一种提取鹰爪花总生物碱的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，涉及一种提取鹰爪花总生物碱的方法。
【背景技术】
[0002]狭瓣鹰爪花为番荔枝科鹰爪花属植物，是海南特有植物。在民间，海南狭瓣鹰爪花作药用植物已有很长历史，具有清热解毒、消炎止痛的作用，常用作治疗疟疾和头颈部淋巴结核。番荔枝科植物富含抗肿瘤活性成分而被受国内外学者关注。研宄表明，鹰爪花富含多种生物碱类，具有广阔的应用价值。
[0003]目前，国内常规的提取生物碱的方法为渗漉法、回流法等。这种方法普遍存在有机溶剂耗费量大、生产周期长、提取率低、反应条件苛刻、对环境污染严重等问题。所以，探索一条操作简单、生产效率高的生产工艺至关重要。
[0004]微波是一种最新发展起来的技术。它的原理是基于微波的高能作用，加热细胞内液态水气化产生压力，冲破细胞膜和细胞壁形成微小孔洞，使溶剂进入细胞内，从而增大有效成分的溶出，提高得率。
[0005]迄今，对酶发酵与微波联合提取鹰爪花总生物碱的研宄国内外未见报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种工艺简单、提取效率高、重现性好、污染小、成本低的提取鹰爪花总生物碱的方法。
[0007]本发明包括以下步骤:
a.将鹰爪花茎切成0.5~lcm的小段，烘干，粉碎过40目筛；
b.加入相当于原料1~3%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入0.5~1倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于40~50°C发酵3~5天；
c.将发酵好的原料加入4~6倍的60~70%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为600~800W，萃取时间为40~100min，过滤；
d.滤液采用微滤膜过滤，减压浓缩至原体积的1/4~6，上大孔吸附树脂柱，4~6BV的
0.5~1.0mol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱。
[0008]步骤d中所述的微滤膜为Al2O3,孔径0.2Mm。
[0009]步骤d中所述的大孔树脂型号为X-5、D-72、D_101。
[0010]本发明的有益效果在于:(1)本发明利用酶发酵法破坏原料的细胞壁结构，再结合微波的高能作用，降低目标物与样品的结合力，增大了目标物的溶出率；(2)采用微滤技术对粗提液进行处理，有效地除去了粗提液中悬浮杂质，而且微滤操作简单，常温下进行，生产周期短，省去了大量乙醇溶剂浓缩蒸发过程；(3)本发明工艺简单、提取效率高、重现性好、污染小、成本低，适合大规模生产。
[0011]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0012]【具体实施方式】:
实施例1:
将鹰爪花茎切成0.5cm的小段，烘干，粉碎过40目筛；加入相当于原料1%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入0.5倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于40°C发酵3天；将发酵好的原料加入4倍的60%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为600W，萃取时间为60min，过滤；滤液采用微滤膜(Al2O3,0.2Mm)过滤，减压浓缩至原体积的1/4，上D-101大孔吸附树脂柱，4BV的0.5mol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱，含量为56.4%。
[0013]实施例2:
将鹰爪花茎切成0.5cm的小段，烘干，粉碎过40目筛；加入相当于原料3%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入I倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于50°C发酵5天；将发酵好的原料加入6倍的70%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为800W，萃取时间为90min，过滤；滤液采用微滤膜(Al2O3,0.2Mm)过滤，减压浓缩至原体积的1/6，上D-72大孔吸附树脂柱，6BV的0.8mol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱，含量为61.1%。
[0014]实施例3:
将鹰爪花茎切成Icm的小段，烘干，粉碎过40目筛；加入相当于原料2%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入0.8倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于45°C发酵4天；将发酵好的原料加入5倍的65%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为700W，萃取时间为lOOmin，过滤；滤液采用微滤膜(Al2O3,0.2Mm)过滤，减压浓缩至原体积的1/5，上X-5大孔吸附树脂柱，5BV的lmol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱，含量为54.9%。
【主权项】
1.一种提取鹰爪花总生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤: a.将鹰爪花茎切成0.5~lcm的小段，烘干，粉碎过40目筛； b.加入相当于原料1~3%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入0.5~1倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于40~50°C发酵3~5天； c.将发酵好的原料加入4~6倍的60~70%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为600~800W，萃取时间为60~100min，过滤； d.滤液采用微滤膜过滤，减压浓缩至原体积的1/4~6，上大孔吸附树脂柱，4~6BV的0.5~1.0mol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱。2.根据权利要求1所述的一种提取鹰爪花总生物碱的方法，其特征在于，步骤d中所述的微滤膜为Al2O3,孔径0.2Mm。3.根据权利要求1所述的一种提取鹰爪花总生物碱的方法，其特征在于，步骤d中所述的大孔树脂型号为X-5、D-72、D-101。
【专利摘要】本发明涉及一种提取鹰爪花总生物碱的方法。其处理步骤包括：a.将鹰爪花茎切成0.5~1cm的小段，烘干，粉碎过40目筛；b.加入相当于原料1~3%的纤维素酶，搅拌，置于发酵桶中，加入0.5~1倍的醋酸/醋酸钠缓冲溶液，密封，于40~50℃发酵3~5天；c.将发酵好的原料加入4~6倍的60~70%的乙醇溶液，置于微波萃取仪中，设置微波功率为600~800W，萃取时间为60~100min，过滤；d.滤液采用微滤膜过滤，减压浓缩至原体积的1/4~6，上大孔吸附树脂柱，4~6BV的0.5~1.0mol/L氨水乙醇溶液洗脱，至流出液无生物碱反应，减压浓缩，干燥，得鹰爪花总生物碱。本发明操作简单，提取效率高，适合工业化大规模生产。
【IPC分类】A61K36/185
【公开号】CN104906155
【申请号】CN201510270039
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月26日