从漏芦花中提取总生物碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种从漏芦花中提取总生物碱的超声提 取方法。
【背景技术】
[0002] 漏芦花，为一种常见的中蒙药，别名为祁州漏芦（Rhaponticum unif lorum(L.) DC.)干燥花，属于菊科管状花亚科祁州漏芦属植物。漏芦花作为常用蒙药，具有止刺痛、清 热、解毒、解表等功效。
[0003] 总生物碱类物质是漏芦花的主要药用成分。为此，研究漏芦花中总生物碱的提取、 分离、纯化方法对后续研究其生物活性具有重要意义。
[0004] 要从漏芦花中充分地获得总生物碱，应当尽可能地破坏漏芦花细胞结构。在提取 阶段采用超声波法提取总生物碱类物质，是一种创新，其原理是超声波可在液体中产生"空 穴作用"，而"空穴作用"产生的冲击波和射流可以破坏植物细胞和细胞膜结构，从而增加细 胞内容物通过细胞膜的穿透能力，有助于总生物碱类化合物的释放与溶出，超声波使提取 液不断震荡，有助于溶质扩散，同时超声波的热效应对原料有水浴作用。目前，在提取阶段 采用超声波从漏芦花中提取总生物碱的研究尚未报道。
[0005] 目前，多采用正交试验设计对中蒙药中主要成分进行提取工艺优化，响应面优化 与其比较具有明显优势，可以实现应用较少的试验数据在给定的范围内找到因素与响应值 之间明确的函数表达式，得出最佳因素组合和响应值的最优值。
[0006] 因此，本发明以漏芦花中总生物碱含量为指标，采用响应面优化漏芦花总生物碱 的提取工艺，为其进一步研究提供了科学的理论基础。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了一种从漏芦花中提取总生物碱的超声提取方法，以漏芦花为原料， 利用超声波提取，可高得率地获得较高含量的漏芦花总生物碱。
[0008] 本发明提供了一种从漏芦花中提取总生物碱的超声提取方法，包括：
[0009] 称取漏芦花，加入石油醚，50 °C水浴回流2h，取药渣，加入1 %酸性乙醇，静置 30min，在一定超声温度下超声提取一定时间，进行超声提取，抽滤，将滤液浓缩，即得。
[0010] 作为一种【具体实施方式】，本发明提供了一种从漏芦花中提取总生物碱的超声提取 方法，包括：
[0011] 称取漏芦花〇. 5g，按l:10g/mL比例加入石油醚，50°C水浴回流2h，取药渣，加入 一定量1 %酸性乙醇，静置30min，在一定超声温度下超声提取一定时间，进行超声提取，抽 滤，将滤液浓缩至25mL，即得。
[0012] 优选地，所述的超声温度在20-60 °C，优选为41°C。
[0013] 优选地，超声时间为20-60分钟，优选为40分钟。
[0014] 优选地，超声功率为120-200W，优选为200W。
[0015] 优选地，料液比为l:20(g/mL)到l:40(g/mL)之间，更优选为l:28(g/mL)。"料液 比"，指固态的"料"的质量与作为浸提液的"液"的体积的比。"料"的单位用g、mg，"液"的 单位用L、mL，于是"料液比"的单位有g/L、mg/L、g/mL、mg/mL等。本发明所采用的单位为 g/mL〇
[0016] 超声波作为一种物理能对漏芦花进行处理，更有利于漏芦花中总生物碱的提取， 一方面，能通过空化作用产生极大的压力，造成被破碎物的细胞壁甚至整个生物体破裂而 使胞内物质释放、扩散或溶解出来；另一方面，适宜强度的超声波能够使总生物碱分子的构 象发生正向转化，从而提高总生物碱的活性。
[0017] 在超声温度一定时，随着超声功率的增大，总生物喊提取率呈递增趋势，这是由于 超声功率的增大，有助于超声波破坏细胞结构，进而提高总生物碱提取率。在超声功率一定 时，随着超声温度增大，总生物碱提取率呈现先增加后减少趋势，其原因是，温度升高加快 分子运动速度，提取率增高，但温度过高，破坏生物碱结构，进而导致总生物碱提取率相对 下降。综上所述，在超声温度与超声功率相互作用下，总生物碱提取率呈先增大后减少的趋 势。
