专利名称：一种厚朴生物碱及其提取方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于有机化学技术领域，涉及一种厚朴活性成分生物碱的提取方法及其作 为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用。
背景技术：
糖尿病是一种以糖代谢紊乱为主要症状群的渐进性的内分泌病，基本病理生理是 体内胰岛素分泌功能相对不足或绝对不足或胰岛素受体功能异常等原因，引起代谢紊乱， 包括糖、蛋白质、脂肪、水及电解质等。一般表现为高血糖、糖尿及高脂血症，严重病例可发 生酮性酸血症，甚至循环衰减和昏迷而危及生命。糖尿病共分四类，其中最多的II型糖尿 病占糖尿病总数的90-95%。糖尿病的治疗方法主要有直接补充胰岛素、刺激胰岛分泌胰岛 素、增加对胰岛素的利用、调节餐后血糖等方法。通过抑制小肠的α-葡萄糖苷酶活性就可 以降低餐后血糖的峰值，减少高血糖对机体的损害，能有效预防糖尿病的并发症。目前机理 为抑制α -葡萄糖苷酶活性的药物有阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖，市场呈上升趋势。厚朴是一种常用中药，为木兰科木兰属植物凹叶厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils)的干皮、枝皮及根皮。分布较广，产于浙江、江西湖南、湖北、四川、云南、 贵州、陕西、甘肃等地。其性温，味苦、辛，具有温中下气，化湿引滞功效，用于消炎灭菌、胸 腹胀满、肠梗阻、痰饮喘满等症，在临床应用上占有十分重要的位置。厚朴中已发现的化 学成分主要有厚朴酚、和厚朴酚、挥发油和生物碱，其厚朴酚与和厚朴酚是主要的成分， 也是目前研究得比较多的成分。其抑菌活性可用于口腔护理，如公开号为CN101321513， CN101321560, CN1723011, CN1318362, CN101222909 的专利报道了在口腔方面的应用，到目 前为止，还未见关于厚朴中具有α -葡萄糖苷酶抑制活性成分的报道。本发明对厚朴提取物的α -葡萄糖苷酶抑制活性研究，通过活性追踪发现一类生 物碱具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，波谱分析鉴定为一类异喹啉类生物碱，并对其 提取工艺进行了研究。根据其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，这类生物碱可能在防治糖尿 病及其并发症、肥胖和治疗病毒性感冒方面有较好的应用。
发明内容
本发明首次从分布广、资源丰富的厚朴中发现了具有抑制α -葡萄糖苷酶的活性 成分生物碱。所采取的方法是利用具有离子交换功能的离子交换树脂或大孔阳离子交换树 脂作为吸附剂来选择性吸附有效成分生物碱，也可以用溶剂萃取的方法。本发明提取工艺 简单，成本低，无环境污染，安全无毒，利于规模化提取生产。得到的总生物碱可作为α-葡 萄糖苷酶抑制剂，可能在防治糖尿病及其并发症、肥胖和治疗病毒性感冒方面有较好的应 用。为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案1)提取以厚朴的根或/和皮为原料，用酸水溶液常温或加热提取；2)吸附提取液通过强酸型或弱酸型阳离子交换树脂，活性成分被吸附在树脂上；3)洗脱先用水洗树脂柱，然后用氨水/醇溶液洗脱，浓缩干燥得到总生物碱。提取用的溶液中酸的浓度范围介于0.01-1%，提取液用量的总体积为厚朴原料重 量的5-15倍，加热提取温度为30-100°C;洗脱用的乙醇或甲醇的浓度，其范围介于5-99%， 氨的含量介于0. 5% -15%;碱化用的碱为氨水或氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙或碳酸钠 或碳酸钾。所用的强酸型或弱酸型离子交换树脂，可采用只具有离子交换功能的树脂如 001 X 7，或具有吸附和交换功能的大孔强酸型阳离子交换树脂，如D72树脂，也可使用弱酸 型大孔交换树脂。总生物碱中主要成分为木兰花碱，鹅掌楸碱，蕃荔枝碱，罗默碱和Lysicamine等 组成。总生物碱可直接应用，或者加入可食用的辅料，如淀粉、微晶纤维素、糊精、蔗糖、乳 糖、维生素C、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种，制备成为片剂、胶囊剂或冲剂等，用 作α-葡萄糖苷酶抑制剂，作为相关的药品或功效食品使用。根据α-葡萄糖苷酶抑制剂 的特点，可能用于防治糖尿病及其并发症、防治肥胖症和治疗病毒性感冒。本发明的特点在于，首次从资源巨大的厚朴中发现了具有α-葡萄糖苷酶抑制活 性的生物碱，提取制备工艺简单，易于操作，成本低。
