专利名称：一种提取黄柏总生物碱的方法
技术领域：
本发明涉及一种植物提取方法，具体地说是一种提取黄柏总生物 碱的方法。
背景技术：
黄柏为云香科植物P/ze〃oofe"(ira" c/w'"e we Schneid.的干燥树皮， 俗称"川黄柏"。黄柏总生物碱是黄柏树皮经提取纯化而得到的总生物 碱，主要含有小檗碱(Berberine),其它生物碱有巴马汀(Palmatine)、 药根碱(Jatrorrhizine)、 黄柏碱(Hellodendrine)、 蝙蝠葛任碱 (Menisperine)、白瓜篓碱(Candicine)、木兰花碱(Magnoflorine)等。其 性寒、味苦，具有清热燥湿、泻火除蒸，解毒疗疮。用于热湿泻痢， 黄疸，带下，热淋，脚气，痿别，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒， 湿热瘙痒。
现代药理研究表明黄柏及其提取物具有抗病原微生物、免疫抑 制、抗溃疡、降压、抗心律失常、抗炎等作用。
黄柏总生物碱中各种生物碱的作用有如下报道
(1) 抗病原微生物作用磷酸小檗碱于体外对白色念珠菌及新型隐 球菌均有明显的抑制作用。小檗碱在体外及体内均有抗阿米巴作用。
(2) 抗炎作用小檗碱对角叉菜胶引起的大鼠石跖肿胀、慢性棉球 肉芽肿均有明显抑制作用。小檗碱、药根碱有显著抗炎作用。小檗碱 能抑制某些活性物质引起的小鼠毛细血管通透性增加。小檗碱抗炎作 用机制可能与抑制中性粒细胞趋化及产生活性氧的功能、抑制自由基 产生、降低PLA2活性、减少炎症组织中PGE2产生等多种因素有关。
(3) 对心血管功能的影响①小檗碱在一定计量范围内，对动物离 体心脏及整体心脏均显示出正性肌力作用，其作用于其增加心肌细胞 内C^+浓度有关。②给清醒大鼠注射小檗碱能引起心律先反射性地加快而后缓慢持久地下降。(D小檗碱加快房内及室内传导，但当剂量增 大时，对心脏传导系统有严重的抑制作用。④小檗碱能计量依赖性地 降低兔窦房结、房室结、细胞动作电位4项除极化速率，从而降低慢 反映细胞的自律性；小檗碱对快反映细胞也有延长动作电位时程和有 效不应期作用，但需要较高的浓度。⑤小檗碱具有显著的抗心律失常
的作用。小檗碱预防再灌心律失常作用可能与其对心肌Ca^内流油双 向调节作用有关。 降压作用给大鼠注射小檗碱能产生明显的降压 作用，小檗碱对on和(X2受体均有阻滞作用；药根碱对麻醉、清醒大 鼠以及肾性高血压大鼠也有显著的降压作用，其降压作用机制也与a 受体阻断引起外周血管阻力降低有关。⑦小檗碱对缺血性心肌具有保 护作用。⑧小檗碱可以显著提高mEC业的心脏保存效果。
(4) 抗缺血作用小檗碱能扩张麻醉小鼠脑膜血管，增加局部血流 量；明显加快血流速度，显示小檗碱对脑组织有一定的保护作用，小 檗碱的抗自由基既降低c-fos-mRNA水平的作用可能使其抗缺血作用 机制之一。
(5) 降血脂作用小檗碱能降低喂高胆固醇如即引起的小鼠血清胆 固醇水平升高。
(6) 抗血小板聚集作用小檗碱对ADP、花生四烯酸(AA)、胶原 II(COn)及钙离子载体(A23187 )诱发的家兔血小板聚集和ATP释放 均有不同程度的抑制作用。小檗碱能拮抗八23187诱导血小板聚集和释 放作用，提示其抗血小板作用与(^2+拮抗作用有关。
(7) 钙拮抗作用小檗碱有抑制电压控制的钙通道的作用。
(8) 降血糖作用小檗碱可降低四氧嘧啶糖尿病小鼠及自发性糖尿 病KK小鼠的血糖，改善KK小鼠的葡萄糖耐量，并能对抗外源葡萄 糖或肾上腺素引起的小鼠血糖升高。
(9) 抗溃疡及抗腹泻作用小檗碱抑制大鼠基础胃酸的分泌，胃酸 总排出量明显减少，对大鼠醋酸性胃溃疡有愈合作用。
4(抑抗癌作用在活体实验中，小檗碱与BC-NU连用也显示出细 胞毒性相加作用；另报盐酸小檗碱在一定程度上具有促进癌细胞分化 的作用。
(ll)对免疫功能的影响硫酸小檗碱可以增强小鼠非特意免疫反
应，抑制细胞和体液免疫功能。
肪其它作用小檗碱具有抗缺氧、益智等作用。 对于黄柏总生物碱的提取，目前采用的方法基本上有四种，有酸
