一种虎皮楠生物碱的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种虎皮楠生物碱的制备方法，属于天然药物技术领域。
【背景技术】
[0002]虎皮楠属于虎皮楠属植物。据中华本草记载，植物虎皮楠在我国传统医药中有一定的药用价值，其味苦、涩，性凉；有清热解毒、活血化瘀之功效；主治感冒发热、扁桃体炎、脾肝肿大、毒蛇咬伤、骨折等疾病。虎皮楠属植物中特有的一类化学成分是虎皮楠生物碱，其奇特多变、复杂多样，且受气候和环境的影响很大的多环结构骨架引起了国际上众多化学家和生物学家对其进行系统、深入的研宄。研宄结果表明，虎皮楠生物碱多有抗鼠淋巴瘤细胞株L1210和人鼻咽喉癌KB细胞活性的功效，具有重点研宄的价值。
[0003]目前，对虎皮楠生物碱的研宄主要集中在其化学成分和药理作用上，而对其的提取方法研宄较少。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供了一种工艺简单、回收率高、纯度高的提取分离虎皮楠生物碱的方法。
[0005]本发明包括以下步骤:
将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶进行发酵2~4天，将发酵后的原料加入5-7倍的70~80%的乙醇溶液，置于频率为20KHz的超声装置中于65~75°C的条件下提取3~5h，过滤，滤液减压浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂柱，采用体积比为25:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1000rpm，流速为2_3mL/min，收集目标流分，回收试剂，甲醇结晶即可得到产品。
[0006]所述的生物酶为质量比2:1的纤维素酶与半纤维素酶，其酶的活性为50~60U/mg。
[0007]所述的大孔吸附树脂类型为D-101、AB-8、HPD-100中的任意一种。
[0008]所述的氯仿-甲醇-水体积比为10:1:4。
[0009]本发明具有如下优点:(I)利用复合酶采用自然发酵法，有效地破坏了植物的细胞结构，减少了细胞内成分溶出的屏障；(2)同时充分利用超声的空化效应、热效应和机械振动等作用，加速了有效成分进入溶剂，提高提取率，缩短提取时间，简化了操作步骤；(3)采用高效逆流色谱分离纯化产品，污染少，纯度高。
[0010]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0011]【具体实施方式】:
实施例1:
将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶(质量比2:1的纤维素酶与半纤维素酶，其酶的活性为50U/mg)进行发酵2天，将发酵后的原料加入5倍的70%的乙醇溶液，置于频率为20KHz的超声装置中于65°C的条件下提取3h，过滤，滤液减压浓缩，浓缩液上AB-8大孔吸附树脂柱，采用体积比为25:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，以体积比为10:1:4氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800rpm，流速为2mL/min，收集目标流分，回收试剂，甲醇结晶即可得到产品，纯度为97.34%ο
[0012]实施例2:
将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶(质量比比2:1的纤维素酶与半纤维素酶，其酶的活性为60U/mg)进行发酵4天，将发酵后的原料加入7倍的80%的乙醇溶液，置于频率为20KHz的超声装置中于70°C的条件下提取4h，过滤，滤液减压浓缩，浓缩液上D-101大孔吸附树脂柱，采用体积比为25:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，以体积比为10:1:4氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速lOOOrpm，流速为2mL/min，收集目标流分，回收试剂，甲醇结晶即可得到产品，纯度为98.89%ο
[0013]实施例3:
将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶(质量比比2:1的纤维素酶与半纤维素酶，其酶的活性为60U/mg)进行发酵3天，将发酵后的原料加入6倍的75%的乙醇溶液，置于频率为20KHz的超声装置中于75°C的条件下提取5h，过滤，滤液减压浓缩，浓缩液上HPD-100大孔吸附树脂柱，采用体积比为25:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，以体积比为10:1:4氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速lOOOrpm，流速为3mL/min，收集目标流分，回收试剂，甲醇结晶即可得到产品，纯度为98.17%。
【主权项】
1.一种虎皮楠生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶进行发酵2~4天，将发酵后的原料加入5~7倍的70~80%的乙醇溶液，置于频率为20KHz的超声装置中于65~75°C的条件下提取3~5h，过滤，滤液减压浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂柱，采用体积比为25:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1000rpm，流速为2_3mL/min，收集目标流分，回收试剂，甲醇结晶即可得到产品O2.根据权利要求1所述的一种虎皮楠生物碱的制备方法，其特征在于，所述的生物酶为质量比2:1的纤维素酶与半纤维素酶，其酶的活性为50~60U/mg。3.根据权利要求1所述的一种虎皮楠生物碱的制备方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂类型为D-1O1、AB-8、HPD-100中的任意一种。4.根据权利要求1所述的一种虎皮楠生物碱的制备方法，其特征在于，所述的氯仿-甲醇-水体积比为10:1:4。
【专利摘要】本发明公开了一种虎皮楠生物碱的制备方法，其处理步骤包括：将狭叶虎皮楠茎粉碎，过40目筛，采用生物酶进行发酵2~4天，将发酵后的原料加入5~7倍的70~80%的乙醇溶液，于超声装置中提取3~5h，过滤，减压浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂柱，氯仿-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高效逆流色谱分离纯化，即可得到虎皮楠生物碱。本发明具有工艺简单，回收率高，污染少，产品纯度高等优点，适合规模化生产。
【IPC分类】A61K36/73
【公开号】CN104906216
【申请号】CN201510271043
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月26日