详述。
[0032]实施例1
1、萝芙木生物碱的浸提:酸醇液超声波辅助浸提
将粉碎过40目的100g云南萝芙木根粉，用酸性乙醇总体料液比1:20进行超声波辅助浸提2次。第一次加入70%的酸乙醇水(含1%的冰醋酸)浸提液10L，常温下先浸提20min后，超声辅助浸提20min，超声功率250W，频率40kHz。再静置浸提20min，常温常压下用合成纤维滤袋过滤。滤渣用1L浸提液重复上述步骤浸提I次，合并滤液备用。
[0033]需要说明的是，上述浸提方式是采用超声辅助浸提，也可以其他浸提方式，例如渗漉法、回流法。另外，浸提液的选择可以是其他极性有机溶剂如:除乙醇以外，还可以选择甲醇或丙酮等。
[0034]2、超滤:去除浸提液中大分子物质等杂质
使用超滤膜超滤步骤I的萝芙木浸提液，最终超滤浓缩液用适量酸性乙醇冲洗1-2次，保留超滤透过液(简称超滤液)约20L用于后续纳滤浓缩。选择超滤膜材料为聚偏氟乙烯(PVDF)、截留分子量为10,000 Dalton。工作压力为0.7-0.8 MPa，工作温度28-35 °C。超滤液中大分子物质及固形物去除率大于95%，超滤液透光率大于98%。经色谱检测，超滤液中生物碱活性成分利血平含量与浸提液的基本保持一致。
[0035]3、纳滤:主要是浓缩超滤液，得到高浓度的萝芙木总生物碱浓缩液，便于后续干燥处理。
[0036]将步骤2所得超滤液约20L进行纳滤。纳滤膜的材质为聚酰胺(PA)，截留分子量为250Da。膜组件运行压力为2.0-2.5 M Pa，温度范围为28_35°C。浓缩至原液的1/5左右，得到纳滤浓缩液约4.0L，纳滤透析液约16L。对纳滤透析液中利血平进行色谱检测，其含量几乎为零。说明生物碱95%以上截流在浓缩液中。
[0037]4、总生物碱的制备:
将步骤3所得纳滤浓缩液，温度55-60 °C减压旋转蒸发至干，将乙醇回收，得到总生物碱。测得总生物碱的得率在1.31%，利血平含量0.087mg /g ;使用常规方法制备的总生物碱的得率为0.79%，利血平含量0.065mg /g。
[0038]实施例2
将粉碎过40目的2000g云南萝芙木根、茎混合粉材，按料液比1:20分3次加入50%的酸乙醇水(含0.5%的盐酸)浸泡20min，超声辅助浸提20min，静置浸提20min。过滤合并浸提液约39L备用。
[0039]将上述萝芙木浸提液运行超滤工艺，超滤膜材质为聚醚砜(PES)，截留分子量为20, 000 Dalton。工作压力0.5_0.6 M Pa，使用冷循环水使工作温度为室温。浓缩固形液至原料液的20%左右时，超滤液的透光率大于98%。取超滤液进行纳滤，纳滤膜材质为聚酰胺(PA)，截留分子量为250Da，工作压力为1.5-2.0MPa，使用冷循环水使工作温度保持室温。当纳滤浓缩倍数约为3-4倍时，收集纳滤浓缩液，温度50-60 °C下减压旋转蒸发回收乙醇，将最终的蒸馏浓缩液50-60°C真空干燥得到总生物碱。
[0040]测得总生物碱的得率在1.12%，利血平含量0.074 mg /g，而使用常规方法制备的总生物碱的得率为0.55%，利血平含量0.053% mg /g。
[0041]实施例3
将粉碎过40目的2000g云南萝芙木叶，先用少量水湿润，按料液比1:20分3次加入80%的酸甲醇水(含0.25%的硫酸)浸泡20min，超声辅助浸提20min，静置浸提20min。过滤合并浸提液约40L备用。
[0042]将萝芙木浸提液运行超滤工艺，超滤膜材质为聚醚砜(PES)，截留分子量为10，000Dalton。工作压力0.5-0.6MPa，工作温度为自然室温。浓缩固形液至原料液的15%时，取超滤液进行纳滤。纳滤膜材质为磺化聚醚砜(SPES)，截留分子量为200Da。工作压力为1.5-2.0MPa，使用冷循环水使工作温度保持室温。浓缩至原液的1/5，此时膜通量降低至初始时的2/3，收集纳滤浓缩液，55-60 °C减压蒸馏回收乙醇，所得浓缩浆烘箱50 °C避光干燥得到总生物碱。
[0043]测得总生物碱的得率在0.152%，而使用常规方法制备的总生物碱的得率为0.074%。因叶片中利血平含量低，故未测定。
[0044]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故但凡依本发明的权利要求和说明书所做的变化或修饰，皆应属于本发明专利涵盖的范围之内。