[0018] 总生物碱提取率随着料液比和超声温度的增加呈现先升后降的趋势。料液比一定 时，在高温区和低温区的生物碱提取率较低，这主要是因为温度的升高使得分子解附和扩 散运动速度加快，从而提高了生物碱析出速度和提取率，而温度过高会破坏生物碱结构，降 低提取率。料液比的增大，使得生物碱浓度降低，更容易从细胞中溶出。
[0019] 总生物碱提取率随超声时间的延长和超声温度的升高而增大，根据超声波作用原 理，超声时间的延长有利于超声波充分破坏漏芦花细胞壁，从而使生物碱得以充分溶出，同 时超声温度的升高使得分子解附和扩散运动速度加快，从而提高了总生物碱提取率。因此 适当地延长时间和提高温度有助于提高生物碱的提取率。但超声温度过高、超声时间过长 导致生物碱提取率下降，这是由于时间长、温度高使生物碱分解或破坏了生物碱结构。
[0020] 在料液比不变时，生物碱提取率随功率增大而逐渐增大，这是由于超声功率的增 大，有助于超声波破坏细胞结构，进而提高生物碱提取率。在功率不变时，生物碱提取率随 料液比增大，呈抛物线形状，料液比的增大，使得生物碱浓度降低，更容易从细胞中溶出。
[0021] 在超声时间不变时，生物碱提取率随超声功率增大而逐渐增大，这是由于超声功 率的增大，有助于超声波破坏细胞结构，进而提高生物碱提取率。在超声功率不变时，生物 碱提取率随超声时间增大，呈抛物线形状。这是因为超声时间的延长有利于超声波充分破 坏漏芦花细胞壁，从而使生物碱得以充分溶出。
[0022] 在超声时间一定时，总生物碱提取率随料液比增加而升高，在料液比一定时，生物 碱提取率随超声时间延长先增加后减小。主要原因是超声波可以使得漏芦花的细胞壁破 碎，从而使生物碱从细胞中析出，而超声时间过长会破坏生物碱结构，进而影响提取率。
[0023] 本发明利用超声对漏芦花中的总生物碱进行了提取，首先通过石油醚进行脱脂脱 色脱蜡，将漏芦花细胞中总生物碱以乙醇为溶剂进行提取，协同超声波处理破碎的漏芦花 细胞，可高效获得含总生物碱的漏芦花内容物提取液；再通过抽滤处理以除去提取液中的 药渣后，即可高得率地获得漏芦花总生物碱。相比传统提取法，该法具有使用溶剂少、工艺 简便、条件温和、易于控制、安全可靠等特点；该法提取效率更高，操作时间短，提取得率较 尚。
【附图说明】
[0024] 图1 :对照品溶液和供试品溶液的吸收光谱曲线
[0025] 图2 :盐酸小檗碱标准曲线
[0026] 图3 :超声温度对漏芦花中总生物碱提取效果的影响
[0027] 图4 :超声功率对漏芦花中总生物碱提取效果的影响
[0028] 图5 :料液比对漏芦花中总生物碱提取效果的影响
[0029] 图6 :超声时间对漏芦花中总生物碱提取效果的影响
[0030] 图7 :超声温度（A)和超声功率⑶交互作用对总生物碱提取率影响的响应面（左 图）及等高线图（右图）
[0031] 图8 :超声温度㈧和料液比（C)交互作用对总生物碱提取率影响的响应面（左 图）及等高线图（右图）
[0032] 图9 :超声温度（A)和超声时间⑶交互作用对总生物碱提取率影响的响应面（左 图）及等高线图（右图）
[0033] 图10 :超声功率⑶和料液比（C)交互作用对总生物碱提取率影响的响应面（左 图）及等高线图（右图）
[0034] 图11 :超声功率（B)和超声时间（D)交互作用对总生物碱提取率影响的响应面 (左图）及等高线图（右图）
[0035] 图12 :料液比（C)和超声时间⑶交互作用对总生物碱提取率影响的响应面（左 图）及等高线图（右图）
【具体实施方式】
[0036] 下面对本发明的实施例进行描述：
[0037] 实施例1.从漏芦花中提取总生物碱的方法
[0038] I. 1实验材料准备
[0039] 漏芦花，采自内蒙古呼和浩特市大青山，经鉴定为菊科管状花亚科祁州漏芦属植 物的干燥花（Rhaponticum uniflorum(L.)DC·)] 〇
[0040] 1. 2实验具体方法
[0041] 1. 2. 1缓冲溶液及显色剂的配制
[0042] pH = 5. 4缓冲溶液：取40m