具体实施例方式下面通过实施例详细说明本发明的技术方案，但是不局限于所列举的例子。实施例1厚朴树皮10kg，粉碎后用60L 0. 05%硫酸水渗漉提取。提取液通过D72大孔阳离 子交换树脂柱(柱体积6L)，20L去离子水洗后用的氨/乙醇水(含乙醇70% )溶液 30L洗脱。洗脱液蒸干，得到总生物碱30g，收率0.3%。取总碱4. 0g，通过硅胶柱层析(氯仿_甲醇梯度洗脱)分离纯化得到五个化 合物，通过质谱、核磁共振碳谱和氢谱鉴定为木兰花碱，鹅掌楸碱，蕃荔枝碱，罗默碱和 Lysicamine0取厚朴总碱50g，加入淀粉3000g，微晶纤维素30g，以50%乙醇制粒，压片得片剂， 每片0. 6g，其中含总碱10mg，相当于厚朴皮2g。上述厚朴提取物的α -葡萄糖苷酶抑制活性的测试α -葡萄糖苷酶溶液用Wister大鼠的空肠制备，然后测定蛋白浓度。将厚朴提 取物用水配制成0. 05g/ml的溶液备用。样品组加空肠勻浆50 μ 1、蔗糖50 μ 1、备检样品 50 μ 1 (终浓度为5 μ g/ μ 1)、PBS 50 μ 1。阳性对照用拜唐苹，终浓度为0. 5 μ g/ μ 1。另外设 置一个空白组，其中的糖苷酶被高温灭活。标准组其他成分相同，只是不加样品或拜糖苹。 上述每组平行作7管，准备完毕后37°C孵育25分钟。孵育结束后加入0. lmol/L的Na2CO3 200 μ 1中止反应。每管取样50 μ 1，按血糖检测试剂盒提供的方法测定所生成葡萄糖的量。
抑制率=〔1-(拜糖苹组葡萄糖浓度-空白组葡萄糖浓度)/ (标准组葡萄糖浓 度-空白组葡萄糖浓度)〕X100% 根据上面公式，计算得到实施例1各化合物的α -葡萄糖苷酶抑制率分别为番荔 枝碱(60% )，鹅掌楸碱(46% )，罗默碱(51% ) ,Lysicamine (49% )，木兰花碱为(51% )。总碱为65%。
权利要求
一种厚朴生物碱，其特征是包含木兰花碱，鹅掌楸碱，蕃荔枝碱，罗默碱和Lysicamine的总生物碱。
2.权利要求1所述的厚朴生物碱的提取方法，包括如下步骤1)提取以厚朴树皮为原料，用酸水溶液常温或加热提取；2)吸附提取液通过强酸型或弱酸型阳离子交换树脂，活性成分被吸附在树脂上；3)洗脱先用水洗树脂柱，然后用氨水/醇溶液洗脱，浓缩干燥得到厚朴总生物碱。
3.根据权利要求2所述的厚朴生物碱的提取方法，其特征是提取用的溶液中酸的浓 度范围介于0. 01-1 %，提取液用量的总体积为厚朴原料重量的5-15倍，加热提取温度为 30-100°C ；洗脱用的乙醇或甲醇的浓度，其范围介于5-99%，氨的含量介于0. 5% -15% ；碱 化用的碱为氨水或氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙或碳酸钠或碳酸钾。
4.根据权利要求2所述的厚朴生物碱的提取方法，其特征是所用的强酸型或弱酸型 阳离子交换树脂为只具有离子交换功能的树脂如001 X 7，或具有吸附和交换功能的大孔强 酸型阳离子交换树脂如D72树脂或弱酸型大孔交换树脂。
5.权利要求1所述的厚朴生物碱在生产与α-葡萄糖苷酶抑制剂相关的药物或食品制 造中的用途。
6.权利要求5所述的厚朴生物碱的用途，其特征是直接应用或者加入可食用的淀粉 或/和微晶纤维素或/和糊精或/和蔗糖或/和乳糖或/和维生素C或/和柠檬酸或/和 亚硫酸钠辅料，制备成片剂或胶囊剂或冲剂的药物或功效食品。
全文摘要
本发明属于有机化学技术领域，涉及一种厚朴活性成分生物碱的提取方法及其作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用。本发明厚朴生物碱包含木兰花碱、鹅掌楸碱、蕃荔枝碱、罗默碱和Lysicamine的总生物碱；以厚朴树皮为原料，用酸水溶液常温或加热提取；提取液通过强酸型或弱酸型阳离子交换树脂，活性成分被吸附在树脂上；先用水洗树脂柱，然后用氨水/醇溶液洗脱，浓缩干燥得到厚朴总生物碱。本发明具有提取制备工艺简单、易于操作、成本低等特点。
文档编号A61K36/575GK101966228SQ20091006012
公开日2011年2月9日 申请日期2009年7月27日 优先权日2009年7月27日
发明者喻凯, 王明奎, 瞿庆喜 申请人:中国科学院成都生物研究所