【主权项】
1.一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)萝芙木生物碱浸提液的获得:萝芙木根、茎或叶粉碎，常温下进行浸提，过滤得到萝芙木生物碱浸提液； (2)超滤:运行膜工艺，将步骤(I)中的萝芙木生物碱浸提液使用超滤膜超滤，以去除原浸提液中的杂质，该杂质中主要包括大分子物质；保留超滤透过液用于后续纳滤浓缩，该超滤透过液简称超滤液； (3)纳滤:运行膜工艺，将上述超滤液进行纳滤，得到高浓度的萝芙木总生物碱。
2.根据权利要求1所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:进一步包括步骤(4)总生物碱的制备:收集纳滤浓缩液，减压回收有机溶剂，干燥后得到总生物喊。
3.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，浸提所需浸提液采用酸性中等极性有机溶剂，即可为酸性乙醇、甲醇或丙酮等；且萝芙木与浸提液料液比可为Ig:15?20mL。
4.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，浸提方式采用超声辅助浸提和/或静态浸提，并可适当搅拌；超声辅助浸提时，先静置浸提20?30min，再超声辅助处理20?30min，再静置20?30min浸提，超声处理的功率为250-500W，频率为40kHz ;静态浸提时为12_24h。
5.根据权利要求3所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，酸性极性有机溶液为含体积比50%-80%的乙醇或甲醇或丙酮，含体积比0.2-1.0%的醋酸、柠檬酸、盐酸或硫酸，其余为水。
6.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(2)中，所述超滤膜截留分子量为10000-60，000 Dalton ;工作压力为0.5-1.0MPa ；工作温度为10-45 °C。
7.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(2)中，超滤膜材料为陶瓷膜或有机膜，有机膜具体包括聚偏氟乙烯PVDF、聚醚砜PES、聚丙烯PP、聚乙烯PE、聚砜PS、聚丙稀腈PAN、聚氯乙稀PVC中的一种。
8.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，纳滤选择截留分子量200-500Da的复合纳滤膜或无机材料纳滤膜；钠滤中的膜组件运行压力为1.0-3.5 MPa，温度范围为10_45°C。
9.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，纳滤所用纳滤膜材质包括聚酰胺PA、磺化聚醚砜SPES、磺化聚砜SPS和聚乙烯醇PVA有机膜中的一种。
10.根据权利要求1或2所述的一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，其特征在于:所述步骤(4)中，干燥方法采用真空干燥或喷雾干燥或烘箱干燥中一种；干燥过程避光，温度40-60。。。
【专利摘要】本发明公开了一种膜法提取萝芙木总生物碱的方法，包括如下步骤：（1）萝芙木生物碱浸提：萝芙木根、茎或叶粉碎，常温下进行浸提，过滤得到萝芙木生物碱浸提液；（2）超滤：运行膜工艺，使用超滤膜过滤萝芙木浸提液，以去除原浸提液中大分子物质杂质；保留超滤透过液用于后续纳滤浓缩，该超滤透过液简称超滤液；（3）纳滤：运行膜工艺，将上述超滤液进行纳滤，得高浓度的总生物碱浓缩液，干燥即得萝芙木总生物碱。本方法改变了传统的生物碱“碱沉+有机溶剂萃取”分离得到生物碱的方式，利用膜技术达到除杂和浓缩富集制备总生物碱的目的，工艺简捷，不破坏和污染活性成分，萝芙木总生物碱和活性成分利血平的提取率高。
【IPC分类】A61K36-24
【公开号】CN104825510
【申请号】CN201510206361
【发明人】龙绛雪, 严滨
【申请人】厦门理工学院
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月28日