一种夏天无生物碱单体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种夏天无生物碱单体的制备方法。
【背景技术】
[0002] 夏天无为S粟科紫堇属延胡索亚属植物伏生紫堇Ccxrydalis decumbens Crhunb.) Pers.的块茎。又名一粒金丹、野延胡、洞里神仙、伏地延胡索、落水珠。早在清代赵学敏《本 草纲目拾遗》中便记载了本药（一粒金丹）；"一名洞里神仙，又名野延胡，江南人呼飞来牡 丹"。
[0003] 夏天无植物生长于丘陵或低山山坡、草地，喜生于气候温暖潮湿、向阳、排水良好、 ±层深厚的沙质地。主产于江西、湖南、福建、浙江、安徽等省，W江西产质量为佳。夏天无 是一种常用民间中药，具有镇痛、消炎的作用，用于治疗胃痛、癌痛、坐骨神经痛、风湿性关 节炎、小儿麻瘦后遗症。近代药理研究发现夏天无在必脑血管疾病方面显示出较好的疗效， 如治疗老年性痴呆、抗必律失常、抑制血小板聚集等。
[0004] 夏天无的活性成分是生物碱。《中国药典》2010版一部也将生物碱作为夏天无的 定性和定量指标。
[0005] 夏天无总生物碱主要包括原阿片碱、延胡索己素、夏无宁碱、比枯枯灵、盐酸己马 汀。原阿片碱是一种异哇晰类生物碱，具有必血管方面的活性如降低高血压、抗必率失常； 还具有抗血小板聚集、抗免疫、抗氧化损伤等多种药理活性。延胡索己素同样也具有抗肿 瘤、抗血小板聚集、抗必律失常、镇痛等多种药理作用。夏天无生物碱众多的药理活性引起 了广泛的关注，因此它们的分离纯化方法不仅是进一步研究药理作用的需要，同时也为临 床研究提供物质基础。纵观现有的夏天无生物碱单体分离纯化方法，大多采用柱色谱、结晶 W及制备液相的方法，工艺繁琐、回收率低、成本较高等。
[0006] FCPC技术即高速离必分配色谱，它利用待分离物质在互不相溶的两相溶液中的分 配系数不同，经过类似于连续萃取的过程，对物质进行分离。它与服CCC稍有不同，HSCCC属 于流体动力平衡系统，由聚四氣己帰软管绕制成的色谱柱除绕离必轴旋转外，还围绕自轴 旋转产生变化的重力场；FCPC属于流体静力平衡系统，色谱柱由一系列刻在圆盘上的腔室 组成，通过单轴旋转产生恒定的离必力场从而实现对固定相的保留。20世纪90年代，Ito发 明了抑-区带精制逆流色谱，该方法十分适用于分离有机酸W及有机碱类化合物。此方法 同样也适用于FCPC中，此方法有W下特点；溶质被高度浓缩在矩形峰中，且不同矩形峰之 间重叠较少，分离的基础是基于不同溶质具有不同的疏水性W及地a值。与传统的逆流色 谱方法相比较，pH-区带精制逆流色谱具有许多重要的优势，如大大提高了样品的上样量， 为普通方法的10倍W上；大组分高度浓缩，微量组分的高度浓缩。该方法目前己经被广泛 的应用于分离天然产物W及人工合成的物质，尤其是生物碱与有机酸。
【发明内容】
[0007] 本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中夏天无生物碱单体的制备方 法成本较高、分离效率低、回收率低、产品纯度低、制备量小等缺点而提供了一种夏天无生 物碱单体的制备方法，该制备方法能够大规模地制备各生物碱单体，制备最高能够达到克 级量；且制得的单体纯度高，达98%W上；成本低、分离效率高、回收率高、产品纯度高、制 备量较大。
[0008] 本发明提供了一种夏天无生物碱单体的制备方法，其包括W下步骤：采用高速离 必分配色谱法对夏天无提取物进行分离纯化，即得夏天无生物碱单体；所述的夏天无生物 碱单体为原阿片碱、延胡索己素或夏无宁碱；
[0009] 其中，所述的高速离必分配色谱法使用的固定相和流动相由下述方法制得：将石 油離、己酸己醋、己醇和水混合均匀，静置分层后，将上相、下相溶液分开，将上相溶液与Η 己胺混合均匀即得固定相，将下相溶液与盐酸混合均匀即得流动相；所述的石油離、己酸己 醋、己醇和水的体积比为（1~5) :(1~10) :(1~5) :(1~10);所述的固定相中Η己胺的 摩尔浓度为5ηΜ~25ηΜ;所述的流动相中肥1的摩尔浓度为5ηΜ~25ηΜ。