提法、碱提法、醇提法、酸醇法，提取后的总生物碱釆用盐析的方法
纯化，总生物碱含量最高占提取物总量的31.87%，有效部位占提取
物的含量达不到50%。
发明内容
针对上述不足，本发明提供一种提取黄柏总生物碱的方法，以提 高总生物碱及其有效部位的含量。
为实现上述目的，本发明釆用乙醇提取法，再经大孔树脂分离纯 化，得到黄柏总生物碱提取物。
具体地说，包括如下步骤
(1) 将黄柏粉碎；
(2) 乙醇回流提取；
(3) 减压回收乙醇，并加水沉淀；
(4) 离心，上清液用苯乙烯型大孔树脂柱纯化；
(5) 浓缩，调节pH,冷藏放置过夜；
(6) 离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生物碱。
其中，步骤(l)优选为，将黄柏切成5mm丝或最粗粉；
其中，步骤(2)优选为用6~10倍量55~95%的乙醇回流提取
1~4次，每次提取l 2h，合并得粗提液；
其中，步骤(3)优选为，将粗提液减压浓缩至0.25 ~ 0.5 g生药
/mL,相对密度为1.005 ~ 1.030(60°C)，力口1 6倍水，冷藏放置过夜；其中步骤(4)中所用的大孔树脂为AB-8型大孔树脂，将离心 得到的上清液上柱，用5%~ 10%乙醇1 4柱体积冲洗，再用30%~ 95%乙醇18-30柱体积洗脱，得洗脱液；
其中，步骤(5)将洗脱液缩至浓度2.00 2.80g'mL",相对密度 为1.020 ~ L030(60。C)，调节pH至l 2，冷藏放置过夜。
黄柏为云香科植物P/2e〃06fe"dra" c/n'werae Schneid.的干燥树皮， 按《中国药典》(2005版)规定黄柏药材中小檗碱的含量以盐酸小檗 碱的含量计算不得低于3.0%。
釆用本发明方法提取，总生物碱提取率可达3~4%，在提取物中， 总生物碱可达55%以上。此外，根据所要得到总生物碱的含量要求， 通过调节洗脱液浓缩的浓度和pH值，可以得到不同含量的黄柏总生 物碱，满足不同医药产品的需求。
具体实施例方式
下面结合实施例进一步说明本发明。应当理解，这些实施例仅用 于说明本发明，而不能限制本发明的范围。
除非特别指明，实施例中所用的实验方法和试剂均为本领域所知 的常规方法或试剂，例如，减压干燥的方法，测定总生物碱含量的方 法。
实施例1
黄柏药材粉碎成最粗粉500 g，加生药6倍量的80%乙醇，回流 提取4次，每次提取2h，合并药液，回收乙醇，药液浓缩成0.33g 生药.mU1,加入药液体积的6倍量水沉淀，搅拌均匀，放入冰箱过 夜。药液离心，取上清液于AB-8大孔树脂柱，5。/。乙醇洗4BV,洗 脱液弃掉，50。/。乙醇洗20BV，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至 2.40g.mL/1,加HCl至pH为1，冷藏放置过夜，药液离心，沉淀减压 干燥，得黄柏总生物碱，含量测定黄柏总生物碱为68.79%,提取率 达3.26%。实施例2
黄柏药材破碎成5mm的细丝500g,加生药10倍量60%乙醇，回 流提取3次，每次提取1.5h，合并药液，回收乙醇，药液浓缩成0.25g 生药，mL-、加入药液体积的4倍量水沉淀，搅拌均匀，放入冰箱过 夜。药液离心，取上清液于AB-8大孔树脂柱，10。/。乙醇洗2BV，洗 脱液弃掉，95。/。乙醇洗18BV，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至 2.60g'mL",加HCl至pH为2，冷藏放置过夜，药液离心，沉淀减压 干燥，得黄柏总生物碱，含量测定黄柏总生物碱为65.40%，提取率 达3.48%。 实施例3
黄柏药材粉碎成最粗粉500g,加生药9倍量90%乙醇，回流提取 2次，每次提取lh,合并药液，回收乙醇,药液浓缩成0.4g生药'mL—1， 加入药液体积的3倍量水沉淀，搅拌均匀，放入冰箱过夜。药液离心， 取上清液于AB-8大孔树脂柱，10。/。乙醇洗3BV,洗脱液弃掉，60% 乙醇洗30BV,收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至2.00g'mL"，力口 HC1 至pH为l，冷藏放置过夜，药液离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生 物碱，含量测定黄柏总生物碱为58.23%，提取率达3.78%。 实施例4
