疾病具有结合亲和力，Kd值范围为0.0 lpM至 ΙμΜ。在一个实施方式中，本申请涉及一种用于检测受试者中的炎性疾病的方法。所述方 法包括如下步骤：(a)检测获自所述受试者的生物样品中的一种或者多种炎性疾病标记物 的表达水平；和（b)比较所述生物样品中的所述一种或者多种炎性疾病标记物的表达水平 和所述一种或者多种炎性疾病标记物的正常表达水平，其中，高于所述多个炎性疾病标记 物中的一种或者多种在所述生物样品中的正常表达水平指示所述受试者中存在炎性疾病， 其中所述多个炎性疾病标记物的所述正常表达水平是预定值，并且其中所述一种或者多种 炎性疾病标记物包括选自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5组成的组中的 一种或者多种标记物。
[0006] 本申请的另一个方面涉及一种用于监测受试者中炎性疾病治疗过程的方法。所 述方法包括如下步骤：测定在治疗过程中或者治疗之后获自所述受试者的一种或者多种生 物样品中的一种或者多种炎性疾病标记物的表达水平；和比较所述一种或者多种生物样 品中的所述一种或者多种炎性疾病标记物的表达水平和所述一种或者多种炎性疾病标记 物的对照表达水平，其中，所述一种或者多种炎性疾病标记物的所述对照表达水平是预定 参考水平或者所述受试者中的所述一种或者多种炎性疾病标记物的治疗前水平，其中，如 果在所述治疗过程中或者所述治疗之后获自所述受试者的所述一种或者多种生物样品中 的所述一种或者多种炎性疾病标记物的表达水平类似于或者低于所述对照表达水平，那么 认为所述治疗是有效的，其中，所述一种或者多种炎症标记物包括选自由CXCL9、CXCL10、 CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5组成的组中的一种或者多种炎性疾病标记物。
[0007] 本申请的另一个方面涉及一种用于检测受试者中的炎性疾病的试剂盒。所述试剂 盒包括用于测定选自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5组成的组中的一种 或者多种炎性疾病标记物的表达的试剂；用于测定生物样品中的选自由致轻素、肿瘤坏死 因子 a (TNFa)、干扰素 -γ (IF-γ)、白介素 -Ia (IL-Ια )、IL_10、IL-6、IL-12、IL_17 和 IL-23组成的组中的一种或者多种炎性疾病标记物的表达的试剂；和关于如何使用所述试 剂的说明书。
【附图说明】
[0008] 图1显示了 IFN-γ，IP-10，MIG，I-TAC和CXCR3mRNA在小鼠结肠炎过程中的表达。
[0009] 图2显示了通过过继性转移而接受⑶45RBHI或CXCR3 +⑶4+T细胞的TCR β X δ +小 鼠中的IBD的组织学分析。
[0010] 图3显示了 IL-10+小鼠的结肠炎的发展和SAA水平。大于200 μ g/ml的SAA浓 度与第〇周无症状性结肠炎的发作相关联。
[0011] 图4显示了 IL-10+小鼠的体重变化。
[0012] 图5显示了血清IL-6和SAA水平与小鼠结肠炎的关联。
[0013] 图6显示了 IL-10+小鼠中的总的粪便和血清Ab (抗体）水平。
[0014] 图 7 显示 了患有 IBD 的 IL-10+小鼠中的血清 IL-12, IFN-γ，IL-2, TNF-a， IL-I a 和 IL-I β 水平。
[0015] 图8显示了由IL-10+小鼠所呈现的结肠炎的组织学特性。
[0016] 图9显示了抗-CXCLlO抗体消除了严重结肠炎。
[0017] 图10显示了粘膜组织在严重结肠炎过程中的Thl细胞因子、CXCLlO和CXCR3mRNA 表达。
[0018] 图11显示了严重结肠炎进展过程中血清中的Thl和炎性细胞因子水平。
[0019] 图12显示了抗-CXCLlO抗体对结肠炎病理学的影响。
[0020] 图13显示了 CD患者的结肠中的CXCL9、CXCL10、CXCLll和TNF- a的组织学和免 疫荧光定位。
[0021] 图14显示了自发性结肠炎过程中IL-10+小鼠中的副结核杆菌鸟结核分枝杆菌 亚种（M.avium subsp.paratuberculosis(MAP))特异性血清 Ab 反应。
[0022] 图15显示了使用副结核杆菌鸟结核分枝杆菌亚种（MAP)挑战的IL-10+小鼠中 的组织学特性。
[0023] 图16显示了 MAP挑战之后IL-10+小鼠的体重变化
[0024] 图17显示了 MAP挑战之后IL-10+小鼠的血清细胞因子水平。
[0025] 图18显示了来自IL-10+小鼠的CD4+T细胞的抗-肽#25Ag(来自MPT59)诱导的 增殖和IL-2生成。
[0026] 图19显示了 IBD患者中的血清CXCR3配体和分枝杆菌特异性Ab反应。
[0027] 图20显示了分枝杆菌挑战后IL-10+小鼠和IBD患者中的SAA水平变化
[0028] 图21显示了使用分枝杆菌挑战的IL-IO+小鼠的肠组织学特性。
[0029] 图22显示了 IC患者中的血清CXCL9、CXCLlO和CXCLll浓度。
[0030] 图23显示了 CYP诱导膀胱炎之后的组织学变化。
[0031] 图 24 显示了 CYP 处理的小鼠中的 CXCR3、CXCL9、CXCLlO 和 CXCLllmRNA 表达。
[0032] 图25显示了活动性⑶过程中的上调的CXCLlO表达。
[0033] 图26显示了活动性⑶过程中CXCLll和CXCL9的上调表达。
[0034] 图27显示了⑶患者中的血清淀粉样蛋白A (SAA)和IL-6的上调的血清浓度。
[0035] 图28显不了⑶过程中血清IL-12p40和IFN-γ水平相关。
[0036] 图29显示了活动性⑶过程中炎性细胞因子水平。
[0037] 图30显示了正常和具有高血清CXCR3配体浓度的⑶患者中的结肠炎的组织学特 性。
[0038] 图31显示了通过组织学检查得到的正常和⑶患者的结肠中的CXCR3配体和 TNFa表达。
【具体实施方式】
[0039] 提供如下详细说明以使本领域技术人员能够实施和使用本申请。为了解释目的， 给出具体术语以充分地理解本申请。但是，本领域技术人员应当清楚的是，实施本申请不需 要这些具体细节。具体申请的