[0010] 本发明中，所述的夏天无提取物可为本领域常规使用的夏天无提取物；所述的夏 天无提取物中夏天无总生物碱的质量百分含量为50%~99%，所述的质量百分含量是指 夏天无提取物中总生物碱的质量占夏天无提取物质量的百分比。夏天无总生物碱中几种 主要生物碱的组成比例如下：原阿片碱15%~35%、延胡索己素10%~25%、比枯枯灵 5%~15%、盐酸己马汀0.05%~0.2%、紫堇尔明5%~15%，夏无宁碱15%~30%、其 他生物碱及提取物10 %~25 % ;所述的夏天无提取物优选0. 5g~4g，进一步优选0. 8g~ 1. 6g。所述的夏天无提取物优选夏天无超临界提取物；所述的夏天无超临界提取物按照 CN101058576A记载的夏天无的超临界提取方法制备（见本申请参考实施例1)。
[0011] 本发明中，所述的石油離、己酸己醋、己醇和水的体积比优选（3~w;7 :(3~w: 7。
[0012] 本发明中，所述的固定相中Η己胺的摩尔浓度优选5nM~20nM，进一步优选lOnM。
[0013] 本发明中，所述的盐酸优选浓盐酸。
[0014] 本发明中，所述的流动相中肥1的摩尔浓度优选5nM~lOnM。
[0015] 本发明中，在所述的固定相和流动相的制备过程中，所述静置分层的时间可为本 领域常规的静置分层时间，优选2~12h，进一步优选4~12h。
[0016] 本发明中，所述的高速离必分配色谱法在高速离必分配色谱仪中进行；所述的高 速离必分配色谱仪为本领域常规的高速离必分配色谱仪，优选法国RousseletRobatel Kromaton公司生产的型号为FCPCA200的高速离必分配色谱仪。所述的高速离必分配色谱 仪的使用参数条件可为本领域常规的参数条件。
[0017] 本发明中，所述的高速离必分配色谱法较佳地包括如下步骤：
[0018] (1)将夏天无提取物溶解于上相溶液或下相溶液中，得进样溶液；
[0019] (2)用固定相填充高速离必分配色谱仪的转鼓，待转鼓内充满固定相后，调节固定 相流速，并将所述的进样溶液进样，在1000巧m~1600巧m转速下泉入流动相，收集相应的 流出的流动相。
[0020] 步骤（1)中，所述的进样液中所述的夏天无提取物与所述的固定相或流动相的质 量体积比优选0. 1~0. 8g/mL，进一步优选0. 32g/mL。
[0021] 步骤（2)中，转鼓内充满固定相之前，固定相流速优选15mL/min。
[0022] 步骤（2)中，所述的充满为有固定相流出转鼓。
[0023] 步骤（2)中，转鼓内充满固定相之后，固定相流速优选2~6mL/min，进一步优选 4mL/min。
[0024] 步骤（2)中，所述的进样的流速、流动相流速，与转鼓内充满固定相之后的固定相 流速相同。
[00幼步骤似中，所述的转速优选1200巧m/min。
[0026] 步骤（2)中，所述的收集根据FCPC谱图确定，FCPC采用紫外线监测，所述的紫外 线的波长为282皿。
[0027] 本发明中所用试剂和原料均市售可得。
[0028] 本发明的积极进步效果在于：本发明能够大规模地制备各生物碱单体，制备最高 能够达到克级量；且制得的单体纯度高，达98%W上；分离效率高、回收率高、产品纯度高、 制备量较大。
【附图说明】
[0029] 图1为夏天无超临界提取物FCPC图。
[0030] 图2为夏天无超临界提取物HPLC图。
【具体实施方式】
[0031] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0032] 仪器；超临界萃取仪HA121-50-01-C(江苏南通华安超临界有限公司），Agilent HP1260型高效液相色谱仪、四元梯度泉、Hpcheme色谱工作站。MSU224S-100-DUZ天 平（Sartorius);高速离必分配色谱（FCPCHKromaton,RousseletRobatel);SHIMDZU LC-IOAD泉；皿-21-2紫外检测器（上海嘉鹏科技有限公司）；SHIMDZU-7725i进样器。
[0033] 参考实施例1夏天无超临界提取物的制备
[0034] 取夏天无的干燥块茎，粉碎成20目~100目的药材粉末；取药材粉末一定量，加入 氨水，拌至P册~10;将药材投入萃取蓋中，在萃取温度4(TC~75°C，解析蓋I温度3(TC~ 7(TC，解析蓋II温度3(TC~7(TC时，萃取压力30MPa~50MPa下萃取，萃取过程中连续加入 己醇作为夹带剂，加入流速为260mLA;当萃取2~3小时后，停止萃取，从解析蓋I得到总 生物碱提取物，即为夏天无总生物碱提取物。W下所有实例均采用同一批样品进行，其