黄柏药材粉碎成最粗粉500g，加生药7倍量75%乙醇，回流提取 4次，每次提取2.0h,合并药液，回收乙醇,药液浓缩成0.29g生药'mU1, 加入药液体积的5倍量水沉淀，搅拌均匀，放入冰箱过夜。药液离心， 取上清液于AB-8大孔树脂柱，5。/。乙醇洗2BV，洗脱液弃掉，40%乙 醇洗25BV，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至2.40g'm1/1,加HC1至 pH为2，冷藏放置过夜，药液离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生物 碱，含量测定黄柏总生物碱为72.19%，提取率达3.69%。 实施例5
黄柏药材粉碎成最粗粉500g，加生药8倍量55%乙醇，回流提取
73次，每次提取1.5h，合并药液，回收乙醇,药液浓缩成0.4g生药'mL", 加入药液体积的4倍量水沉淀，搅拌均匀，放入冰箱过夜。药液离心， 取上清液于AB-8大孔树脂柱，10。/。乙醇洗3BV,洗脱液弃掉，30% 乙醇洗28BV，收集洗脱液，回收乙醇，浓縮至2.80g'mU1，加HC1 至pH为l,冷藏放置过夜，药液离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生 物碱，含量测定黄柏总生物碱为60.05%，提取率达3.53%。
权利要求
1、一种提取黄柏总生物碱的方法，其包括步骤(1)将黄柏粉碎；(2)乙醇回流提取；(3)减压回收乙醇，并加水沉淀；(4)离心，上清液用苯乙烯型大孔树脂柱纯化。
2、 如权利要求l所述的方法，其进一步包括将步骤(4)得到的洗脱液浓缩，调节pH，冷藏放置过夜，再经离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生物碱。
3、 如权利要求l或2所述的方法，其中步骤(1)为将黄柏切成5mm丝或最粗粉。
4、 如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(2)为用6~10倍量55~95%的乙醇回流提取1~4次，每次提取l 2h，合并得提取液。
5、 如权利要求l或2所述的方法，其中步骤(3)为将步骤(2)得到的提取减压浓缩至0.25-0.5 g生药/mL,力口1 6倍量的水，冷藏放置过夜。
6、 如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(4)中所用的大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
7、 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)分离纯化的方法是将离心得到的上清液上柱，用5%~10%乙醇1~4柱体积冲洗，再用30%~95%乙醇18 30柱体积洗脱，得洗脱液。
8、 如权利要求2所述的方法，其特征在于，将洗脱液缩至浓度 "，调节pH至l 2,冷藏放置过夜，再经离心，沉淀减压干燥，得黄柏总生物碱。
全文摘要
本发明提供了一种提取黄柏总生物碱的方法，其包括乙醇提取，以及苯乙烯型大孔树脂分离纯化等步骤。本发明的方法通过调节洗脱液浓缩的浓度和pH值，获得不同含量的黄柏总生物碱，从而满足了不同药物产品制备的需求。
文档编号A61K36/756GK101461858SQ20071017981
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月18日 优先权日2007年12月18日
发明者刘丽梅, 刘凤华, 王瑞海, 许剑琴, 琳 陈 申请人:北京农学院