一种甘草酸的生物提取方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种甘草酸的生物提取方法，药物化工领域。
【背景技术】
[0002]甘草(Glycyrrhiza)为豆科属多年生植物，种类较多，主要分布于我国西北、华北、华中和东北地区，具有抗寒、抗盐碱、耐热、耐旱等优良特性，生态适应性强，生命力旺盛，系干旱、半干旱地区重要的植物资源之一。甘草被我国认定为食药两用植物，目前作为调味剂、增稠剂、辅助剂、添加剂、防腐剂、抗氧化剂等被广泛用于食品、饲料、化妆品和日用化工等产业，但其最重要的用途是在医药领域。中医药有“十方九草”之说，即大部分中药复方的配伍都离不开甘草，被誉为中药的“国佬”；其主要化学成分甘草酸及其药理活性成分甘草次酸，更是被大量用于中成药和现代中药中。此外，甘草以其独特而显著的药学作用，也受到了其它国家特别是发达国家的极大关注，成为和银杏齐名的被西方国家进行了较为彻底研究和开发的植物药。
[0003]目前采用的水提法和溶剂法提取甘草酸是较为成熟的工艺技术，提取及精制的生产方法尚比较落后。这些常规方法存在着明显的不足之处，如使用有机溶剂，易造成环境污染，且产品中杂质多，品质不好。在水提法和加热回流法提取过程中，由于操作温度高，甘草中的甘草酸易发生分解；渗辘法和冷浸法提取过程中，虽然避免了高温带来的影响，但要达到较高的萃取效率需时间较长。新发展的技术如超声波提取、微波提取、高压提取和超临界萃取等方法，不但设备成本高，而且新工艺也尚不成熟。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题:针对目前传统提取甘草酸的方法，使用大量有机溶剂对环境产生污染，提取出的甘草酸产品纯度低，提取率低且成本高的问题，本发明提供了一种甘草酸的生物提取方法，本发明首先通过使用甘草颗粒与河道污泥等物质进行混合，再密封培养富集微生物，然后使用混合物进行栽培甘草，消耗混合物内的营养物质，对混合物内的微生物进行筛选，最后将成熟的甘草与混合物搅拌发酵，再使用乙醇溶液，对发酵物进行混合，静置，收集液体，再经过离心、纯化得到纯度达到95%以上的甘草酸。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)取花期甘草自然晾晒，待其含水量为10?15%时，将其放入粉碎机中粉碎成40?60目颗粒，再将颗粒物与河道污泥按照质量比1:5进行混合，放入培养池，使用质量分数为20?30%的氨水调节pH为7.5?8.0，然后分别向其中加入颗粒物质量8?10%的过磷酸钙及颗粒物质量4?8 %的沼气肥，搅拌均匀得混合物，密封培养池20?25天，保持温度为 18 ?25°C ；
(2)待上述密封结束后，按照每平方米混合物种植8?12株花蕾期的甘草，进行种植甘草，在种植过程中保持混合物含水量为10?15%，使用质量分数为10?15%的氨水保持土壤pH为7.5?8.0，光照强度为950?1100 μ mo I.m2.s S (3)待上述甘草成熟后，将甘草取出自然风干后，放入粉碎机中粉碎成100?120目颗粒物，之后将颗粒物放入培养池内与混合物混合均匀，再向其中加入颗粒物质量I?3%的磷酸氢二钾及颗粒物质量0.8?2%的磷酸二氢钾，然后密封搅拌发酵15?20天，保持温度为25?30°C ;
(4)待上述发酵结束后，将发酵物移入搅拌池中，向其中加入质量分数为60?70%的乙醇溶液淹没发酵物10?15cm，在转速为1500?2000r/min下，搅拌10?15h，再静置8?12h，收集上层液体；
