一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域的药物分离方法，具体涉及一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法。
【背景技术】
[0002]萝芙木为夹竹桃科萝芙木属，是天然的药用植物，种类包括蛇根木、催吐萝芙木、中国萝芙木、云南萝芙木等130余种。萝芙木植物中约含200多种生物碱，可以用于治疗多种疾病。其中利血平生物碱具有显著降压作用。除利血平外，多种萝芙术生物碱如蛇根碱、利血胺、萝芙木甲素、马蹄碱、萝芙木亭碱等均具有类似的降压活性。因此，其生物总碱是制备抗血压药如“萝芙木片”、“降压灵”的原料，主要成分为利血平。
[0003]传统的对萝芙木生物总碱的提取是先通过酸醇溶液浸提，将滤液减压浓缩得浸膏，酸化去沉淀，上清液氨化得沉淀，最后用有机溶剂如氯仿或丙酮多次溶解干燥所得。因浸提液中含有果胶、蛋白质、色素等大分子杂质，故沉淀时间长，常需过夜。同时这些大分子形成胶体性质可吸附部分活性成分，往往因除杂废弃而降低了总生物碱提取率和活性成分利血平的含量。用来溶解或萃取所需的氯仿等有机溶剂量大，存在一定的安全毒性。总生物碱干燥后的制剂存在崩解缓慢，溶解与加工性能不佳。最终大量溶剂的回收利用需减压蒸馏，人工和能耗高。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题在于提供一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法。该方法是将萝芙木浸提液依次经过超滤除杂和纳滤浓缩后干燥所得。本发明改变其传统生物碱经碱沉和有机溶剂萃取等方式，提高了总生物碱和活效成分利血平的提取效率，且浸提液可以循环利用，降低有机溶剂用量。
[0005]为解决上述技术问题，本发明的技术解决方案是:
一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，包括如下步骤:
(1)萝芙木生物碱浸提液的获得:萝芙木根、茎或叶粉碎，常温下进行浸提，普通过滤得到萝芙木生物碱浸提液；
(2)超滤:运行膜工艺，将步骤(I)中的萝芙木生物碱浸提液使用超滤膜超滤，以去除原浸提液中大分子物质等杂质；保留超滤透过液用于后续纳滤浓缩，该超滤透过液简称超滤液；
(3)纳滤:运行膜工艺，将上述超滤液进行纳滤，得到高浓度的萝芙木总生物碱。
[0006]进一步包括步骤(4)总生物碱的制备:收集纳滤浓缩液，减压蒸馏回收乙醇等有机溶剂，干燥后得到总生物碱。
[0007]优选地，所述步骤(I)中，浸提所需浸提液采用酸性极性有机溶剂，即可以采用酸性乙醇、甲醇或丙酮，且萝芙木与浸提液料液比可以为Ig:15?20mL。
[0008]优选地，所述步骤(I)中，浸提方式采用超声辅助浸提和/或静态浸提，并可适当搅拌；超声辅助浸提时，先静置浸提20?30min，再超声辅助处理20?30min，再静置20?30min浸提；超声处理的功率为250-500W，频率为40kHz ;采用静态浸提时为12_24h。
[0009]优选地，所述步骤(I)中，酸性极性有机溶液为含体积比50%-80%的乙醇或甲醇或丙酮、含体积比0.2-1.0%的醋酸、柠檬酸、盐酸或硫酸，其余为水。优选70%乙醇和1.0%的醋酸组合。
[0010]优选地，所述步骤(I)中，在保持料液比不变的前提下，滤渣进一步重复浸提1-3次，首选重复浸提I次，合并滤液备用。
[0011]优选地，所述步骤(2)中，所述的超滤膜截留分子量为10000-60，000 Dalton ;首选为 10，000 Dalton。
[0012]优选地，所述步骤(2)中，工作压力为0.5-1.010^，首选为0.6-0.710^;工作温度为10-45 °C，首选为25-35 °C，也可选择室温或自然工作温度。
[0013]优选地，所述步骤(2)中，超滤膜材料为陶瓷膜或有机膜，有机膜具体包括聚偏氟乙烯(PVDF)、聚醚砜(PES)、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚砜(PS)、聚丙稀腈(PAN)、聚氯乙稀(PVC)中的一种。
[0014]优选地，所述步骤(3)中，纳滤膜选择截留分子量200_500Da的复合纳滤膜或无机材料纳滤膜.优选地，所述步骤(3)中，纳滤所用复合纳滤膜材质包括聚酰胺(PA)、磺化聚醚砜(SPES)、磺化聚砜(SPS)和聚乙烯醇(PVA)等有机膜中的一种。
[0015]优选地，所述步骤(3)中，纳滤中的膜组件运行压力为1.0-3.5 MPa，首选1.5-2.5MPa ;温度范围为10_45°C，首选为25_35°C ;纳滤浓缩2_8倍，首选浓缩倍数为2_3倍。
[0016]优选地，所述步骤(4)中，干燥方法采用真空干燥或喷雾干燥或烘箱干燥中一种；干燥过程避光，温度40-60 °C。
[0017]采用上述方案后，本发明具有如下有益效果:
1.在超滤阶段:分别对浸提液和超滤液的浊度、固形物、蛋白质和总生物碱中有效成分利血平进行分析。浊度采用分光光度法、固形物采用重量法、蛋白质采用考马斯亮蓝法、利血平成分分析采用高效液相色谱法(HPLC)法。HPLC法的具体条件为:C18反向色谱柱，流动相为甲醇-0.04% 二乙胺水(70:30);流速I m L/min ;柱温30 °C ;检测波长268 nm ;进样量 10_20yL0
[0018]与浸提液相比，超滤液浊度减少了 98.0%，固形物和蛋白质的去除率达到95%以上，色谱分析超滤液中活性成分利血平含量保持不变。
[0019]综上所述，超滤后的滤过液浊度大大减小，澄清度高，固形物、蛋白质等杂质去除率高。利血平的含量没有损失，总生物碱的品质得到提高。
[0020]2.纳滤浓缩工艺的效果:
纳滤浓缩条件在运行压力为1.0-3.5 M Pa，浓缩倍数为2-8倍，温度控制在10-45°C左右，进行纳滤浓缩。在纳滤过程中滤液有自然升温的现象，升温幅度与运行时间和运行压力相关，一般升高5-8°C。此升温幅度对生物碱成分性质无影响，反而会促进膜通量。结合膜通量和能耗，以浓缩2-5倍为宜，最佳浓缩倍数为2倍。如果膜通量过小或膜后压力改变过大，及时对膜进行清洗。
[0021]收集纳滤浓缩液和纳滤透析液样品，测定其生物碱中有效成分利血平含量(方法同上)。
[0022]经色谱检测发现纳滤透过液中利血平含量极低，浓缩液中利血平含量在95%以上。说明生物碱有效成分截留效果好。
[0023]由于生物碱成分保留在浓缩液中，纳滤透析液澄清透明，可以作浸提液循环利用。
[0024]3.采用本发明方法与常规制备方法比较:
常规制备总生物碱:步骤I得到的浸提液经减压回收乙醇，浸膏用蒸馏水稀释盐酸调pH 2.0-3.0，静置去沉淀，上层酸水氨水调pH 9.0-10.0，静置5_6小时或过夜后过滤留沉淀。沉淀用水洗至滤液为中性，用丙酮加热溶解并过滤，滤液减压回收丙酮，干燥得到总生物碱(降压灵)称量并与纳滤提取作比较，计算总生物碱得率，并比较在稀醋酸溶液中的溶解速度。
[0025]用膜法制备:三份粉碎的萝芙木药材一一萝芙木根粉1、萝芙木根粉2和云南萝芙木叶。分别测得总生物碱的得率在1.31%、1.12%、0.152%。
[0026]使用常规方法制备:总生物碱的得率为0.79%,0.55%、和0.074%，膜法制备总生物喊得率是常规方法1.5-2.0倍。
[0027]分析原因:萝芙木原浸提液中含有多糖、树胶、蛋白质和色素等大分子物质成分，对总生物碱提取易造成干扰，生物碱与大分子成分形成胶体状态，不易沉淀下来或被吸附，造成总生物碱的流失以及活性成分利血平含量降低。膜法提取经过超滤，多糖、蛋白质等大分子物质成分及其它杂质得到了去除，总生物碱完全保留下来，因而纳滤浓缩后总生物碱的产量得到大大提高。
[0028]常规方法制备得到的总生物碱为焦褐色，粘性大不易分散；膜法制备所得总生物碱为棕黄色，轻压即碎呈粉末状。用稀冰醋酸溶解，前者溶解缓慢需搅拌，且有少量胶状残留；后者在稀冰醋酸中溶解迅速。
[0029]总之，本发明所述方法改变了传统的生物碱“碱沉+有机溶剂萃取”分离得到生物碱的方式，利用膜技术达到除杂和浓缩富集制备总生物碱的目的，工艺简捷，不破坏和污染活性成分，萝芙木总生物碱和活性成分利血平的提取率高。纳滤透析液可以直接作浸提液循环利用，大大降低了能耗，减少溶剂用量和废水排放，提高了经济效益。
【附图说明】
[0030]图1是本发明的步骤流程图。
【具体实施方式】
[0031]下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步