(5)将上述所得的液体放入离心机中离心分离，取上清液放入陶瓷膜过滤器中进行过滤，收集过滤物，再将过滤液放入容器中，向其中加入质量分数为40?50%的氨水调节pH为7.5?8，然后对容器进行减压至1200?3000Pa，温度设定为60?70°C，搅拌5?8h后得浆状物，将其与过滤物混合均匀；
(6)待上述混合均匀后，向其中加入冰醋酸使混合物完全溶解，再向其中加入磷酸氢二钾等质量的甘草酸单铵盐晶种，在温度为30?35°C下，静置20?24h后，过滤得过滤物，使用冰醋酸洗涤2?3次，然后将过滤物进行减压干燥，即可。
[0006]本发明的有益效果是:
(1)本发明使用生物法进行提取，对环境无污染；
(2)本发明所提取出的甘草酸纯度达到95%以上，且提取率达到45?50%;
(3)本发明制作成本低，易于操作。
【具体实施方式】
[0007]取花期甘草自然晾晒，待其含水量为10?15%时，将其放入粉碎机中粉碎成40?60目颗粒，再将颗粒物与河道污泥按照质量比1:5进行混合，放入培养池，使用质量分数为20?30%的氨水调节pH为7.5?8.0，然后分别向其中加入颗粒物质量8?10%的过磷酸钙及颗粒物质量4?8 %的沼气肥，搅拌均匀得混合物，密封培养池20?25天，保持温度为18?25°C ;待上述密封结束后，按照每平方米混合物种植8?12株花蕾期的甘草，进行种植甘草，在种植过程中保持混合物含水量为10?15%，使用质量分数为10?15%的氨水保持土壤pH为7.5?8.0，光照强度为950?1100 μ mol -m2-s %待上述甘草成熟后，将甘草取出自然风干后，放入粉碎机中粉碎成100?120目颗粒物，之后将颗粒物放入培养池内与混合物混合均匀，再向其中加入颗粒物质量I?3%的磷酸氢二钾及颗粒物质量0.8?2%的磷酸二氢钾，然后密封搅拌发酵15?20天，保持温度为25?30°C ;待上述发酵结束后，将发酵物移入搅拌池中，向其中加入质量分数为60?70 %的乙醇溶液淹没发酵物10?15cm，在转速为1500?2000r/min下，搅拌10?15h，再静置8?12h，收集上层液体；将上述所得的液体放入离心机中离心分离，取上清液放入陶瓷膜过滤器中进行过滤，收集过滤物，再将过滤液放入容器中，向其中加入质量分数为40?50%的氨水调节pH为7.5?8，然后对容器进行减压至1200?3000Pa，温度设定为60?70°C，搅拌5?8h后得浆状物，将其与过滤物混合均匀；待上述混合均匀后，向其中加入冰醋酸使混合物完全溶解，在向其中加入磷酸氢二钾等质量的甘草酸单铵盐晶种，在温度为30?35°C下，静置20?24h后，过滤得过滤物，使用冰醋酸洗涤2?3次，然后将过滤物进行减压干燥，即可。
[0008]实例I 取4kg花期甘草自然晾晒，待其含水量为10%时，将其放入粉碎机中粉碎成40目颗粒，再将颗粒物与河道污泥按照质量比1:5进行混合，放入培养池，使用质量分数为20%的氨水调节PH为7.5，然后分别向其中加入0.32kg过磷酸钙及0.16kg沼气肥，搅拌均匀得混合物，密封培养池20天，保持温度为18°C ;待上述密封结束后，按照每平方米混合物种植8株花蕾期的甘草，进行种植甘草，在种植过程中保持混合物含水量为10%，使用质量分数为10%的氨水保持土壤pH为7.5，光照强度为950 μ mol -1n2-S %待上述甘草成熟后，将甘草取出自然风干后，放入粉碎机中粉碎成100目颗粒物，之后将颗粒物放入培养池内与混合物混合均匀，再向其中加入0.08kg磷酸氢二钾及6.4g磷酸二氢钾，然后密封搅拌发酵15天，保持温度为25°C ;待上述发酵结束后，将发酵物移入搅拌池中，向其中加入质量分数为60%的乙醇溶液淹没发酵物10cm，在转速为15